检测分析
比色法测定不同产地黑豆皮中花青素含量
张泽生1，林纪伟1，2，王志平3，於洪建4，刘岱琳2，
*
（1.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；2.中国人民武装警察部队医学院生药教研室，天津300162；3.郑州人民医院药剂科，河南郑州450012；4.天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津300457）
摘
要：利用紫外分光光度法测定不同产地的黑豆皮中花青素含量。以飞燕草素为对照品，以1%盐酸甲醇为显色系
统，采用紫外分光光度法在520nm 处建立黑豆皮中花青素含量的测定方法。标准曲线：A =0.0943x ，r=0.9996（n＝5），该标准曲线在浓度为1.7g/mL~8.5g/mL 的范围内线性良好，
平均回收率为98.3%。测试结果显示不同区域所产黑豆皮中花青素含量差异较大，以安徽、内蒙所产黑豆皮中花青素含量较高。本方法简便，快速，结果准确，可靠，适于黑豆皮中花青素成分的质量控制。
关键词：黑豆皮；花青素；含量测定；比色法
pinoDetermination of Anthocyanidin from the Seed Hulls of Black Soybean from Varied Areas Using
Colorimetry
ZHANG Ze-sheng 1,LIN Ji-wei 1,2,WANG Zhi-ping 3,Yu Hong-jian 4,LIU Dai-lin 2,*
(1.College of Food Engineering and Biology Technology,Tianjin University of Science &Technolog,Tianjin 300457,China;2.Department of Pharmacognosy,Medical College of Chine People's Armed Police Forces,Tianjin 300162,China;3.Pharmaceutical Preparation Section of Zhengzhou People's,Zhengzhou 450012,Henan,China;4.Tianjin JF-Natural Products R&D Ltd.,Tianjin 300457,China)
Abstract ：To detect the anthocyanidin from the eds hulls of black soybean in different area.A spectrophotometric method to measure the concentration of anthocyanidin from the ed hulls of bla
ck soybean was established ，which u delphinidin as the standard,anthocyanidin was measured with 1%HCl acid methanol solution developing agent and detected at 520nm wavelength.The linear curve was A =0.0943x （r=0.9996）with the linear in the range of 1.7g/mL -8.5g/mL for anthocyanidin.The results showed that the contents of anthocyanidin in the ed hulls of black soybean from Anhui and Neimenggu were higher than from others.The method was simple,rapid,reliable and accurate ．
Key words ：ed hulls of black soybean ；anthocyanidin ；determination ；colorimetry
作者简介：张泽生（1956—），男（汉），教授，博士，主要从事食品添加剂与营养研究。
*通信作者：刘岱琳（1973—），副教授，研究方向：天然产物活性成分及产业化工业研究。
黑豆是我国一种传统种植的农作物，其具有悠久的食用和药用历史，自古以来民间就有用黑大豆补血、
活血和乌发养颜的记载。黑豆皮，又称乌衣，富含大量花青素，主要以飞燕草素、矢车菊素为主[1]，具有抗氧化活性[2]、抑制诱变[3-4]、抗炎[5]、预防癌症以及延缓
衰老等多种保健功效[6]，一直是天然食用添加剂和健康保健食品的原料。
我国是农业大国，从南到北很多省份都种植黑豆，资源丰富，可谓世界各国之首[6]。在我国的北方，如天津市、河北省、山东省都有丰富的黑豆产量，但是由于产地不同，黑豆皮中的功效成分差异较大，因此本文在文献工作基础上，利用比色法测定不同产地黑豆皮中花青素的含量，从而进一步控制黑豆皮的质量，为其在食品添加剂和保健食品中的应用提供参考。
食品研究与开发
patchF ood Rearch And Development
2012年5月第33卷第5期
143
1材料与方法
1.1材料、试剂和仪器设备
1.1.1材料
黑豆皮原料：黄仁黑豆皮，产自湖北；青仁黑豆皮，产至东北，青扁黑豆皮，产自安徽；市售黑豆皮，天诛忍者
产自山东滨州；内蒙黑豆皮，产自内蒙古。所有试验黑豆皮原料由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提供。
1.1.2试剂
飞燕草素标准品：挪威Polyphenols公司；无水乙醇、甲醇：均为分析纯，天津康科德化工有限公司；盐酸：天津大茂化工有限公司。
1.1.3仪器设备
UV-2401PC：日本岛津公司；HZQ-QX型电动振荡机：东联电子技术开发有限公司。
1．2方法
mtm
1．2．1检测波长的确定
用1%盐酸甲醇溶液配制少量黑豆皮提取液，用UV-2401PC紫外可见分光光度计200nm~600nm的范围内对色素进行扫描，得黑豆皮提取液的吸附光谱图。同时对标准品溶液在200nm~600nm的范围内进行扫描，得到飞燕草素标准品溶液的吸附光谱图。
1.2.2标准曲线的测定
1.2.2.1标准溶液的配制
精密称取飞燕草素对照品适量，用1%盐酸甲醇溶液溶解，定容在100mL容量瓶中，配制成85.211μg/mL 的标准品储备液，备用。
1.2.2.2标准曲线的测定
分别精密吸取2、4、6、8、10mL标准品储备液转移至100mL容量瓶中，用1%盐酸甲醇溶液稀释并且定容至刻度。在520nm下测定吸光度，测定标准曲线。
1.2.3黑豆皮提取物样品溶液的配制
准确称取黑豆皮原料5g加入浸提液浸泡过夜，过滤，测定其体积为V。精密吸取1mL样品浸提液，置1000mL棕色容量瓶中，用1%的盐酸甲醇定容到刻度，以同批1%盐酸甲醇溶液作空白，置520nm处测定其吸收度。花青素含量利用1.2.2.2中的标准曲线进行测定。
pp是什么意思1.2.4黑豆皮中花青素提取条件优化
1.2.4.1提取溶剂的选择
准确称取黑豆皮5g，共4份，分别置于100mL三角瓶中，分别加入甲醇、95%乙醇，1%盐酸甲醇50mL 和1%盐酸乙醇各50mL，浸提8h。按照1.2.3项下配制方法进行样品制备，测量其吸光度。通过对甲醇、95%乙醇、含有体积比例为1%盐酸的甲醇溶液和95%乙醇溶液进行考察，确定最佳提取溶剂。
1.2.4.2提取溶液盐酸用量的选择
准确称取黑豆皮5g，共5份，分别置于100mL三角瓶中。分别加入甲醇50mL、0.5%盐酸甲醇溶液（体积分数）50mL、1%盐酸甲醇溶液（体积分数）50mL、1.5%盐酸甲醇溶液（体积分数）50mL、2%盐酸甲醇溶液（体积分数）50mL，浸提8h。按照1.2.3项下配制方法进行样品制备测量其吸光度。
1.2.4.3提取时间的选择
准确称取黑豆皮5g，共6份，分别置于100mL三角瓶中，精密加入1%盐酸甲醇50mL。6份样品，密封状态下进行提取，提取时间分别为1、2、4、6、8、10h。然后按照1.2.3项下配制方法进行样品制备，测量其吸光度。
分手了咋办1.2.4.4料液比的选择
准确称取黑豆皮5g，共5份，分别置于100mL三角瓶中。分别加入1%盐酸甲醇10、25、50、75、100
mL。密闭状态下进行浸提8h。然后按照1.2.3项下配制方法进行样品制备，测量其吸光度。
1.2.5加样回收率的测定
精密称取已知含量的供试品原料5g，准确加入与供试品中花青素含量相同的飞燕草素对照品，按照1.2.4中确定的提取方法进行提取，按1.2.3项下确定的方法准确测定，计算平均回收率。
1.3样品的含量测定
分别准确称取不同产地的黑豆皮5g，按照1.2项下确定的最优提取方法进行提取，按照1.2项下的含量测定方法进行含量测定。每个产地的黑豆皮平行测定3次。
2试验结果
2.1检测波长的确定
图1a是黑豆皮提取物在1%盐酸甲醇溶液中的吸收光谱，从光谱中可以看出黑豆皮提取物分别在520、362、279、205nm处有吸收峰，而520nm为花青素类色素的特征吸收峰。图1b是标准品飞燕草素在1%盐酸甲醇溶液中的吸收光谱，从光谱中可以发现其在520、360、280nm处有吸收峰，综合分析后，选择520nm作为黑豆皮提取物中花青素吸收度的检测波长。
2.2标准曲线的测定及方法学考察
2.2.1标准曲线的测定
按照1.2.2.2项下方法进行测定，结果如图2所示。
检测分析
张泽生，等：比色法测定不同产地黑豆皮中花青素含量144
标准曲线为A =0.0943x ，（x 表示为测试溶液的浓度，单位为μg/mL ），r=0.9996（n＝5），该标准曲线在浓度为1.7μg/mL~8.5μg/mL 的范围内线性良好。2.2.2精密度的测定
吸取标准品溶液1mL ，
按1.2.2.2项下的方法进行精密度测定，RSD=0.21%（n=6），本方法的精密度良好。2.2.3稳定性的测定
吸取供试品溶液1mL ，
分别在2、4、6、8、10h 后测定吸光度值。试验结果表明：在0~10h 内稳定性良好，RSD=0.23%。2.
2.4重现性试验
准确称取同一产地的黑豆皮5份，每份5g 。按1.2.4项下确定的方法进行提取，再按1.2.3项下方法
进测定，实验结果显示，该方法重现性良好，RSD 为0.74%（n=5）。
2.3黑豆皮中花青素提取条件优化2.
3.1提取溶剂的选择
不同溶剂的浸提结果见表1。
表1测试结果显示采用1%的盐酸甲醇溶液作为提取溶剂时，吸光度最高，说明具有很好的提取效果。因此本试验采用1%的盐酸甲醇作为提取溶剂。2.3.2提取溶剂酸度选择
不同盐酸浓度的浸提结果见表2。
测试结果如表2，在相同提取时间条件下，随着盐酸浓度的增加，测试溶液的吸光度值也在增高。说明酸度的增加会提高提取收率。但是从1%~2.5%的酸度变化，提取溶液的吸光度值增加并不明显，因此确定提取溶液盐酸浓度为1%。2.3.3提取时间的选择
不同时间的浸提结果见表3。
如表3所示，浸提时间达到8h 时，吸光度值达到最高，而且随着提取时间的增加，吸光度值达到稳定。因而确定浸提时间为8h 。2.3.4料液比的选择
不同料液比的浸提结果见表4。
通过对不同料液比的考察，结果如表4所示，料液比为1∶10时，吸光度值达到最高，因而确定最佳料液比为1∶10。
2.4加样回收率的测定
按照1.2.5项下确定的方法准确测定，平均回收率
表1不同溶剂的浸提结果
Table 1Extraction using different solution
不同溶剂
甲醇95%乙醇1%盐酸甲醇1%盐酸的95%乙醇吸光度
0.048
0.035
0.364
0.146
表2不同盐酸浓度的浸提结果
Table 2Extraction using different content HCl
盐酸浓度/%
00.512 2.5吸光度
0.072
0.318
0.364
0.374
0.391
浸提时间/h 2468吸光度
0.238
0.252
0.323
0.364
100.365
120.364
表3不同时间的浸提结果
Table 3Extraction using different time
表4不同料液比的浸提结果
Table 4Extraction using different volume solution 料液比1∶51∶7.51∶101∶151∶20吸光度
0.093
0.149
初三数学总复习
0.364
0.182
0.183
0.90.80.70.60.50.40.30.20.10.0
吸光度A
浓度/（μg/mL ）
图2标准曲线的测定
Fig.2Detection of linear curve
2.0001.5001.0000.5000.000
200.0
300.0
400.0500.0
600.0
A b s
Wavelength/nm
（a ）黑豆皮提取物的紫外光谱5004003002001000m A U
200
250
300350400450500550nm
（b ）标准品的紫外光谱
图1黑豆皮提取物和标准品的紫外吸收图谱
blous
Fig.1The UV spectrum of Black Soya Bean Extract and
delphinidin 12.57/1.00（下转第156页）
检测分析
张泽生，等：比色法测定不同产地黑豆皮中花青素含量
145
555555555555555555555555555555555555555555555555为98.34%，RSD=2.32%（n=5）。2.5不同产地黑豆皮中花青素的含量
按照1.2.4项下确定的提取方法进行含量测定，结果如表5所示。分析结果如表5所示，市售的黑豆皮其花青素含量相对较低，而安徽产的青扁黑豆皮花青素含量相对较高。
3小结与结论
1）对国内不同产地的黑豆皮原料进行了花青素含量测定，测试结果显示不同产地的黑豆皮原料中花青素的含量差异较大，品种之间以安徽产的青扁黑豆皮花青素含量相对较高，虽然市售黑豆皮的含量相对较低。
2）本文利用紫外分光光度法测定不同区域的黑豆皮中花青素的含量，该方法简便，快速，结果准确，可
靠，适于黑豆皮中花青素成分的质量控制。参考文献：
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收稿日期：2011-10-16
表5不同产地黑豆皮中花青素的含量测定
Table 5Detection of anthocyanidin of black soybean from
different varied area
名称产地含量/%市售黑豆皮山东 3.61青扁黑豆皮安徽 5.59青仁黑豆皮东北 5.03黄仁黑豆皮湖北 4.99内蒙黑豆皮
considerable内蒙古
5.58
（上接第145页）
3结论
酶的种类及其复合配比、酶解温度对氨基态氮得率的影响较显著，酶解的最佳工艺参数为：碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶比例为2∶1、酶解温度55℃、酶解时间6.5h 、pH 为8，在此条件下氨基态氮得率达72%以上。参考文献：
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收稿日期：2011-10-06
生物工程
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