荧光定量pcr仪计量校准结果的影响因素分析及控制

更新时间:2023-07-07 09:32:43 阅读: 评论:0

国内统一刊号CN31-1424/TB 2019/1 总第271期
2020/1 总第278期0 引言fuc
sugiyama根据国家卫健委发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)》[1],实时荧光RT-PCR 检测被列为确诊病例的两种方法之一,该方法由于检测时间短、成本低等特点[2],已成为应用最广的确诊新型冠状病毒的方法。用实时荧光RT-PCR 法进行疑似病例确诊需要检测到患者体内含有新型冠状病毒的特征基因,而特征基因的检测有两个重要的制约性条件:一是新型冠状病毒核酸检测试剂盒,二是检测结果准确可靠的荧光定量PCR 仪(以下简称PCR 仪)。为确保PCR 仪检测结果的准确可靠,2015年发布了JJF 1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》[3]。上海市计量测试技术研究院是全国最早开展PCR 仪计量校准的单位之一,根据多年的经验积累,现就荧光定量PCR 仪校准过程的影响因素进行探讨。
1 温度部分校准的影响因素the mechanic
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温度检测计量器具通常由15个精密温度传感器、数据采集分析模块组成,测温范围为0~120 ℃,
七夕快乐用英语怎么说荧光定量PCR仪计量校准结果的影响因素分析及控制
梁文 罗超 盛舒瑶 / 上海市计量测试技术研究院
摘 要 分析了荧光定量PCR 仪计量校准过程中,温度检测部分和核酸样品定量检测部分的影响因素和控制方法,为校准实验室减小试验误差,提供准确可靠的荧光定量PCR 仪计量校准结果提供参考。关键词 定量PCR 仪;温度检测;核酸检测
测量不确定度U = 0.10 ℃(k = 2)。该装置可实现静态温度测定、动态温度跟踪和多通路检测,每个探头的实时采集数据以曲线图格式保存在磁盘中,并通过软件解码处理[4]。该装置用于对PCR 仪的温度示值误差、温度均匀度、平均升降温速率、样本示值误差等温度指标进行校准。
温度探头贴合性的影响:测温探头的外观应该和PCR 反应孔的外观一致,尺寸误差小于1 mm。市场上在售PCR国家对外汉语网
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kindl仪的厂家和型号众多,虽然反应孔的大小有行业的统一规定,但反应孔的高低有0.1 mL 和0.2 mL 两种不同的型号。不同厂家,甚至同一个厂家不同型号的仪器有不同的样品仓打开方式,都会对测温探头的贴合性提出新的挑战。仪器校准实施单位购买0.1 mL 反应孔适用的测温探头,当检测0.2 mL 反应孔时,应在测温探头固定板上加盖同等大小、高度适合的软木塞,以便测温探头和反应孔底部充分接触。旋转式样品仓打开方式的仪器(如ABI 公司的Quanstudio 12K),宜先将测温探头平稳地放入仪器内,再开启仪器进行测温。避免开启仪依赖是什么意思

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