一氧化氮介导富含多酚的可可粉对自发性高血压大鼠的降血压效应研究
汪丽
（安徽省宁国市人民医院药剂科，安徽宁国242300）
摘要：目的研究一种富含多酚的可可粉（BOLTEX1）降血压过程中，血管内皮松弛因子的作用。方法实验共使用30只17 20周龄、体重（310ʃ13）g的雄性自发性高血压大鼠。它们被均分为两组，上午九点至十点间，分别通过灌胃给蒸馏水和溶于蒸馏水的BOLTEC1溶液，给药剂量为300mg·kg－1体重。2h后，每组任取5只腹腔注射1ml生理盐水。每组剩余的10只大鼠各自分成两组，分别腹腔注射剂量为30mg ·kg－1的Nw-nitro-L-arginine methyl ester（L-NAME）和剂量为5mg·kg－1的吲哚美辛。4h后，通过尾套法记录大鼠的收缩压（SBP）。结果BOLTEX1能引起SBP的明显降低［（－49．5ʃ4．9）mmHg；P＜0．05］。L-NAME则引起SBP显著升高［（16．2ʃ4．3）mmHg；P＜0．05］，而且对于注射过L-NAME 的大鼠，BOLTEX1的作用未被观察到［（4．1ʃ1．7）mmHg；P ＜0．05］。注射吲哚美辛并不会降低SBP，也不会减弱BOLT-EX1的降血压效果。该研究证实了NO参与BOLTEX1的降血压作用过程。注射BOLTEX1后，NO的合成和生物活性增加。结论富含多酚的可可粉具有舒张血管，降低血压的显著作用，NO可能是介导该作用过程的关键因子。
关键词：可可粉；一氧化氮；多酚；高血压
高血压是中风、心肌梗死及肾衰竭的主要危险因素，是基础医疗病人中最常见的疾病［1］。目前常用的控制高血压的方法是长期药物治疗，但药物的副作用却可能使病人的医疗情况复杂化。这种情况下，用天然产物治疗高血压的新方法将会极大地方便患者。研究已经证明可可粉中多酚可以降血压［2］。但值得注意的是，可可粉生产过程中多酚的保存对于可可粉的健康功效很重要。据报道，高温、长时间烘烤以及碱处理，都会降低可可粉中多酚的含量［3］。采用新型产业的专利工艺，可以生产出一种富含多酚的可可粉（BOLTEX1）［4］。富含多酚的可可粉具有抗氧化能力［5］，并对高血压有一定的治疗功效［6］。
多酚的降血压功能与不同的生物作用相关，如NO介导的血管舒张［7］、血管紧张素转换酶抑制作用［8］以及这些化合物的抗氧化能力引起的氧化状态减少［9］。但是我们对于多酚降血压作用的机制仍然不十分清楚。如果能明确其作用机理，将会促进富含多酚的功能保健食品发展，实现控制血压的效果。
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以前的实验表明［10］，多酚类物质引起的动脉血压降低至少部分是由血管内皮细胞松弛因子介导的，而且尤为重要的是多酚还导致组织释放NO。为了深入探究，我们在此次实验中分别用NO合成抑制剂L-NAME以及前列环素合成抑制剂———吲哚美辛对自发性高血压大鼠（SHR）进行联合处理，评估BOLTEX1的作用效果。
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1材料和方法
1．1材料BOLTEX1是由博太医药生物技术发展有限公司提供的。它是一种富含黄烷醇的可可粉，采用低温处理技术方法，由未发酵未烘烤、blanch-treated（经漂白处理）的可可豆加工而成。该研究中使用的BOLTEX1中总多酚、总黄烷、儿茶素、表儿茶精、原花青素B2、原花青素B1的含量分别为（17．454ʃ0．0132）、（45．843ʃ0．270）、（5．570ʃ0．096）、（20．834ʃ0．032）、（18．128ʃ0．069）、（1．351ʃ0．073）mg·g－1。L-NAME和吲哚美辛（indomethacin）购买自Sigma Chem-ical Co．（St．Louis，MO，USA）。
1．2实验方法实验共使用30只17 20周、体重（310ʃ13）g的雄性自发性高血压大鼠（SHR）。所有的动物都来自安徽医科大学实验动物中心，合格证号10022。实验期间，大鼠存放在23ħ、12h光暗循环的环境中，提供自来水及标准鼠粮供其自由采食。30只大鼠随机分为A、B两大组，各大组再随机分为3小组。实验处理如下：上午九点到十点，A组动物通过胃插管注入蒸馏水；B组注入蒸馏水配制的BOLTEX1溶液，每只动物BOLTEX1的给药剂量为300mg·kg－1体重。两个实验组大鼠灌胃液体的总量均为1ml。灌胃2h后，A 组的3个小组分别给予处理1（腹腔注射1ml生理盐水），处理2（腹腔注射剂量为30mg·kg－1体重，总体积为1ml，溶于生理盐水的L-NAME），处理3（腹腔注射剂量为5mg·kg－1体重，总体积为1ml，溶于生理盐水的L-NAME）；B组的3个小组分别给予处理1*（腹腔注射1ml生理盐水），处理2*（腹腔注射剂量为30mg·kg－1体重，总体积为1ml，溶于生理盐水的吲哚美辛），处理3*（腹腔注射剂量为5mg·kg－1体重，总体积为1ml，溶于生理盐水的吲哚美辛）。灌胃
前及这次注射4h后，通过尾套法记录大鼠的收缩压（SBP）［10］。测量前，将大鼠放置在38ħ10min，以监测微动脉脉动。1．3数据分析实验结果以平均值ʃ均值的标准误差（SEM）的形式表示，使用SPSS软件进行方差分析（One-way ANOVA）。
2实验结果
graphics
SHR最初的SBP值为（223．3ʃ2．4）mmHg。图1、2表示了灌胃给药和腹腔注射不同物质后SBP的变化情况。
结果显示，只注射蒸馏水、生理盐水的SHR收缩压未降低，但是注射300mg·kg－1BOLTEX1溶液导致大鼠SBP值明显降低为（－49．5ʃ4．9）mmHg，P＜0．05。这种变化在BOLTEX1注射4h后，即使大鼠又注射了生理盐水，也仍然存在。蒸馏水处理组中，注射30mg·kg－1L-NAME导致SBP上升，为（16．2ʃ4．3）mmHg，P＜0．05。这种作用在腹腔注射后的2h内一直存在。另外，2h后给大鼠注射30mg·kg－1L-NAME，BOLTEX1的作用未被观察到。实际上，如图1所示，BOLTEX1的降血压作用完全被这种精氨酸衍生物破坏。不过，腹腔注射5mg·kg－1indomethacin并未影响蒸馏水处理组中大鼠的SBP，同时如图2所示，它也并未影响BOLTEX1的作用效果。
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·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal2012Jul；16（7）
图1
SHR 不同处理方法后SBP 值的变化
注：a ：蒸馏水+生理盐水，b ：300mg ·kg －1BOLTEX1+生理盐水，c ：蒸馏水+30mg ·kg －1L-NAME ，d ：300mg ·kg －1BOLTEX1+30mg ·kg －1L-NAME 。数据表示为平均值ʃSEM 。每个实验组都有5只大鼠；（
*
P ＜0．05
）
图2SHR 不同处理方法后SBP 值的变化
注：a ：蒸馏水+生理盐水，b ：300mg ·kg －1BOLTEX1+生理盐水，c ：蒸馏水+5mg ·kg －1吲哚美辛，d ：300mg ·kg －1BOLTEX1+5mg ·kg －1吲哚美辛。数据表示为平均值ʃSEM ；每个实验组都有5只大鼠；（
*
P ＜0．05）
3讨论
本次研究证实了BOLTEX1对SHR （一种常见的用于检
测原发性高血压实验模型）的短期降血压功能
天津电脑学校［11］
。可可及可可衍生物是黄酮类化合物，尤其是黄烷醇和原花青素的重
要来源。我们已经知道上述这类化合物具有降血压功能。此次研究还表明了内皮细胞舒张因子NO 参与BOLTEX1降血压过程。根据Furchgott 等研究，乙酰胆碱引起的血管舒张具有内皮依赖性
［12］
，本次研究提供了明确的证据表明NO 参与可可粉调控的体内降血压过程。
1987年NO 被确定为重要的内皮细胞舒张因子［13］，随后
不久又确定了NO 在动脉紧张中的功能［14］
。众所周知，
内源性NO 来源于L-精氨酸的胍基氮，生成NO 需要的酶是一种
名为内源性NO 合酶（eNOS ）的氧合酶［15］
。L-NAME 是体内外NOS 的抑制剂
［16］
，在此次研究中经L-NAME 处理的SHR 观察到了明显的SBP 增高现象。L-NAME 对动物体内基础NO 合成的抑制作用可以解释上述实验结果。但是该研究更重要的地方是观察到，
对于经L-NAME 处理的SHR ，BOLT-EX1降血压效果减弱。
除了明显的不一致情况外，NO 作为主要的内皮细胞衍生的松弛因子已经被广泛承认［17］
。不过，内皮也分泌其它的血管舒张剂，
比如前列环素（prostacyclin ）。首个发现的内皮细胞衍生松弛物质就是前列环素，它由环氧合酶产生［18］
。此次实验中，
我们也评估了BOLTEX1对腹腔注射吲哚美辛（环氧合酶及内皮细胞前列腺素合成抑制剂）的SHR 的作用效果。然而吲哚美辛并未使SBP 值降低，也并不能抵消BOLT-EX1的降血压效果。我们因此可以舍弃前列环素在可可粉降血压过程中起作用这个猜测。
NO 实际上是非常重要的血压稳态调控因子，而标志高血压状态的动脉紧张的增多意味着过量自由基破坏了NO 。高血压情况下内皮细胞超氧阴离子增多，这种效应与内皮依建筑学专业排名
赖性舒张相关的损害有关［19］
。BOLTEX1具有极强的抗氧化能力，基于上述推理和结果，我们可以认为这种可可粉之所以
能够降低动脉血压是因为NO 合成或是生物活性的增加。毫
无疑问，
NO 介导了富含多酚的可可粉对大鼠的降血压效应。甚至在高血压前期，已经证明SHR 动脉内皮功能改变［20］
。不过值得注意的是，这里的高血压过程也与内皮收缩血管因子（主要是环氧化酶依赖的过氧化物）的释放相关［21］
。我们需要进行更多的实验研究BOLTEX1作用的信号通路，不过不
管怎样这篇文章都已经证实了NO 在其中的作用。为了使这种可可粉能够成为食物成分，将来的研究必须提供更多关于其降血压功能的信息，以及确定它对人体是否有同样的效果。参考文献：
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909·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2012Jul ；16（7）
◇药物分析◇
HPLC法测定不同来源地黄中梓醇的含量
陈新贵
（安徽省滁州市第一人民医院药剂科，安徽滁州239000）
摘要：目的建立地黄中有效成分梓醇的HPLC测定方法，测定不同来源地黄药材中的梓醇含量。方法采用高效液相色谱法，选用C18柱，流动相为甲醇-0．1%磷酸溶液（1ʒ99），流速1．0ml·min－1，检测波长为210nm，柱温为35ħ。结果梓醇在25 250mg·L－1范围内具有良好的线性关系（r=0．9996）
，平均加样回收率95．66%，RSD为1．52%（n=9）。结论不同来源地黄中有效成分梓醇的含量差异较大，生地黄中的梓醇含量高于熟地黄中梓醇含量。词汇量测试
关键词：地黄；梓醇；高效液相色谱法
Determination of catalpol in radix rehmanniae from different
sources by HPLC
CHEN Xin-gui
（Department of Pharmacy，The First Peoples Hospital of Chuzhou，Chuzhou239000，China）
Abstract：Objective To determine the content of catalpol in radix rehmanniae from different sources．Methods Catalpol in radix reh-manniae was determinated by high performance liquid chromatography．The mobile pha consisted of methyl alcohol-0．1%phosphori-cacid（1ʒ99）with the flow rate of1．0ml·min－1．The detection wavelength was at210nm and column temperature was35ħ．Results Good linearities were obtained over the range between25and250mg·L－1for catalpol．The average recovery of glycyrrhizic acid was 95．66%（RSD=1．52%，n=9）．Conclusion Content of catalpol is variant in different sources．The conten
t of catalpol in radix reh-manniae is higher than that of radix rehmanniae preparata．
Key words：radix rehmanniae；catalpol；high performance liquid chromatography
地黄为玄参科植物地黄的块根，始载于《神农本草经》，列为上品，为临床常用中药之一［1］。地黄的化学成分以环稀醚萜苷类为主，主要有梓醇、二氢梓醇等，其中梓醇为主要有效成分之一，具有降血糖、利尿、缓和泻下等多种生物活性，但由于梓醇是一种环烯醚萜苷类成分，普遍认为其结构不稳定，且该类成分极性大，结构相似，给分离带来较大困难，我们在进行地黄的加工炮制过程中，发现梓醇含量变化较大，与以前资料有较大的差异。本研究以地黄中有效成分梓醇为检测指标，采用HPLC法［2］，对不同来源地黄进行了初步的分析研究，以期为不同产地和炮制方法的地黄的质量控制提供具有参考价值的科研数据，从而为临床提供更佳的药材。
1实验材料
1．1试药梓醇对照品购自中国药品生物制品检定所（批号为110808-200508），甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂），磷酸（分析纯，上海苏懿化学试剂有限公司），水为二次重蒸馏水。实验所用地黄药材样品，均为从当地购买的市售药材。
1．2仪器LC-6A型高效液相色谱仪（岛津）；ZG-1型打粉机（上海淀元实业有限公司）；JK-DY500
型医用数控超声清洗器（合肥金尼克机械制造有限公司）；江苏正基仪器有限公司HH-S恒温水浴锅；北京赛多利斯仪器系统有限公司BT124S电子天平。
thepang
2方法与结果
2．1色谱条件与系统适用性试验［2］Hypersil-C
18
色谱柱（4．6mmˑ250mm，5μm），流动相为甲醇-0．1%磷酸溶液（1ʒ99），流速1．0ml·min－1，进样量20μl，检测波长为210 nm，柱温35ħ，在该色谱条件下，样品中梓醇和其他峰能够达
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（收稿日期：2011－11－20）
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