气相色谱-质谱联用法测定动物源食品中的杀虫脒及其代谢物残留
谢建军;陈捷;何曼莉;袁震宇;孙灵慧
yanqing【摘 要】建立了动物源性食品(鱼肉、鸡肝、猪肉、虾肉、牛肉)中杀虫脒及其代谢产物4-氯邻甲苯胺残留的气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测方法.样品在碱性条件下(pH≥11.0),采用乙酸乙酯均质提取,提取液经石墨化碳黑(GCB SPE,250 mg/3 mL)和中性氧化铝固相萃取柱(Al2O3 SPE,2.0 g/3 mL)净化,GC-MS检测和确证.杀虫脒及其代谢物4-氯邻甲苯胺混合标准溶液的质量浓度在10 ～ 500 μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)分别为0.9991和0.9987,其回收率分别在81％～119％和80％～ 119％之间,相对标准偏差(RSD,n=6)分别为1.1％～11.7％和2.0％ ～ 13.7％,方法的定量下限(LOQ)均为10.0 μg/kg.该方法准确、灵敏、高效、环保,适合于动物源食品中杀虫脒及其主要代谢产物4-氯邻甲苯胺的快速检测.%A method was established for the determination of chlordimeform and its metabolite 4-chlo-ro-2-methylaniline residues in foods of animal by GC - MS. Five kinds of foods derived from animal ( e. g. tilapia muscle, chicken liver, pork, shrimp and beef ) were extracted with ethyl acetate in alkaline conditions(pH≥ll. 0). The extracts were purified with the graphitization car
bon black cartridge (GCB SPE, 250 mg/3 mL) and neutral alumina solid pha cartridge (Al2 O3 SPE, 2.0 g/3 mL) , and then determined by GC - MS. Good linear relationships were obtained between the peak areas and the concentrations of chlordimeform and its metabolite 4-chloro-2-methylaniline within the range of 10 -500 μg/L, with correlation coefficients of 0. 999 1 and 0. 998 7, respectively. The recoveries were in the ranges of 81% - 119% for chlordimeform, and 80% - 119% for 4-chloro-2-methylaniline, with RSDs(n =6) of 1. 1% -11.7% and 2.0% - 13.7% , respectively. The results showed that the quantitation limits for the two compounds were both 10. 0 |xg/kg. The propod method was accurate, nsitive and high-efficient, and was applicable in the determination of chlordimeform and its metabolite in animal derived foods.
【期刊名称】《分析测试学报》
【年(卷),期】2012(031)011
【总页数】7页(P1358-1364)
cea【关键词】杀虫脒;4-氯邻甲苯胺;气相色谱-质谱联用法;动物源食品
【作 者】谢建军;陈捷;何曼莉;袁震宇;孙灵慧
【作者单位】广东出入境检验检疫局,广东广州510623;广东出入境检验检疫局,广东广州510623;广东出入境检验检疫局,广东广州510623;广东出入境检验检疫局,广东广州510623;广东出入境检验检疫局,广东广州510623
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【正文语种】中 文
comfrey【中图分类】O657.63;S482.3
柠檬的英文杀虫脒(Chlordimeform)是一种高效的有机杀螨剂和防治稻螟的杀虫剂，上世纪60年代起被广泛用于防治水稻、果树、棉花的虫害。毒理学研究发现，杀虫脒及其主要代谢产物4-氯邻甲苯胺(4-Chloro-2-methylaniline)对脱氧核糖核酸(DNA)有损伤和诱变作用。生态流行病学研究也显示接触杀虫脒的工人的膀胱癌发生率是未接触工人的72倍［1-2］。由于杀虫脒与4-氯邻甲苯胺对人体具有潜在的致癌性，世界上部分国家将其列为禁用农药，如美国(1989年)、哥伦比亚(1987年)、墨西哥(1986年)禁用;我国农业部、卫生部发布的第199号公告将其列为高毒禁用杀虫剂，国家质量监督检验检疫总局也将蜂产品和动物源食品中的
杀虫脒残留列为重点监控项目之一 目前，世界上多数国家对食品中的杀虫脒及其代谢产物的残留都有严格限制，日本肯定列表规定动物源食品中杀虫脒的最大残留限量采用“一律标准”不超过0．010 mg/kg;秘鲁规定牛脂肪、肉及肉制品中杀虫脒的最大残留限量为0．5 mg/kg;美国规定动物组织中杀虫脒的最大残留在0．05～0．25 mg/kg之间;中国、德国要求蜂蜜中杀虫脒及其代谢产物的最高残留限量不超过0．010 mg/kg;智利规定乳制品、牛油中的最大残留限量为0．5 mg/kg，牛奶中最大残留限量为0．05 mg/kg，而且杀虫脒残留限量均包括母体及其主要代谢物［5］。关于杀虫脒的定性定量检测方法，国内外科研人员已有较多的探索，我国也建立了2项蜂产品和1项尿中杀虫脒的残留量检测标准方法。这些研究和方法主要集中在蜂产品上，也有极少量在空气、人尿、动物血和肝脏中的文献报道。已报道的检测方法绝大多数在酸性条件下衍生，存在着步骤繁琐、操作时间长、衍生试剂毒性较大的问题;只有很少的文献报道未采用衍生方法，而是通过调节蜂王浆或蜂蜜提取液的pH值来建立杀虫脒及其代谢产物残留的快速检测方法［6-23］。本文选取具有代表性的动物肌肉组织及内脏(鱼肉、鸡肝、猪肉、虾肉、牛肉)作为基质，通过明确提取溶剂及pH值，优化固相萃取条件，建立了动物源性食品中杀虫脒及其代谢产物4-氯邻甲苯胺的GC-MS快速检测和确证方法。该方法前处理简便快速、灵敏度高、重现性好，可满足动物源性食品中杀虫脒及其代谢物的同时检测和确证要求。
1．1 仪器与试剂
Agilent 6890N气相色谱仪，5973N质谱仪(美国Agilent公司);3-16K高速低温冷冻离心机(美国Sigma公司);Ultra Turrax T18 Basic均质器(美国Ultra Turrax公司);IKA Ms 3 basic涡旋振荡器(德国IKA公司);Turbovap LV氮气吹干浓缩仪(美国Zymark公司);SupelcoVisiprep DL 24位固相萃取装置(美国Supelco公司);pHS 3C精密pH计(上海虹益仪器仪表有限公司);J2凝胶渗透色谱仪(美国Scientific公司);Heidolph promax 2020水平振荡仪(德国Heidolph公司);Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司);GCB固相萃取柱(250 mg/3 mL)、中性氧化铝固相萃取柱(200 mg/3 mL)、氨基固相萃取柱(200 mg/3 mL)、氟罗里硅土固相萃取柱(1．5 g/3 mL)均为上海安谱科学仪器公司产品;100～200目中性氧化铝粉(国药集团化学试剂有限公司)、粒度40～63 μm氨丙基粉(北京振翔工贸有限公司)、60～200目石墨化碳黑粉(北京振翔工贸有限公司)。
杀虫脒及其代谢物4-氯邻甲苯胺标准物质均购自德国Dr．Ehrenstorfer-schäfers公司，纯度均不低于98．5%。氢氧化钠、环己烷、氯化钠(分析纯，广州分析试剂厂);正己烷、丙酮、乙酸乙酯(色谱纯，美国Tedia公司);超纯水(18．2 MΩ·cm)。
1．2 标准溶液的配制
英语教学案例范文准确称取适量杀虫脒和4-氯邻甲苯胺标准品，分别置于50 mL容量瓶中，杀虫脒用丙酮溶解并定容，4-氯邻甲苯胺用正己烷溶解并定容，分别配制成1．0 g/L的标准储备液，-18℃冰箱中保存。使用前根据需要将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作液，现配现用。
1．3 样品处理
1.3.1 提 取 称取5 g(精确至0．01 g)试样于50 mL离心管中，加去离子水10 mL用3 mol/L NaOH调pH值至11．0，加入15．0 mL乙酸乙酯，均质提取1 min;另取一50 mL离心管，加入10 mL乙酸乙酯，润洗匀质器刀头，倒入第一支离心管中。在提取液中加入5 g氯化钠，盖紧瓶塞，水平振荡10 min。将离心管置于冷冻离心机中以4 500 r/min离心5 min，吸取10 mL上清液在43℃下吹氮浓缩至约1 mL，待净化。
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1.3.2 净 化 将GCB SPE柱(250 mg/3 mL)和Al2O3SPE柱(2．0 g/3 mL)串联安装于固相萃取装置上，用6 mL乙酸乙酯活化SPE柱。将“1．3．1”中的提取液转移至SPE柱中，使样液以约1 mL/min的流速通过，用5 mL乙酸乙酯(分3次，2 mL+2 mL+1 mL)洗脱并收集洗脱液，将洗脱液于45℃下吹氮浓缩至近干，用乙酸乙酯定容至1．0 mL，供GC-MS测定。
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1．4 色谱与质谱条件
1.4.1 气相色谱(GC)条件 色谱柱:Agilent HP-5毛细管柱，30 m×0．32 mm(i．d．)，0．25 μm;升温程序:60℃保持2 min，以12℃/min速率升至170℃，保持4 min，以30℃/min升至280℃，保持8．67 min，总运行时间27．5 min;进样口温度:270℃，载气:氦气(99．999%以上)，流速2．2 mL/min;进样量:1．0 μL;进样模式:脉冲无分流进样;溶剂延迟时间:5 min。
1.4.2 凝胶渗透色谱仪(GPC)条件 凝胶色谱净化柱:300 mm×25 mm(i．d．);填料:Bio-Beads，S-X3，38～75 μm;浓缩温度:45℃;流动相:环己烷-乙酸乙酯 (1∶1);定容试剂:乙酸乙酯;流速:5 mL/min;进样量:5．0 mL。
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1.4.3 质谱(MS)条件 离子源:电喷雾电离源(EI);离子源温度:230℃;电离能量:70 eV;传输线温度:280℃，扫描方式:选择离子监测(SIM);杀虫脒的选择离子为m/z 117、152、181、196，其定量离子为m/z 196，4-氯邻甲苯胺的选择离子为m/z 141、143、140、106，其定量离子为m/z 106。
2．1 提取溶剂的选择
杀虫脒微溶于水，在丙酮、苯、氯仿、乙酸乙酯、己烷、甲醇中的溶解度大于20%(重量/体积);4-氯邻甲苯胺微溶于水，溶于乙醇、乙醚、二硫化碳和油类［18］。对于提取溶剂的选择，本实验采用回收试验法，在50 mL离心管中加入10 mL去离子水，用3 mol/L的NaOH将去离子水的pH值调至11．0，加入100 μg/L杀虫脒和4-氯邻甲苯胺的标准混合液，混匀，静置20 min;分别用25 mL的乙酸乙酯、乙腈和丙酮分2次(15 mL+10 mL)萃取，浓缩定容至1．0 mL。萃取回收实验结果表明，乙酸乙酯、乙腈和丙酮作为提取溶剂时，乙酸乙酯的提取效率高，杀虫脒和4-氯邻甲苯胺的回收率分别为116%和109%;用乙腈的提取效率为83%和68%，而用丙酮的提取效率只有54%和37%，见图1。因此，本实验选择乙酸乙酯作为提取溶剂，以满足检测方法的要求。
2．2 样液pH值的选择chine new year
杀虫脒和4-氯邻甲苯胺均为碱性化合物，在酸性条件下不稳定，易与酸生成盐;而在碱性条件下，两者可溶于大多数有机溶剂［16，20］。由于动物源食品的提取液偏酸性，所以需调节pH值至碱性，才能用有机溶剂提取残留的杀虫脒和4-氯邻甲苯胺。本实验采用回收试验法，在50 mL离心管中加入10 mL去离子水，用3 mol/L的NaOH调节pH值为7．0、8．0
、9．0、10．0、11．0、12．0，加入 100 μg/L 杀虫脒和 4-氯邻甲苯胺的标准混合液，混匀，静置20 min。加入约2．5 g氯化钠，用25 mL乙酸乙酯分两次(15 mL+10 mL)萃取，浓缩定容至1．0 mL。结果表明，提取溶液的酸碱度对杀虫脒和4-氯邻甲苯胺的回收率有很大影响(见图2)，pH值越低，两种物质的回收率越低;当提取溶液的pH≥11．0时，两者的回收率均大于98%并趋于稳定。因而，本实验选定调节样品提取溶液pH≥11．0。
