支气管肺泡灌洗液淋巴细胞亚群
对肺部病变的诊断意义
张杜超１，刘㊀佳１，伍江平２，黄爱本１，潘㊀磊１
(首都医科大学附属北京世纪坛医院,１．呼吸与危重症医学科,２．肿瘤研究室，北京１０００３８
)D O I :１０．１１７４８/b j m y ．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０４．００４收稿日期:２０２１Ｇ０１Ｇ２１；修回日期:２０２１Ｇ０３Ｇ０７基金项目：科研基金资助项目(编号:z １５５０８００００００４
)作者简介：张杜超㊁刘佳为共同第一作者.通讯作者：潘磊.
摘要：目的㊀比较肺部感染，肺恶性肿瘤及间质性肺病患者支气管肺泡灌洗液细胞计数及淋巴细胞亚群的表达水平，评价其临床意义.方法㊀选取２０１７年５月至２０１９年１２月收治的９８例患者，其中肺部感染５６例，肺恶性肿瘤１８例，间质性肺疾病２４例，检测肺泡灌洗液计数及淋巴细胞亚群水平.结果㊀肺部感染组中性粒细胞百分比及总N K 细胞百分比显著升高，巨噬细胞百分比显著减少，与其他两组比较差异有统计学意义.肺恶性肿瘤组C D ３＋T 淋巴细胞㊁C D ４＋T 淋巴细胞及C D ４＋/C D ８＋T 淋巴细胞比值显著减低，与感染组相比，差异有统计学意义(P ＜０．０５).间质性肺病组C D ８＋T
淋巴细胞及抑制性T 淋巴细胞(C D ８＋C D ２８－)显著升高，与其他两组相比，差异有统计学意义(P ＜０．０５).结论㊀检测支气管肺泡灌洗液细胞分类及淋巴细胞亚群水平，对于鉴别肺部病变㊁评估免疫功能及预后有一定的临床价值.关键词：肺部感染;㊀肺恶性肿瘤;㊀间质性肺病;㊀肺泡灌洗液;㊀淋巴细胞亚群中图分类号:R ５６３㊀㊀文献标识码:A
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P ＜０．０５)．I n t h e i n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e g r o u p ,C D ８＋T l y m p h o c y t e sa n di n h i b i t o r y T l y m p h o c y
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５５L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d ,A p
r ．２０２１,V o l ．２８,N o ．４
㊀㊀支气管肺泡灌洗是一种经支气管镜直接获取细胞及生化成分的常用检查方法，对于探讨肺局部免疫及病理过程有重要意义[１].近年来随着流式细胞术的应用，通过检测肺泡灌洗液(b r o n c h o a l v e o l a r l a v a g e f l u i d,B A L F)细胞亚群成分，对于疾病的辅助临床诊断及预后评估具有重要意义[２].本研究通过比较肺部感染㊁肺恶性肿瘤及间质性肺病患者B A L F细胞计数及淋巴细胞亚群的表达水平，评价其临床意义.
材料和方法
㊀㊀１㊀一般资料
㊀㊀２０１７年５月至２０１９年１２月在首都医科大学附属北京世纪坛医院呼吸内科收治的９８例患者，其中肺部感染组５６例㊁肺恶性肿瘤组１８例(其中小细胞肺癌２例㊁非小细胞肺癌１６例)㊁间质性肺疾病２４例.
㊀㊀入组标准：肺部感染诊断依据中华医学会呼吸病学分会制定的«中国成人社区获得性肺炎诊断和治疗指南(２０１６年版)»[３]；肺恶性肿瘤及间质性肺疾病诊断依据胸部影像及组织病理学证实.
㊀㊀２㊀研究方法
㊀㊀２．１㊀临床资料㊀收集患者临床资料，包括年龄㊁性别㊁基础疾病㊁临床症状㊁实验室检查，包括血常规㊁C反应蛋白(CＧr e a c t i v e p r o t e i n,C R P)㊁降钙素原(p r o c a l c i t o n i n,P C T).
㊀㊀２．２㊀肺泡灌洗液收集及计数㊀电子支气管镜末端紧密嵌人病变所在的段或亚段支气管开口处，经活检孔分次注入３７ħ生理盐水(总量１００m L)，以５０~１００mmH g负压吸引收集B A L F，回吸收量约４０~６０m L，送检细胞计数及淋巴细胞亚群分析.㊀㊀２．３㊀细胞分类检测㊀B A L F离心后沉渣采用计
数池法行细胞计数，细胞分类计数涂片的制备采用涂片法，沉渣涂片后以瑞氏染色法染色，光学显微镜每张涂片计数２００个细胞，计数两张涂片并取平均值.
㊀㊀２．４㊀流式细胞术检测淋巴细胞亚群㊀利用肿瘤研究室流式细胞仪(贝克曼F C５００)测定总T细胞(C D３＋)百分比㊁T辅助/诱导细胞(C D４＋)百分比㊁T抑制/细胞毒细胞(C D８＋)百分比㊁总N K细胞(C D３－C D１６＋C D５６＋)百分比㊁N K样T细胞(C D３＋C D１６＋C D５６＋)百分比㊁总B细胞(C D１９＋)百分比㊁调节性T细胞(r e g u l a t o r y T l y m p h o c y t e,T r e g,C D４＋C D２５＋C D１２７＋)百分比㊁抑制性T细胞(s u p p r e s s o rTl y m p h o c y t e,T s, C D８＋C D２８－)百分比㊁细胞毒T细胞(c y t o t o x i cT l y m p h o c y t e,T c,C D８＋C D２８＋)百分比㊁髓性树突
状细胞(m a r r o w d e n d r i t i cc e i l,M D C)百分比㊁淋巴细胞性树突状细胞(l y m p h o c y t e d e n d r i t i c c e l l,L D C)百分比.
㊀㊀３㊀统计学处理
㊀㊀统计处理采用S P S S１７．０软件进行.定量资料经正态性检验及方差齐性检验后，三组间采用F检验，两组间采用t检验；经检验后不符合正态分布的资料，采用非参数秩和检验比较.定性资料采用卡方检验；若理论频数＜５，采用校正卡方；若理论频数小于１，采用确切概率法.以P＜０．０５为差异具有统计学意义.
结㊀㊀果
㊀㊀１㊀三组患者一般资料比较
㊀㊀本研究共入组９８例患者，其中肺部感染组５６例㊁肺恶性肿瘤组１８例(其中小细胞肺癌２例㊁非小细胞肺癌１６例)㊁间质性肺疾病２４例，三组间年龄分布及性别构成差异无统计学意义.见表１.
表１㊀三组患者基本资料
项目肺部感染(n＝５６)肺恶性肿瘤(n＝１８)间质性肺疾病(n＝２４)P值男/女２８/２８８/１０１１/１３０．８９３年龄(岁)６１．５ʃ１３．７６１．２ʃ１６．０５９．９ʃ１４．１０．７８３
㊀㊀２㊀三组间临床表现及外周血炎症指标比较㊀㊀肺部感染组主要表现为发热㊁咳痰，白细胞㊁C R P及P C T水平升高，与肺恶性肿瘤及肺间质性疾病组两两比较，差异有统计学意义.肺恶性肿瘤组可表现为咳嗽㊁咳痰伴胸痛㊁咯血，炎症指标无明显升高.间质性肺疾病组主要表现为干咳伴呼吸困难，炎症指标无明显升高.见表２.
５５５
标记免疫分析与临床㊀２０２１年４月第２８卷第４期
表２㊀三组间临床表现及外周血炎症指标比较[n(％)]
项目肺部感染(n＝５６)肺恶性肿瘤(n＝１８)间质性肺疾病(n＝２４)
发热５６(１００．０)b c０(０．０)a０(０．０)a
咳嗽５６(１００．０)１６(８８．９)２２(９１．７)
咳痰５６(１００．０)b c４(２２．２)a０(０．０)a
呼吸困难８(１４．３)c２(１１．１)c１８(７５．０)a b
胸痛０(０．０)b５(２７．８)a c０(０．０)b
咯血０(０．０)２(１１．１)０(０．０)
白细胞升高(＞１０ˑ１０９/L)５６(１００．０)b c０(０．０)２(８．３) P C T升高(＞０．０５n g/m L)１８(３２．１)b c０(０．０)０(０．０)
C反应蛋白升高(＞６m g/L)５６(１００．０)b c３(１６．７)２(８．３)
㊀㊀㊀注：与感染组比较,a P＜０．０５；与肺恶性肿瘤组比较,b P＜０．０５；与间质性肺疾病组比较,c P＜０．０５
㊀㊀３㊀三组患者B A L F中细胞分类计数结果比较㊀㊀肺部感染组与肺恶性肿瘤及肺间质性病变组两两比较，肺部感染组中性粒细胞百分比显著升高，巨噬细胞百分比显著减少，与其他两组比较差异有统计学意义.详见表３.
表３㊀三组B A L F中细胞分类比较[xʃs,M(P２５~P７５)]
项目肺部感染(n＝５６)肺恶性肿瘤(n＝１８)间质性肺疾病(n＝２４)回收量(m L)１２．０ʃ５．７１３．０(５．０~２０．０)１２．５(６．０~２０．５)细胞数(ˑ１０６/L)１９１．０(８５．５~１７５
．０)９８．３(８１．０~１２８．０)１３９．８(８０．０~１４０．０)巨噬细胞(％)２６．５(９．５~７０．０)b c５４．０ʃ１６．１a４６．５ʃ１３．７a
中性粒细胞(％)３２．５(１０．０~７５．５)b c３．０(２．０~２６．０)a７．０(３．０~３４．５)a
淋巴细胞(％)３５．４ʃ１３．４３６．６ʃ１４．５３７．３ʃ１２．４
嗜酸性粒细胞(％)０．０(０．０~１．０)０．０(０．０~１．０)０．０(０．０~１．０)㊀㊀㊀注：与感染组比较,a P＜０．０５；与肺恶性肿瘤组比较,b P＜０．０５；与间质性肺疾病组比较,c P＜０．０５
㊀㊀４㊀三组患者B A L F中淋巴细胞亚群结果比较㊀㊀三组进行两两比较，肺部感染组C D４＋T淋巴细胞,C D４＋/C D８＋T淋巴细胞及总N K细胞(C D３－C D１６＋C D５６＋)显著升高，与其他两组相比，差异有统计学意义(P＜０．０５).间质性肺病组C D８＋T淋巴细胞及抑制性T淋巴细胞(T s,C D８＋C D２８－)百分比显著升高，与其他两组相比，差异有统计学意义.三组间N K样T细胞(C D３＋C D１６＋C D５６＋)百分比㊁总B细胞(C D１９＋)百分比㊁调节性T细胞(T r e g,C D４＋C D２５＋C D１２７＋)百分比㊁细胞毒T细胞(T c,C D８＋C D２８＋)百分比㊁树突状细胞百分比差异无统计学意义.详见表４.
表４㊀三组B A L F中淋巴细胞亚群比较[xʃs,M(P)２５~P７５)]
项目肺部感染(n＝５６)肺恶性肿瘤(n＝１８)间质性肺疾病(n＝２４)
C D３＋(％)８１．６ʃ１４．２b６２．６(４２．２~８３．５)a７１．２(４８．３~８５．５)
C D４＋(％)４２．２ʃ１８．３b c２７．２(１２．８~３６．７)a２９．６ʃ１３．１a
C D８＋(％)２９．７ʃ１５．５c２９．５(１７．６~３８．４)c３９．３ʃ１５．６a b
C D４＋/C D８＋１．９ʃ０．４b c０．８(０．７~１．５)a０．８(０．７~１．５)a
C D３－C D１６＋C D５６＋(％)５．６(３．２~８．６)b c３．４(２．０~５．７)a３．２(１．９~５．８)a
C D３＋C D１６＋C D５６＋(％)６．９(３．１~９．７)６．９(２．９~１１．２)７．２(３．２~１１．５)
C D１９＋(％)１．８(１．１~２．７)１．４(０．９~２．７)１．６(１．０~２．６)
C D４＋C D２５＋C D１２７＋(％)１．２(０．５~２．０)１．３(０．５~２．５)１．３(０．５~２
．９)
C D８＋C D２８－(％)２１．１(１２．６~３１．８)c１５．６(７．７~３４．９)c３３．２ʃ１３．６a b
C D８＋C D２８＋(％)７．４(３．７~９．２)７．２(２．６~９．７)５．３(２．７~８．７)
M D C(％)０．０３(０．０１~０．１１)０．０１(０．０１~０．０７)０．０１((０．０１~０．０７)
成都java培训班L D C(％)０．０２(０．０１~０．０４)０．０１(０．０１~０．０３)０．０１(０．０１~０．０３)
㊀㊀㊀注：与感染组比较,a P＜０．０５；与肺恶性肿瘤组比较,b P＜０．０５；与间质性肺疾病组比较,c P＜０．０５
ro什么意思６５５L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,A p r．２０２１,V o l．２８,N o．４
讨㊀㊀论
节日英语作文㊀㊀支气管肺泡灌洗作为一种相对无创的检查手段，患者容易耐受且并发症相对较少，留取B A L F是
肺组织病理的重要补充，同时通过对B A L F中的细胞组分及淋巴细胞亚群分析，对于肺部病变的鉴别诊断具有重要意义[４Ｇ６].
fastback㊀㊀淋巴细胞是机体重要的免疫细胞，主要分为T 淋巴细胞,B淋巴细胞以及N K细胞.其中T淋巴细胞主要介导细胞免疫，按表型分为C D４＋和C D８＋T淋巴细胞.C D４＋T淋巴细胞可进一步分化为辅助性T细胞(T h１和T h２)㊁T h１７和调节性T淋巴细胞(T r e g)，参与调节抗感染㊁肿瘤免疫等病理过程.C D８＋T淋巴细胞可分化为细胞毒T淋巴细胞(T c)和抑制性T淋巴细胞(T s),T c细胞主要参与抗肿瘤㊁抗病毒免疫等;T s细胞的主要通过分泌抑制性因子参与免疫应答的活化阶段，抑制T h细胞活性，从而间接抑制B细胞的分化和T c细胞的杀伤功能，对体液免疫和细胞免疫起负向调节作用.正常情况下,T淋巴细胞各个亚群维持在一定水平, C D４＋/C D８＋T淋巴细胞比值可以反映机体的免疫状态.淋巴细胞亚群在不同肺部病变中的发病机制不同，其淋巴细胞亚群变化特点也不尽相同[７Ｇ９].㊀㊀在肺恶性肿瘤患者中，普遍存在免疫功能低下，其中细胞免疫是抗肿瘤免疫的关键因素，既往研究[１０]显示，肺恶性肿瘤患者，处于免疫抑制状态, C D３＋显著下降，尤其以C D４＋和C D４＋/C D８＋比例下降最为明显.本组研究结果示肺恶性肿瘤组肺泡灌洗液中C D３＋T细胞㊁C D４＋T细胞及C D４＋T细胞/C D８＋T细胞显著减低，与感染组相比，差异有统计学意义(P＜０．０５).提示在肺恶性肿瘤患者中，病变部位局部免疫功能低下，从而有利于肿瘤细胞快速生长及播散.
㊀㊀在肺部感染患者中，炎症反应的早期中性粒细胞发挥重要作用，在微生物病原体侵袭机体后可因
趋化作用快速到达炎症部位，将细菌㊁细胞碎片等吞噬包围，防止病原微生物扩散[１１].本研究显示肺部感染组肺泡灌洗液中的中性粒细胞百分比显著高于其他两组，提示中性粒细胞在肺部感染中具有重要的免疫防御功能.C D４＋T淋巴细胞在抗感染中发挥重要作用，且C D４＋/C D８＋比值可以反映机体免疫状态[１２].本研究中感染患者C D４＋T淋巴细胞及C D４＋/C D８＋T淋巴细胞比值显著高于其他两组，提示与肺恶性肿瘤及间质性疾病组相比，肺部感染组局部细胞免疫功能相对稳定.N K细胞作为介导天然免疫的重要靶细胞，在肺部感染组显著高于肺恶性肿瘤组及间质性肺疾病组，提示在肺部感染的免疫防御阶段,N K细胞同样发挥重要作用，在一项关于肺炎克雷伯杆菌所致肺部感染的动物实验研究表明,N K细胞参与宿主防御及产生I LＧ２２介导免疫应答[１３].
㊀㊀既往研究[１４]显示，间质性肺病患者C D８＋T细胞显著升高,C D５６＋细胞(N K细胞)数显著降低.本研究与既往研究一致，间质性肺病组C D８＋T细胞显著升高,N K细胞显著降低，与感染组比较差异有统计学意义.此外，本研究同样发现间质性肺病组T s细胞显著升高，与其他两组相比，差异有统计学意义，提示T s细胞可能参与间质性肺疾病的特异性免疫炎症反应及组织损伤过程[１５].
㊀㊀临床表现及外周血炎症指标分析结果显示，肺部感染组临床表现为发热㊁咳痰伴炎症指标(白细胞㊁C R P㊁P C T)显著升高，与其他两组比较差异有统计学意义.肺恶性肿瘤组可表现为咳嗽伴胸痛㊁咯血；间质性肺疾病组主要表现为干咳伴呼吸困难，后两组的炎症指标无明显升高.
㊀㊀综上，结合患者临床表现，通过对B A L F的细胞组分及淋巴细胞亚群分析，在一定程度上可以区分肺部感染㊁肺恶性肿瘤及间质性肺疾病，同时了解肺部病变的免疫功能，对于疾病的诊断及预后提供依据.
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标记免疫分析与临床㊀２０２１年４月第２８卷第４期
A L P㊁G G T水平为肝功能异常的危险因素，而本研究结果同样证实血清A L P㊁G G T水平升高与a l l oＧH S C T患者a G V H D发生密切相关，因此临床上需积极监测a l l oＧH S C T患者血清A L P㊁G G T水平，对降低患者a G V H D发生风险至为关键.
㊀㊀综上所述，本文初步证实a l l oＧH S C T并发a G V H D患者的血清A L P㊁G G T水平异常增高，
且年龄ȡ４０岁㊁H L A配型不全相合㊁血清A L P㊁G G T水平高的a l l oＧH S C T患者a G V H D发生风险高，未来工作中或可从这些方面制定合理的防治措施.但由于本文为回顾性分析，并且受时间和经费限制，对血清学指标的分析仅对比了A L P㊁G G T的差异，加之本研究样本量较小，相关结论及A L P㊁G G T影响异基因造血干细胞移植患者预后的具体机制有待后续深入探究.参考文献
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标记免疫分析与临床㊀２０２１年４月第２８卷第４期
