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aomo硕士学位论文
枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶突变株的筛选及其拮抗作用
姓名：***
申请学位级别：硕士
专业：食品科学
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20080523
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办会计证签字日期：２００８年（，月＞日
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山东师范大学硕士学位论文
枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶突变株的筛选及其拮抗作用
中文摘要
芽孢杆菌（肋ｃ订如ｓｐｐ．）是土壤和植物微生态系统中的优势微生物种群，具有很强的抗逆能力和抗病作用，其生防机制主要包括竞争作用、拮抗作用和诱
导植物抗病性等方面。其产生的细胞壁降解酶（如蛋白酶、几丁质酶、夕．１．３一葡聚糖酶等）是重要的拮抗物质之一。已有研究表明，几丁质酶（Ｃｈｉ血嬲ｅ）和夕．１．３．葡聚糖酶（夕．１．３．百ｕｃａ麟ｅ）在生防中的作用与真菌细胞壁结构有关。真菌细胞壁成分较复杂，除了几丁
质、夕．１．３．葡聚糖以外，还含有多种蛋白质。生防芽孢杆菌产生的胞外蛋白酶可能在协同几丁质酶、夕．１．３．葡聚糖酶降解真菌细胞壁、拮抗病原真菌中起到重要作用。
本研究首先从真菌细胞壁蛋白质含量入手，对引起山东省主要作物病害的７种病原真菌细胞壁蛋白质含量进行分析，研究了７株生防芽孢杆菌对不同病原真菌的生物防治效果与其３种主要细胞壁降解酶活力的相关性，并进一步利用紫外
线（ＵＶ）、硫酸二乙酯（ＤＥＳ）及微波（Ｍｉｃ∞ｗａｖｅ）对一株具有广谱抗菌活性且产蛋白酶的枯草芽孢杆菌（踟甜缸ｓｚｆ６抛）Ｔ２进行诱变，以蛋白酶活力变化为筛选指标，研究突变株和出发菌株对病原真菌拮抗作用的变化及粗酶液对菌丝和孢子萌发的影响，以期探明芽孢杆菌胞外蛋白酶在生防中的地位和作用，为优良拮抗芽孢杆菌的直接利用和菌株的遗传改良提供依据。具体结果如下：
１．采用Ｂｒａｄｆ－０ｒｄ法测定真菌细胞壁蛋白质含量。结果显示：供试７种病原真菌细胞壁交联蛋白含量均高于未交联蛋白，不同病菌菌丝细胞壁中总蛋白含量存在差异，其中以棉花枯萎病菌（凡岱口一“聊卿Ｄ朋坍￡ｓｐ．ｖ甜ｆ行尼ｃｍ掰）含量最高，达
到７．４１１ｍ∥ｇ；西瓜枯萎病菌（凡岱口一材聊Ｄ砂印Ｄ础ｍ￡ｓｐ．，ｚｆ删聊）、黄瓜枯萎病菌（凡岱口，．玩掰ａ砀印Ｄ朋聊￡ｓｐ．例洲聊ｇ，伽“朋），小麦纹枯病菌（Ｒ而之刀ｃ幻甩缸
钾聊船）含量相当，其次为烟草赤星病菌（彳厅绷口砌口厅Ｐ栩口纪）和小麦赤霉病菌（胍口砌ｍ弘朋加韶埘胧），番茄灰霉病菌（勘ｆ，灿嘲Ｐ瑚）含量较少，为２．６２６ｍ∥ｇ。２．生防芽孢杆菌的防治效果与菌株细胞壁降解酶活力的相关性研究，是建立芽孢杆菌菌株筛选模型和菌株改良的基础。根据供试７株生防芽孢杆菌的防效和细胞壁降解酶活力，计算相关系数。结果显示：细胞壁降解酶中影响其防效的主要因素是菌株的蛋白酶水平，同∥．１．３．葡聚糖酶水平、几丁质酶水平也有一定关系。以细胞壁蛋白含量最高的棉花枯萎病菌（Ｆ铖卿Ｄ懈历￡Ｓｐ．嬲加膨删脚）为靶标时，蛋白酶水平相关系数达Ｏ．９１５，其余相关系数分别为夕．１．３．葡聚糖酶Ｏ．８ｌｌ，
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