勤奋学习演讲稿对小鼠apoE基因表达谱的
分析
gre有效期>player载脂蛋白E(apo1ipoprotein E,apo E)是乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)、高密度脂蛋白(HDL)的重要组分。
继人类apoE基因于1973年首次发现后，陆续在小鼠、大鼠、猪、狗、牛、猴子等动物体内也发现了它的踪影。而且在一些动物中,apoE基因的结构有较高的相似性，如人、猪和小鼠的apoE基因均由4个外显子和3个内含子组成。
apoE基因编码的apoE蛋白在稳定微管蛋白结构、细胞内信号传导、免疫调节、糖代谢、氧化应激、脂质代谢及其他细胞过程中发挥重要作用，与人类的衰老，心血管疾病密切相关,apoE基因的多态性及其表达越来越受到研究者的关注，其中小鼠被广泛用作该基因作用机制研究的动物模型。如apoE 基因敲除小鼠的出现，增加了一个可用于评估研究人类衰老性疾病的动物模型，它有助
于深化研究apoE基因的功能，为多种疾病的治疗提供了药物筛选的平台。尽管小鼠被广泛用作该基因作用机制研究的动物模型，但未见该基因在小鼠各种组织表达的研究报道。本研究通过对小鼠apoE基因表达谱的分析，为小鼠的apoE基因的研究及其动物模型的利用积累基础性的资料。
introduction用法
1、材料与方法
1.1试验动物：健康清洁级昆明种小鼠3只，雌性,40d龄，平均每只体重(28±3)g(广西医科大学实验动物中心提供，批号************)。处死动物前禁食12h，仅供饮水。颈椎脱臼处死动物，取心、肝、脾、肺、肾、脑、脊髓、胃、小肠、胸腺、肾上腺、胰腺、膀胱、子宫、主动脉、血液、腹肌等17种组织，每样组织标本约100mg，分别放入含有500μLRNA保存液(北京康为世纪生物科技公司)的1.5mLEP管中备用。
组织样本采集均于处死动物后30min 之内完成，所用解剖工具和EP管均用0.1%DEPC(北京天根生化科技公司)水浸泡过夜后高温高压消毒。
新航道 留学1.2方法
1.2.1总RNA抽提：总RNA提取选用上述小鼠的心、肝等17种不同组织，取80~100mg组织样在无RNA酶的研磨器中匀浆后采用Trizol-异丙醇(美国Invitrogen公司)沉淀法提取总RNA,1%的琼脂糖凝胶电泳验证RNA的完整性，并于-70℃保存备用，具体操作按照Invitrogen公司提供的RNA提取试剂盒说明书进行。
1.2.2总RNA检测及浓度测定：总RNA 的完整性可通过普通琼脂糖凝胶电泳检测。微量核酸蛋白分析仪(美国Quawell Technology.Inc)测量总RNA样品浓度，每个样本重复测量3次，取平均值。
bark是什么意思1.2.3总RNA反转录：在经DEPC处理过的0.2mL离心管中加入总RNA，其中：肝RNA取3μL，脊髓、胰腺、心、肺、脾、肾、脑、胃、小肠、胸腺、肾上腺、膀胱、子宫、主动脉、血液和腹肌RNA各取5μL，分别加入1μLOligo(dT)18(100μmol/L)和1μLRandom Primer(100μmol/L)(加拿大MBIFermentas公司)，用RNa-freeddH2O将
体系补足至12μL。弹指混匀后短暂离心,65℃孵育5min，迅速置于冰上。
向反应体系加入5×MuLVBuffer4μL,d NTPs(10mmol/μL)2μL,Ribolock
adequate翻译
Inhibitor(5U/μL)1μL,M-MuLV反转录酶(5U/μL)1μL，使反应终体积为20μL，混合均匀并短暂离心，于45℃温育60min,70℃5min以灭活反转录酶，然后放置于冰上冷却。
1.2.4引物设计与PCR扩增:PCR扩增的引物设计参照GenBank中公布的Mus musculus apolipoprotein E的mRNA核酸序列(NM_009696.3),PCR引物由Oligo6.0软件设计，由上海生物工程公司合成。上游引物apoE-F:5’
-gaacaac-ccgcctcgtgacag-3’；下游引物apoE-R:5’
-tggcagtgcgctggcgac-ctt-3’，目的片段的长度为781bp。使用β-actin作为内参，上游引物β-actinF5’
-tgaccggcctgtatgctatc-3’，下游引物β-actinR5’酬金
acceptor-tcacatgtctcgatcccagtag-3’，片段长度
310bp。PCR反应条件:94℃预变性5min;94℃变性1min,61.5℃退火45s,72℃延伸1min，共35个循环,72℃延伸10min。取PCR产物5μL 进行 1.5%琼脂糖凝胶电泳，并在凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)上观察扩增效果并照相。
2、结果bridgelux
2.117种组织总RNA的检测：小鼠17种组织总RNA1%琼脂糖凝胶电泳显示出2条清晰的条带，分别为28S和18S，表明总RNA较完好。经微量核酸蛋白分析仪测定，所提取的总RNA在260nm的吸收值与280nm的吸收值比值均在1.8~2.0之间，提示无蛋白质和其他杂质污染，提取的总RNA质量符合实验要求，可用于后续组织表达谱分析。
2.2小鼠apoE基因组织表达谱分析：将小鼠各个组织反转录获得的cDNA作为模板用于组织表达谱分析。经PCR扩增后，取5μL产物在1.5%的琼脂糖凝胶中电泳。用Im-ageJ2X图像分析软件对3次电泳的图像进行处理和分析，并计算各组织的apoE基因
