调谐和校正
目标: 熟悉DuoSpray离子源在正离子模式下TOF的调谐和校正，包括仪器优化、手动校正和自动校正
用户也可以用合适的溶液校正TOF MS和MS/MS的负离子模式，以及Q1的正离子和负离子模式。由于篇幅限制，我们以正离子为例。
1.Analyst® TF软件和仪器硬件设置
A.双击桌面上的图标打开Analyst® TF软件
1.在导航栏（Navigation bar）中的Configure模块上双击Hardware Configuration
2.点击LC + MS profile，选择Edit Profile编辑，然后选择Mass
Spectrometer TripleTOF 5600，点击Setup Device，保证U calibrant
delivery system (CDS)是选上的
3.点击OK，激活LC + MS profile，关闭窗口
B.针设置（probe tting）
1.APCI和ESI探针的位置取决于流速。这些参数不是自动设置的，用户需每次使用前确认该位置
2.在校正和调谐的练习中，ESI针的垂直和水平位置可以设置到5微米，APCI源的针也是5，并保证电晕针
的位置是朝向APCI探针（Probe）的
C.保证CDS校正管路在APCI正离子校正溶液瓶中的，没入溶液中；保证CDS的Peek管是与APCI源相连的
D. 保证液相流路是从ESI针进入
2.使用LC + CDS手动校正
worA.选择API Instrument项目
B.在工具栏中点击红色的T按钮使仪器进入tuning模式
C.双击导航栏中的Manual Tuningless
D.点击Source/Gas栏，填入适合500 µL/min流速的适当参数，这些参数不是自动生成的，因此用户需要根据流
速设置离子源的参数，推荐值如下所示：
Field Value
GS1 50
GS2 50
CUR 30
TEM 600
ISFV 5500
E.点击Ramp按钮右侧的下拉菜单，选择LC method
1.选择A和B相的溶剂，50:50，等度，流速为500 µL/min。如果
使用岛津液相，注意关掉自动进样器和柱温箱的使用。
2.点击下拉菜单右侧的U，保证液相的使用
F.点击下拉菜单，选择Calibrate
1.为APCI正离子校正液设置Calibration Reference Table，点击View可看到校正时使用的离子，但是注意：
用户不能在该窗口改变离子信息。
2.设置CDS流速为250 µL/min
3.设置CDS Refill/Purge流速为1000 µL/min
4.这时不能选择Auto Calibration选项
G.在下拉菜单，重新选择MS Method
H.点击CDS Purge按钮，以消除残存的溶液或气泡
I.点击Refill CDS，充满校正液
3.Manual Verification of Resolution and Mass Accuracy 手动确证分辨率和质量准确度
A.TOF MSfenda
1.在MS栏，将扫描类型选为TOF MS
2.设定累积时间为0.25s
3.设置TOF质量范围：100~1000.点击APCI正离子校正液参考表保证设置的质量范围包含在表内
lorelei
4.设置方法的持续时间是5min
5.将方法保存为APCI POS CAL TOF MS
6.点击Start开始采集数据，并开启液相。一但LC流速被开启，它将一直有流量直到整个系统进入到
Standby mode
7.开始后，下面两个窗口被打开，左侧是TIC总离子流图，右侧是TOF MS质谱图
a.在CDS校正液进入前，需要确认下溶剂背景，保证不能有太多的溶剂背景。比较常见的溶剂背景离
子是214 m/z
hookup8.点击CDS Inject按钮
9.总离子流TIC图的信号会增加，也开始看到右侧质谱图中的校正离子。持续采集2min，以获得稳定的TIC
图，然后停止采集，点击Stop CDS
10.选择总离子流图TIC后部分的图谱0.5 – 1 min，双击TIC图的高亮区，显示出TOF MS选择区域的平均图简报怎么写
11.高亮显示TOF MS图谱上的m/z 609.28，然后在View菜单（在软件最上一排）下点击Graph Information
window，就可以测试分辨率
汉英互译器
12.在右侧的TOFMS图谱中点击右键，然后在菜单中选择List Data，显示出data list，然后选择Calibration
Peak List键显示校正峰列表。如果校正峰列表没有显示，则在以下路径设置：Tools →Se ngs →
Appearance Op ons →Miscellaneous，选择Show Mass Calibration Peak List。右键点击和删除以前的数
据列表，然后在TOF MS上再一次右键点击List Data。保证显示正确的校正列表，如果不是，则在列表中
点击右键，选择APCI Positive Calibration Solution，选择U as Reference
13.测试结果：
a.核实分辨率：m/z 609.28的分辨率应大于30,000(Graph Information window)。记录609的分辨
率:_______。新年好 英文
b.核实质量准确度：Mass shift应小于2 ppm，记录609的质量准确度: _______
2.如果分辨率小于30,000，需要运行Instrument Optimization来校正（后面将会讲到）
3.如果质量准确度大于2ppm，可以自动或手动校正（后面将会详细讲到）
B.MSMS
1.点击CDS Refill
2.在手动调节（Manual Tune）界面将扫描类型选为Product Ion，键入TOF质谱范围100~1000.确保APCI正离
子校正液参考表包括所测离子的质量范围
3.在Product Of后键入609.28，将累积时间accumulation time设为0.100 cs
4.选择High Resolution；在化合物（Compound）栏将CE设为40
5.将方法保存为APCI POS CAL MSMS_HR
6.选择High Sensitivity，将方法保存为APCI POS CAL MSMS_HS
7.在第3.A章重复6-11，方法APCI POS CAL MSMS_HR和APCI POS CAL MSMS_HS。测试和记录结果：
a.在高分辨模式High Resolution，m/z 448的分辨率应大于30,000。记录分辨率:______。(graph
information window)
b.在高灵敏度模式High Sensitivity，m/z 448的分辨率应大于15,000。记录分辨率:______。(graph
information window)
c.确认质量准确度：Mass shift应小于2 ppm
1.高分辨率质量偏移: ______；
2.高灵敏度质量偏移: ______；
4.Manual Calibration 手动校正
A.打开方法APCI POS CAL TOFMS。点击Start按钮开始采集和获得数据2min
B.高亮选择TIC图后部分0.5 – 1 min图谱，双击高亮选择区域，显示TOF MS所选区域的平均图
C.校正质量范围，右键点击质谱图，然后选择Re-Calibrate TOF
1.TOF Calibration窗口将打开。在参照表下拉菜单选择APCI Positive Calibration Solution，将窗口tolerance
window设置为0.5 Da。理论质量在表格中，自动填入实验质量数
注意：编辑参照离子的方法：Tools → Se ngs →Tuning op ons → References，选择APCI Positive Calibration Solution，核实TOF MS校正选择的离子，或者键入新的质量数，点击OK退出。建议使用4-6个参照物离子校正仪器，也推荐结合实际样品进行仪器校正
2.在最下端选择Set As Instrument Default 和Overwrite Current File
3.依次点击以下按钮开始校正流程：Calculate new calibrations, Calibrate spectrum 和Entire File，点击Clo
离开
4.仔细检查目前的图谱和List Data view中Calibration Peak List项
D.打开方法：APCI POS CAL MSMS_HR和APCI POS CAL MSMS_HS，在MSMS高分辨率和高灵敏度模式重复4.A
到4.C校正
E.校正后，质量偏移应小于< 2ppm
5.Auto Calibration 自动校正
A.点击CDS Refill
B.打开方法文件：APCI POS CAL TOFMS。在Edit Ramp右侧的下拉菜单选择Calibrate.
C.点击Auto Calibration，在校正参照物列表中选择APCI Positive Calibration Solution
D.点击Start开始采集，放大关注TOFMS m/z 609.28。每次循环应该进行校正，TOFMS图谱标题t0 和 a值在采集
中更新
E.采集大于0.5min，选择0.5 – 1 min左右的区域，双击，得到所选区域的平均质谱图。右键选择List Data，质量
准确度（mass shift栏）应小于2 ppm
F.点击Refill CDS
雨的英文G.打开方法APCI POS CAL MSMS_HR，重复5.A 到 5.D，查看校正的碎片离子
H.打开方法APCI POS CAL MSMS_HS，重复5.A 到 5.D，查看校正的碎片离子
提示-如果一些离子质量准确度大于2ppm，观察参照离子的强度，将低强度的离子从表中去除
6.Instrument Optimization仪器优化
A.仪器的优化允许用户对于所有的扫描方式自动校正和优化分辨率。流动注射使用Tuning Solution
(CsI_ALILTLVS Reference)的注射泵流速常用10 µL/min
B.去活LC + MS硬件，从计算机上拔去液相系统的电缆，插上针泵的电缆，激活MS + Syringe Pump液相系统
C.在Tune & Calibrate模式，双击Instrument Optimization
1.如果这是那天第一次允许仪器自动优化，就会弹出一条信息，告诉用户当前设置自动备份。自动备份的
文件路径：D:\Analyst Data\Project\API Instrument\Instrument Optimization\Instrument Settings Backups。
名字是当天仪器优化的第一次打开时间。在 Instrument Optimization window的File菜单下也可以手动备
份。
D.点击OK
sunday是什么意思
注意：有时候会出现一条信息“The following instrument parameters are t to the wrong Access Type(仪器参数为错误设置)”.请按照说明设置参数。重复step D
E.选择CsI_ALILTLVS Reference作为调谐液
F.选择Positive
G.选择Verify Performance Only
H.点击Next
I.确保针泵里加上合适的溶液，针泵开始运行
J.点击GO!
K.查看存在D:\Analyst Data\Projects\API Instrument\Data\Instrument Optimization下的结果报告（Results Summary）中结果
1.核实分辨率：m/z 829.5的分辨率在MS模式和子离子高分辨率模式下应大于30000，在高灵敏度模式下
Product Ion High Resolution模式下要大于15000.
2.核实质量准确度：质量偏移应小于2ppm
3.核实增强性能：m/z 381.2的峰面积应提高2到3倍
4.核实Q1传运窗口：对于Unit的分辨率，峰宽应在0.7±0.1 Da, 质量偏移mass shift应小于± 0.1Da.
提示：仅仅核实性能（Verify Performance Only）的步骤不校正仪器。如果分辨率符合性能要求但是质量准确度不符合要求，建议按照4和5项手动或自动校正仪器，
L.调谐TOF分辨率：如果m/z 829.5的分辨率不满足要求，重新run Instrument Optimization，选择以下选项：
1.在TOF MS下选择Tune，下面则被自动选择
a.子离子高分辨率调谐（Product Ion High Resolution Tune）
b.检测器灵敏度和通道校准（Detector Sensitivity and Channel Alignment）
2.如果需要，在Product Ion下也可以选择高灵敏度调谐选项
3.点击Next和Go!
4.然后，仪器优化软件进行性能确证，优化的参数有：RO2, VS1, HST, FOR, OFS, MGV, Detector和校准通道
5.在Results Summary查看结果
M.调谐扩展性能：在仪器优化时，点击Show Advanced Options，Advanced窗口显示出，点击Enhance Ion，点击Next和Go!一旦优化完成，在Results Summary报告查看结果。
