梅毒螺旋体特异性抗体试验方法探讨及
临床应用价值评估
金㊀晶，潘㊀玥，边春红，聂秀娟
(北京市海淀医院，北京１０００９０
)D O I :１０．１１７４８/b j m y ．i s s n ．１００６－１７０３．２０２１．０１．００７收稿日期:２０２０Ｇ１０Ｇ１１；修回日期:２０２０Ｇ１０Ｇ２１
摘要：目的㊀分析化学发光微粒子免疫法(C M I A )
检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能价值，探讨其在临床应用的意义.方法㊀回顾性分析北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A 法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标
本６１０５１例，阳性标本采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(T P P A )进行确证，分析其相关性.结果㊀６１０５１例患者中
C M I A 法阳性标本８５２例，阳性率为１．４０％,T P P A 法阳性确认６６３例，阳性符合率为７７．８２％，假阳性率为０．３１％.梅毒
特异性抗体阳性符合率男性高于女性，差异有统计学意义(χ２＝９．４２,P ＝０．００２).＞６０岁老年组C M I A 法阳性预测值最
低，与其他年龄组比较，差异有统计学意义(χ２＝７．２７,P ＝０．００７)，容易引起梅毒误诊.科室以皮肤科患者C M I A 法阳性预测值最高.T P P A 结果阳性符合率随着S /C O 升高而升高，当S /C Oȡ１０时，符合率达到１００％.以T P P A 法作为确
证试验，对C M I A 法检测梅毒特异性抗体的S /C O 值进行R O C 曲线分析得到最佳诊断截断值为３．６１.结论㊀C M I A 法
简便易行，适用于大批量标本的梅毒筛查,T P P A 法则更客观反映真实的梅毒阳性情况.对于C M I A 法检测梅毒特异性
抗体阳性的标本，尤其是S /C O＜３．６１的标本，有必要进行T P P A 复检，联合检测以提高检测结果的准确性，排除假阳性，避免误诊漏诊.lover什么意思
关键词：梅毒螺旋体特异性抗体;㊀化学发光微粒子免疫分析法;㊀梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验
中图分类号:R ３７７＋．１㊀㊀文献标识码:A
A nE v a l u a t i o no fT r e p o n e m aP a l l i d u mS p e c i f i cA n t i b o d y T
e s tM e t h o d a n d I t sC l i n i c a lA p p
l i c a t i o nV a l u e J I NJ i n g ,P A N Y u e ,B I A N C h u n h o n g ,N I E X i u j
u a n (B e i j i n g H a i d i a nH o s p i t a l ,B e i j i n g １
０００９０,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T oa n a l y z e t h e p e r f o r m a n c e v a l u e o f c h e m i l u m i n e s c e n tm i c r o p a r t i c l e i m m u n o a s s a y
(C M I A )i nt h e d e t e c t i o n o f T r e p o n e m a p a l l i d u m s p e c i f i ca n t i b o d y ,a n dt o e x p
l o r ei t sc l i n i c a l s i g n i f i c a n c e ．M e t h o d s F r o m M a r c h ,２０１９t oJ u l y ,２０２０,６１０５１c a s e so fT r e p o n e m a p a l l i d u ms p e c i f i c a n t i b o d y w e r e c o l l e c t e df r o m H a i d i a n H o s p i t a l o fB e i j i n g ．T h e p o s i t i v es a m p l e sw e r ec o n f i r m e db y T P P A ,a n d t h e c o r r e l a t i o nw a s a n a l y z e d ．R e s u l t s A m o n g ６１０５１p a t i e n t s ,８５２c a s e sw e r e p o s i t i v eb y
C M I A m e t h o d ,w i t ht h e p o s i t i v er a t eo f １．４０％,a n d ６６３c a s e sw e r ec o n f i r m e db y T P P A m e t h o d ,w i t h t h e p o s i t i v e c o i n c i d e n c e r a t eo f ７７．８２％,w h i
l e t h e f a l s e p o s i t i v er a t ew a s ０．３１％．T h e p o s i t i v e c o i n c i d e n c e r a t e o f s y p h i l i s s p e c i f i c a n t i b o d y i nm a l e p a t i e n t sw a s h i g h e r t h a n t h a t i n f e m a l e p a t i e n t s (χ２＝９．４２,P ＝０．００２)．C o m p a r e dw i t ho t h e r a g e g r o u p s ,t h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u eo f t h ee l d e r l y
g r o u p w a s t h e l o w e s t ,a n dt h ed i f f e r e n c e w a ss t a t i s t i c a l l y s i g
n i f i c a n t (χ２＝７．２７,P ＝０．００７)．T h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u eo fd e r m a t o l o g yp a t i e n t sw a s t h eh i g
tanyah e s t ．T h e p o s i t i v ec o i n c i d e n c er a t eo f T P P Ar e s u l t s i n c r e a s e dw i t ht h e i n c r e a s eo fS /C O．W h e nS /C O ȡ１０,t h ec o i n c i d e n c er a t er e a c h e d
１００％．U s i n g T P P A m e t h o da s c o n f i r m a t o r y t e s t ,R O Cc u r v ea n a l y s i sw a s c o n d u c t e do nS /C Ov a l u e o f s y p h i l i s s p e c i f i ca n t i b o d y d e t e c t e db y C M I A m e t h o d ,a n dt h eb e s td i a g
n o s t i cc u t Ｇo f fv a l u e w a s ３．６１．C o n c l u s i o n C M I A m e t h o d i s s i m p l e a n d e a s y t o o p e r a t e ,a n d i s s u i t a b l e f o r s y p h i l i s s c r e e n i n g
i n a ７
２标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期
l a r g en u m b e r o f s a m p l e s,w h i l eT P P A m e t h o d i sm o r eo b j e c t i v e t or e f l e c t t h er e a l s y p h i l i s p o s i t i v e s i t u a t i o n．C o m b i n e dd e t e c t i o no ft h e s et w o m e t h o d sc a ni m p r o v et h ea c c u r a c y o ft h et e s tr e s u l t s, e l i m i n a t e f a l s e p o s i t i v ea n da v o i dm i s d i a g n o s i s,e s p e c i a l l y f o r S/C O＜３．６１p o s i t i v e s a m p l e s．
K e y w o r d s:T r e p o n e m a p a l l i d u m s p e c i f i ca n t i b o d y;㊀C h e m i l u m i n e s c e n t p a r t i c l ei m m u n o a s s a y;㊀T r e p o n e m a p a l l i d u m g e l a t i n p a r t i c l e a g g l u t i n a t i o n t e s t
㊀㊀梅毒(s y p h i l i s)是由苍白螺旋体所引起的一种慢性传播疾病.它有高度传染性，主要通过性接触和血液传播，少数可通过间接接触传染，也可以通过胎盘传给下一代而发生胎传梅毒，在我国属于乙类传染病.梅毒的临床表现极为复杂，几乎可侵犯全身各器官，并产生多种多样的症状和体征，因此危害性极大.随着梅毒发病率逐年上升，其防控工作也面临着严峻的考验，及时准确的检测结果对于患者的诊断治疗和预后尤为重要[１Ｇ２].
㊀㊀梅毒的实验室检查还是以血清学实验为主，是梅毒诊断的重要依据.其分为两大类：一类为非特异性类脂质抗原试验，如T R U S T㊁R P R㊁V D R L等，主要检测血清中梅毒非特异性抗体；另一类为梅毒螺旋体实验，如C M I A,E L I S A㊁T P P A㊁T P H A等[３].我院目前采用化学发光微粒子免疫法(C M I A)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(T P P A)进行梅毒特异性抗体检测.非特异性抗体检测易出现生物学假阳性，因此特异性抗体检测在梅毒诊断中更具优势;T P P A法是国内外各实验室普遍采用的梅毒确诊方法[４]，但操作复杂㊁试验时间长，不适于大批标本的筛查;C M I A法全自动操作，简便快速㊁灵敏度高㊁特异性好，但存在一定的假阳性率，因此，选择合适的方法有助于梅毒的早期诊断和治疗.本研究以T P P A法作为确证试验，回顾性分析北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例，阳性标本采用T P P A法进行确证，探讨其相关性及在临床应用价值的评估.
材料和方法
㊀㊀１㊀材料来源
放飞心灵㊀㊀收集北京市海淀医院２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例，其中男性２７３５８例，女性３３６９３例，年龄０~９９岁.经患者及家属同意，收集患者梅毒血清学检测结果㊁病史等临床资料.
理财产品英文the girl is mine
㊀㊀２㊀仪器与试剂
㊀㊀梅毒特异性抗体C M I A法使用美国雅培I２０００全自动免疫分析仪及其配套试剂，质控品㊁校准品均为配套试剂且在有效期内，仪器工作状态良好，且每批质控均在控;T P P A试剂盒来自日本富士瑞必欧株式会社，均在有效期内.所有操作严格按照试剂盒说明书进行.
㊀㊀３㊀研究方法
㊀㊀实验室根据自身需要对C M I A法检测的梅毒抗体阳性样本进行复检确证.本研究收集２０１９年３月至２０２０年７月所有采用C M I A法进行梅毒螺旋体特异性抗体检测的标本６１０５１例，对阳性标本进一步使用T P P A法进行复检.对比分析性别㊁年龄㊁科室分布对梅毒螺旋体抗体结果的影响，以及不同S/C O值区间与T P P A法结果的符合率，确定其最佳截断值，探讨其在临床的应用价值.
㊀㊀３．１㊀C M I A检测㊀梅毒抗体试剂盒采用包被了T P N１５㊁T P N１７和T P N４７重组抗原的微粒子作为固相载体，对血清中梅毒螺旋体特异性抗体进行检测.利用标本与包被有重组抗原的磁微粒及稀释液混合后，标本中抗体与磁微粒上的抗原结合，清洗后加入标记抗人I g M或I g G，孵育并洗涤后，加入预激发液和激发液.通过测定反应液相对光强度来反映标本中梅毒螺旋体抗体浓度.S/C Oȡ１．０判为阳性.
㊀㊀３．２㊀T P P A检测㊀将梅毒(N i c h o l s株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上.这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体(T P)抗体反应，发生凝集，产生粒子凝集反应抗体，且可用来测定抗体效价.采用的抗原是超声裂解梅毒螺旋体，用样品稀释液将血清进行５㊁１０㊁２０㊁４０倍的稀释，依次向２０倍孔和４０倍孔滴加未致敏明胶粒子和致敏明胶粒子各２５μL，将反应板置于湿盒中２h后观察反应结果.如果致敏粒子形成不规则的杂乱聚集则为阳性，相反致敏粒子形成圆形且光滑的聚集则为阴性.
㊀㊀４㊀实验依据及质量控制
㊀㊀所有检测均严格按照实验室S O P程序文件执行，其性能验证符合实验室I S O１５１８９要求.室内质控均在受控范围内，达到实验室质量水平要求.
８２L a b e l e d I mm u n o a s s a y s&C l i n M e d,J a n．２０２１,V o l．２８,N o．１
㊀㊀５㊀统计学处理
㊀㊀采用S P S S１６．０系统软件进行数据分析，绘制受试者操作特性(R O C)曲线，计算曲线下面积，确定诊断效能最大时的S/C O截断值.计数资料以例数或百分率(％)表示，组间比较采用χ２检验,P＜０．０５为差异具有统计学意义.
结㊀㊀果
㊀㊀１㊀C M I A法和T P P A法检测梅毒特异性抗体结果分析
㊀㊀收集我院检验科２０１９年３月至２０２０年７月检测梅毒特异性抗体的血清６１０５１份，其中男性２７３５８例，女性３３６９３例，年龄０~９９岁.以T P P A法为确证试验，对C M I A法阳性结果的标本进行复测,C M I A法阳性例数为８５２例，阳性率为１．４０％(８５２/６１０５１), T P P A法阳性例数为６６３例，结合病史及其他实验室检查均被确诊为梅毒螺旋体感染,C M I A法与T P P A法的阳性符合率为７７．８２％(６６３/８５２)，假阳性率为０．３１％(１８９/６１０５１).两种方法比较，差异有统计学意义(χ２＝２１２．５,P＜０．００１).
㊀㊀１．１㊀不同性别组梅毒特异性抗体阳性率比较C M I A法阳性病例中男性占５７．８６％(４９３/８５２)，女性占４２．１４％(３５９/８５２);T P P A法阳性病例中男性占６０．６３％(４０２/６６３)，女性占３９．３７％(２６１/６６３)，男性检出率为８１．５４％(４０２/４９３)，女性检出率７２．７０％(２６１/３５９).男性的阳性符合率高于女性，差异有统计学意义(χ２＝９．４２,P＝０．００２).见表１.
表１㊀不同性别组梅毒特异性抗体检测结果
性别例数C M I A阳性数(例)阳性率(％)T P P A阳性数(例)阳性符合率(％)男２７３５８４９３１．８０４０２８１．５４
女３３６９３３５９１．０７２６１７２．７０
合计６１０５１８５２１．４０６６３７７．８２
㊀㊀１．２㊀不同年龄段梅毒特异性抗体阳性率比较㊀＞６０岁老年组C M I A法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最低，与其他年龄组比较，差异有统计学意义(χ２＝７．２７,P＝０．００７)，容易引起梅毒误诊.见表２.
表２㊀不同年龄组梅毒特异性抗体检测结果
年龄(岁)例数C M I A法阳性数(例)阳性率(％)占阳性总比例(％)T P P A阳性数(例)C M I A法阳性预测值(％)＜１８１２７２１１０．８６１．２９８７２．７３
１８~６０４１０７０５８８１．４３６９．０１４７９８１．４６
＞６０１８７０９２５３１．３５２９．６９１７６６９．５７
合计６１０５１８５２１．４０６６３７７．８２
㊀㊀１．３㊀梅毒特异性抗体阳性患者科室分布情况
６６３例T P P A梅毒抗体阳性患者按T P P A法阳性例
数多少排列，排在前五位的科室依次为皮肤科㊁普外
科㊁消化内科㊁泌尿外科㊁妇产科.其中皮肤科患者
C M I A法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最高,
其次为泌尿外科㊁普外科㊁妇产科㊁消化内科.见表
３，图１.
表３㊀不同科室梅毒血清学检测结果
科别C M I A法阳性数
(例)
T P P A阳性数
(例)
阳性预测值
(％)
皮肤科３００２６１８７．００普外７２４７６５．２８消化内科５４３１５７．４１泌尿外科４６３６７８．２６妇产科６７４１６１．１
９
图１㊀６６３例T P P A法阳性患者科室分布情况
㊀㊀２㊀不同S/C O值C M I A法与T P P A法的阳性符合率
㊀㊀以T P P A法作为确证试验,C M I A法阳性结果按S/C O值分组,T P P A法阳性符合率随着S/C O 升高而升高,S/C O值小于３的阳性符合率仅为３１．３９％；该组与其他S/C O值组比较，采用χ２检验,
９２
标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期
差异有统计学意义(χ２＝３３．９１,P ＜０．００１)；比较各S /C O 值组T P P A 法阳性符合率的差异有统计学意
义(χ２＝１７５．６,P ＜０．００１).当S /C Oȡ１０时，符合率达到１００％.见表４.
表４㊀C M I A 法S /C O 值与T P P A 法结果一致性
S /C O 值
C M I A 法阳性数(
例)T P P A 法阳性数(
例)T P P A 法阴性数(
例)符合率(％)１ɤS /C O＜３
２２３７０１５３３１．３９３ɤS /C O＜５
８０５５
２５６８．７５药剂师是什么
５ɤS /C O＜７
３７
３２
５８６．４９
７ɤS /C O＜９
５１
４６
５９０．２０
９ɤS /C O＜１０２０
１９
１９５．００
S /C Oȡ１０
４４１４４１０
１００．００合计
８５２
６６３
淘宝店铺怎么做推广１８９
７７．８２
㊀㊀３㊀R O C 曲线分析
㊀㊀以T P P A 法作为确证试验，对C M I A 法检测梅
毒特异性抗体的S /C O 值进行R O C 曲线，评价其诊断性能，结果发现，当C M I A S /C O 截断值为３．６１
时，灵敏度为８８．２％，特异性为９３．７％，此时曲线下面积最大为０．９７０，即C M I A 法的最佳诊断截断值是
３．６１.见图２
.
图２㊀C M I A 法检测梅毒特异性抗体R O C 曲线图
讨㊀㊀论
㊀㊀近年来人群中梅毒螺旋体感染率逐年增长[２,５]
，故梅毒螺旋体的检测尤为重要.在众多的检测方法
中，实验室血清学试验较为常用，选择灵敏度和特异性较高的方法就更是关键.
㊀㊀化学发光微粒子免疫法(C M I A )
可作为大规模梅毒特异性抗体检测首选筛选试验[６]
，本研究也证
实了这一结论.虽然C M I A 法操作方便,
自动化程度高，适宜大批量标本检测，但本研究中C M I A 法阳性率为１．４０％,C M I A 法与T P P A 法的阳性符合率
为７７．８２％，假阳性率为０．３１％,
可见有假阳性结果存在.因此为了避免医疗纠纷，有必要用特异性更
高的方法对C M I A 法阳性标本进行验证.而T P P A
法检测梅毒特异性抗体具有高度灵敏度和特异性,
是目前国内外广泛应用的梅毒确证试验[
４,７]
.但它操作复杂，很难实现自动化，反应时间长，肉眼判读结果主观性强，结果不易保存，导致其不适合大样本检测，因此更适用于对C M I A 阳性标本进行验证.
㊀㊀本研究显示男性的阳性符合率高于女性,
与其他作者的报道相同[８
].＞６０岁老年组C M I A 法检测梅毒特异性抗体的阳性预测值最低，也就是假阳义务兵役
性率较高，这与段雯等[９Ｇ１０]
的研究结果一致.可能
因为老年患者随着年龄增长，免疫功能逐渐异常，本身存在某些基础疾病或患有自身免疫性疾病㊁恶性肿瘤㊁感染性疾病等，或血清中存在一些干扰物质，如类风湿因子㊁免疫球蛋白㊁异嗜性抗体㊁补
体等，易产生假阳性结果[１１Ｇ１４]
；或者老年患者体内可能存在
有其他螺旋体共生，可能检测到的是体内的其他螺
旋体抗体，不是梅毒特异性抗体，这又增加了假阳性
结果出现的概率[１５]
.这应该引起全社会的重视，在
非高危人群的老年人中梅毒抗体阳性也不能作为感染梅毒的绝对依据，应该结合临床症状和体征进行综合分析，以免误诊为梅毒，给患者带来不必要的痛苦.
㊀㊀另外本研究还发现，在＜１８岁年龄组中C M I A 法检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性预测值也不高,
这与张薇等[６]
的观点相同.可能是因为这部分患者
年龄较小，通过性传播感染的机会不大，因此这部结果报告发出时需更加慎重.
㊀㊀本研究指出T P P A 法阳性患者的科室分布并不
均衡，皮肤科患者阳性例数最高，其次为泌尿外科㊁普外科㊁妇产科㊁消化内科.皮肤科承担性疾病的诊
０
３L a b e l e d I mm u n o a s s a y
s&C l i n M e d ,J a n ．２０２１,V o l ．２８,N o ．１
治以及国家哨点免费人群的检测，所以阳性例数最高；泌尿外科㊁普外科㊁妇产科为手术科室，消化内科需进行内窥镜的检查，这些操作前都需进行梅毒螺旋体抗体的检测，故本身检测量就大.
㊀㊀假阳性问题现在越来越受到临床医生的关注.本研究发现假阳性情况多出现在C M I A法检测的低值标本中，如S/C O值小于３的阳性符合率仅为３１．３９％.T P P A法阳性符合率随着S/C O升高而升高，当S/C Oȡ１０时，符合率达到１００％.而当S/C O＜１０时,C M I A法和T P P A验的结果存在不一致的情况，且S/C O值越小，二者的阳性符合率就越低，这与文献[１６]的研究结果一致.这也证
明了T P P A确证试验能有效排除C M I A法的假阳性结果.这些假阳性结果可能与恶性肿瘤㊁心血管疾病㊁自身免疫性疾病㊁妊娠等有关，因为这些疾病患者体内含有某些物质会与试剂中的抗原成分非特异结合，从而发生假阳性.
㊀㊀为了指导临床医生准确判断患者梅毒感染的真实情况，实验室需根据自身情况制订C M I A法检测梅毒特异性抗体的最佳截断值.本研究中经R O C 曲线分析发现,C M I A法的最佳诊断截断值是３．６１，此时灵敏度和特异性均较高，故具有较高准确度.这与杜静等[１７]３．１２５的报道接近.因此C M I A法S/C O值在１~１０，尤其是S/C O＜３．６１时，需加做T P P A确证试验，如与复检结果一致，可在报告单中备注.这样不仅优化了检测流程，提高了工作效率，也减少了相关医疗纠纷.
㊀㊀由于本研究收集标本多㊁来源广，所以研究结果对本地梅毒感染率的研究有参考价值.梅毒螺旋体抗体的血清学检测对梅毒诊断和治疗起着重要的作用，因此选择检测方法就尤为重要.虽然实验室检测梅毒螺旋体抗体的方法很多，但其各有优缺点: C M I A法适用于大量人群的筛查及辅助诊断;T P P A 法适用于对C M I A阳性人群的确证，两种方法联合使用，可提高诊断的准确率.在日常工作中，对于C I MA法阳性，尤其是S/C O值小于３．６１的标本要用T P P A法检测进行确证，再结合患者病史综合分析，提高检出率，避免漏诊误诊.
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[１０]L I U F,L I U L L,G U O X J,e ta l．C h a r a c t e r i z a t i o n o ft h e
c l a s s i c a l b i o l o g i c a l f a l s eＧp o s i t i v e r e a c t i o n i n t h e s e r o l o g i c a l t e s t
f o r s y p h i l i s i n t h em o d e me r a[J]．I n t I mm u n o p h a r m a c o l,２０１４,
２０(２):３３１Ｇ３３６．
虚拟语气练习题
[１１]陈晓宇．老年人梅毒抗体假阳性分析研究[J]．国际医药卫生导报,２０１８,２４(２３):３６７２Ｇ３６７４．
[１２]吴景良，李雪飞，王丹，等．住院患者梅毒血清学假阳性及梅毒检出情况报告[J]．临床皮肤科杂志,２０１４,４３(８):４７４Ｇ４７５．[１３]S H IH,L U O W,L IW,e t a l．S e r o l o g i c f a l s eＧp o s i t i v e r e a c t i o n s
f o r s y p h i l i s i n c h i l d r e no f a l l e r
g i c p u r p u r a[J]．C l i nC
h e m L a b
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[１４]张文静．基于血清学的梅毒假阳性的相关因素检验研究[J]．国际检验医学杂志,２０１６３７(１０):１３６２Ｇ１３６４．
[１５]李红．探讨梅毒血清学试验中特异性抗体与非特异性抗体检测的临床应用[J]．中国保健营养,２０１７,２７(７):１３５．
[１６]L IZ,F E N G Z,L I U P,e ta l．S c r e e n i n g f o ra n t i b o d i e sa g a i n s t T r e p o n e m a p a l l i d u m w i t h c h e m i l u m i n e s c e n t m i c r o p a r t i c l e
i mm u n o a s s a y:a n a l y s i s o f d i s c o r d a n t s e r o l o g y r e s u l t s a n d
commitincest性chinac l i n i c a l c h a r a c t e r i z a t i o n[J]．A n n C l i n B i o c h e m,２０１６,５３(P t
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标记免疫分析与临床㊀２０２１年１月第２８卷第１期
