LC/MS培训总结
一、仪器的维护与清洗
1.1换泵油
ewt工程师推荐半年换一次泵油，可根据实际情况进行（3月一次）；每次需两名男生，
换泵油时要准备废旧的纸板垫着，避免泵油污染地面等其他区域。
1.2机械泵基本维护（震气）
每两周1次，每次放空15 min，当下仪器状态不能在ON的状态；有放空阀（一般1
个月1次）。
1.3仪器开机具体事项
频繁开关机对真空度不好，最好一直保持在开机状态。主要开机流程如下：
打开氮气发生器（要等气源稳定，2 h左右，再准备开机）→换泵油→关机时间久，
先打开闸刀开关（机械开关）启动机械泵至少2 h，抽真空后再打开绿色开关（电子开关），平时30 min~1 h就行→启动电脑，开绿色开关，电脑状态栏中真空度要在10-8压力等级
（3个灯，前2个灯一定要绿色，如果最后1个为黄色，说明质量轴校正过期了）→Bake out，不超过15 h，此时质量轴要保持干净状态，没有杂质，这样可以使仪器最后处于
Stand by状态，如果off，可以重复Bake out→评估：看参数是否正常，若不成功，则需校正（每次使用前可以进行质量轴的校正，其他不能动）。
质量轴校正：Calibration：①目标离子出现；②稳定；③NL达到108。正离子信号：524，195；负离子信号：265，514。Scan pcrameter→polarity→positive/negative。
使TIC(总离子流)变化<10%（正离子）/15%（负离子），并趋于稳定。如果TIC不稳定，
先改Sheath gas flow rate鞘气（加速雾化），然后再调节辅助气Aux gas flow rate。
注：仪器后部有扇风口，那里的海绵没2周清洗1次，不能太用力揉，直接用水冲洗直到水变清澈，甩去大部分水，用卷纸按压吸水，然后晾干。
1.4清洗离子源
首先将Capillary temp(℃)由325℃降为100℃，点击apply→大概15 min后，换上干
净的离子传输管，立刻升温（高温可以保持整体的一个真空度）→将换下来的cone和离
子传输管进行超声清洗，先用0.1%甲酸水洗30 min，再用去离子水洗15 min→烘干cone
后装回去。
注：MS那里要先断电，再断气；装回去要先通气再通电。
二、仪器结构
2.1 MS
质谱仪由大气压离子源、离子导入S透镜组、弯曲四极杆离子传输、双曲面四极杆
质量过滤器、C-Trap离子聚焦和发射四级透镜、高能碰撞池HCD以及轨道阱Orbitrap组成，内部光路结构图如下：
2.2 HPLC
onthewhole
溶剂托盘（流动相、洗泵头溶液、洗针溶液）→脱气机→泵（并联、串联）→混合器
→purge阀（三通）→进样阀→色谱柱→检测器
旗标注：洗泵头溶液一般为纯水或5%甲醇水；洗针溶液为不含盐的流动相初始比例（反相：5%乙腈水；亲水：85%乙腈水）
jeans什么意思
hxc
职业技能培训网2.3 色谱柱
反相柱：也是疏水柱，根据相似相容原理，疏水的物质被保留时间会高于亲水性物质，也就是后出峰；填料是非极性的，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)最常用，C8、
C30、C4较少。在反相柱中C18（Octadecylsilyl，简称ODS），即十八烷基硅烷键合硅胶填料，这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％
的分析任务。由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各
种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了CH、C3、C4等短链烷基
键合相和大孔硅胶（20～40μm）。
亲水柱：正向色谱柱（固定相的极性>流动相极性），柱子填充料是极性比较大的物质，一般是硅胶柱、酰胺柱、氨基柱等。
极性柱：柱子的极性取决于固定相的极性，两性的盐离子。
拿到新柱子后，要先拿标样进行柱效的检测。活化柱子待定方式：用洗脱能力最强的溶液来冲洗3 h，（正相：一般为50%水/50%有机溶剂；反相：一般85%有机溶剂）
10~15个柱体积冲洗。柱子使用完后一般保存在85%乙腈水里。一般柱子都有最高限压
向明中学（不超过该压力）、最高温度（不得长期处于该温度）和合适的pH范围。柱子填料的粒
径越小，分离效果越好，柱身可以制造得越小。柱子品牌有岛津、Thermo、Waters、TSK 等。此外，C18一定不要用纯水冲，至少5%或8%的有机相。
三、仪器的使用
3.1 配置流动相的注意事项
（1）坚决流动相里乙腈不加醋酸铵；含盐的流动相要超滤。
学好英语的方法
英语自我介绍范文（2）配置好的流动相要超声：目的是除气，250 mL蓝盖瓶不旋紧，超声15 min防止过热。
（3）用在质谱上的流动相含盐的话一定要用挥发性盐（醋酸铵、甲酸铵、碳酸氢铵等），不能用不挥发性盐。
（4）三氟乙酸会对负离子信号有一个抑制作用，最好不要用。
使用反相柱时：A
3.2冲洗管子（去盐）
换好A相（H2O）→打开purge阀（逆时针转2圈）→进入LC控制系统（变色龙软件）→点more options设定5 min→点start→然后purge on大概5 min。如果管子里还有气泡，重新purge。
3.3洗针（自动进样器）、活化柱子
洗针溶液为不含盐的流动相初始比例（反相：5%乙腈水；亲水：85%乙腈水）
Prine syimge:10(点start) →洗进样环（wash buffer loop:300 uL，点start）→洗针外壁（用有机相B，wash needle externaly）→关闭purge阀（顺时针转2圈）→A,B各50%，走
5 min→sample，点start→装柱→冲洗柱子（活化：可以用85%、95%、100%的乙腈，也
可以用保存柱子的浓度）流速0.35 mL/min, 冲15~20个柱体积→用正常流动相进行分析3.4方法的建立
（1）打开Xcalibur软件，点击instrument tup
（2）在出现的页面中打开一个已有的方案，在这基础上进行修改。注意一定要另存自己修改的方案，不要覆盖前人的方案。
（3）先设定HPLC条件，点击变色龙图案，设定柱温箱ColumnOven的temperature为40℃，其他条件不变。
（4）设定流动相的梯度。先在Flow的gradent type中选择Multi-Step gradient，然后点击Multi-Step gradient，修改时间点和流动相梯度，进行其他条件不变。
take up什么意思如：梯度：time: 0 —10min—12min—16min—16.5min—20min
B ：10%—10%—35%——35%——10%——10%
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清理
