分类号：R734.2单位代码：10159
密级：公开学号：201520296硕士学位论文
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中文题目：放疗联合CpG-ODN及PD-1抑制剂对小鼠lewis肺癌的企望
抑制作用
英文版童话英文题目：Antitumor effect of radiotherapy combined with CpG-ODN and
PD-1blockade in in murine tumor models
论文作者：庄源
指导教师：李光教授
闺蜜的英文学科专业：肿瘤学
shockingpink
完成时间：2018年2月
dinosaur
中国医科大学硕士学位论文
炒鱿鱼的英文
放疗联合CpG-ODN及PD-1抑制剂对小鼠lewis肺癌的抑制作
用
Antitumor effect of radiotherapy combined with CpG-ODN and PD-1
blockade in in murine tumor models
论文作者庄源指导教师李光
申请学位医学硕士培养单位第一临床学院
一级学科临床医学二级学科肿瘤学
研究方向肺癌的放射治疗
论文起止时间2017年1月—2018年2月
论文完成时间2018年2月
中国医科大学（辽宁）
考研红宝书
2018年2月
摘要
实验目的：1、建立C57/BL小鼠的lewis肺癌模型2、观察RT联合PD-1抑制
剂联合CpG-ODN的三联疗法的抗肿瘤效果。3、对三联疗法抗肿瘤作用的机制进行初步探索。
实验方法：建立荷瘤小鼠模型，右后肢皮下种植作为primary肿瘤，左背部皮下种植作为condary肿瘤。待右后肢瘤体长到直径为5mm左右时，对荷瘤小鼠进行随机分组，分为6组（A.B.C.D.E.F）A组：空白对照Control。B组：单纯放疗RT。C组：RT联合PD-1blockade。D组：RT联合CpG-ODN。E组：PD-1blockade联合CpG-ODN。F组：三联疗法组。隔天使用电子游标卡尺对肿瘤大小进行测量为观察。部分小鼠用于生存时间的观察，观察到第80天。部分小鼠于第24日处死以收获脾脏和完整肿瘤组织，采用研磨法获得单细胞悬液，采用酶消化法提取肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，
2011年一本分数线
流式细胞术检测脾脏和TIL中的CD8+T/CD4+T细胞淋巴细胞的频率以及表型，检测CD8+T细胞分泌的IFN-γ和TNF-α，从而分析CD8+T淋巴细胞功能。同时，还检测了肿瘤浸润树突细胞的成熟和活化。此外，检测了脾脏和TIL中CD4+Foxp3+Treg细胞的频率。为直观观察三联疗法的作用效果与CD8+T细胞与CD4+T细胞的关系。另设G组：三联疗法+CD8+Tcell抑制抗体组，H组：三联疗法+CD4+Tcell抑制抗体组。对三联疗法组出现“完全肿瘤消退”的荷瘤小鼠采取大剂量肿瘤细胞冲击眼验证荷瘤小鼠的免疫记忆型。钢仔特攻队
实验结果：三联疗法组的荷瘤小鼠出现了明显的肿瘤生长抑制，甚至出现“完全的肿瘤消退”，且这种抗肿瘤作用具有系统性，并明显延长了小鼠的生存时间。在联合治疗组可以观察到CD8+T cell比例的明显增高，增高的表型主要为效应记忆型，而在CD8+T cell删除组，联合治疗的效果则明显降低。进一步分析发现不仅CD8+T cell的比例明显增加，其活化和对肿瘤的杀伤能力也大幅度提高，表现为分泌的IFN-γ和TNF-α增多。我们还在三联疗法组检测到肿瘤浸润树突细胞的活化增强。此外，联合治疗还使得具有负性调节作用的调节性T细胞的比例下降，进一步加强了机体的抗肿瘤效果。联合治疗还具有有效的免疫记忆性，在冲击接种后，略见瘤体出现，随即肿瘤消退。不仅如此，三联疗法对荷瘤小鼠的血象影响和其肺毒性甚微。
实验结论：三联疗法能有效抑制肿瘤的生长，明显延长了小鼠的生存时间，增强了CD8+T细胞的的频率和功能，加强了肿瘤浸润树突细胞的成熟活化，并且能减
弱肿瘤局部Treg细胞免疫抑制功能。此外。在有效的抗肿瘤作用的基础上，其安全性也得到了肯定，使得这种新型治疗策略更具有临床意义和价值。
关键词：肺癌；放射治疗；PD-1；CpG
