微分干涉差显微镜
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一、DIC显微镜原理简介。
1952年,Nomarski在相差显微镜原理的基础上发明了微分干涉差显微镜(differential interference contrast microscope)。DIC显微镜又称Nomarski相差显微镜(Nomarki contrast microscope),其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比,其标本可略厚一点,折射率差别更大,故影像的立体感更强。
DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器(analyzer)。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了石英Wollaston棱镜,即DIC棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜,即DIC滑行器,它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。在
光束形成目镜DIC影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象,通常是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本的人为三维立体感,类似大理石上的浮雕。
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图 DIC显微镜下的硅藻(伪彩色)
sw是什么冀教版小学英语课件 DIC显微镜使细胞的结构,特别是一些较大的细胞器,如核、线粒体等,立体感特别强,适合于显微操作。目前像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。
二、DIC观察操作过程:
第一步:打开显微镜机身上的电源开关。
第二步:把聚光镜最底下的起偏镜推入光路。
第三步:把聚光镜里面的DIC环板(标有8,U-DIC40)转入光路。
第四步:40X镜头转入光路。
第五步:转动物镜转盘内插入的检偏镜滑块的旋钮,以达到想要的偏光效果。
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注:pinkie swear明场和荧光观察时,把聚光镜最底下的起偏镜,聚光镜里面的DIC环板,都移出光路,如果不移出来对成像的影响是亮度会变暗。
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三、荧光观察操作过程:
第一步:打开荧光光源(桌子上白色的有计时显示的那个装置)。
第二步:把相应的荧光激发块转入光路,把shutter打开。
第三步:调焦清楚观察标本。herstockings
注:荧光汞灯光源每次开关间隔不得少于半小时,频繁开关会减少光源的寿命,较强的暗电流有可能会损坏光源。
四:明场观察操作步骤:
第一步:打开打开显微镜机身上的电源开关。
第二步:把荧光激发块移出光路,否则成像的背景是有颜色的,把偏光相应的附件移出光路,否则视野的亮度会降低。
第三步:拿标本进行聚焦观察。
hang ng bank注:光源每次开关间隔不得少于15分钟,每次开关前确定光强调节钮处于最小光强位置。
五、总结一下
1、 明场和DIC观察用一个光源,遵守明场光源注意事项,荧光观察独立使用一个光源,遵守荧光观察光源注意事项。
2、明场和荧光观察时,DIC附件移出光路。明场和DIC观察时候,荧光激发块移出光路。