南京大学医学院附属鼓楼医院 医学检验中心 goooleCenter of Laboratory Science Affiliated Gulou Hospital,Medical college of Nanjing University | 造血干/祖细胞计数（CD34+）操作程序 | 编 号：Sop-CL-0322008年考研英语真题 日 期：2004-10-01 版 本：第二版 第 1 页 共 2 页 |
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一、目的：
保证流式细胞仪检测外周血或骨髓液中造血干/祖细胞计数的工作质量，旨在保证造血干/祖细胞计数检测正确的操作程序和控制检测结果的精确度。
二、修改程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。
三、适用范围：
外周血或骨髓液中造血干/祖细胞计数。
四、溯源：
美国BD公司ProCOUNT Progenitor Cell Enumeration Kit 产品说明书(CAT:340498)。
ft是什么意思
五、实验原理：
ProCOUNT方法根据祖细胞的特征，低SSC、CD45弱阳性、核酸染料阳性及CD34阳性；采用核酸染料/CD34/CD45染色方法，特异识别样本中干/祖细胞，同时，ProCOUNT实验加入TRUCOUNT绝对值计数管作定量分析，计算CD34+细胞cell/ul，从而避免了血球计数仪可能带来的误差。
六、主要试剂：
ProCOUNT Progenitor Cell Enumeration Kit (美国BD Biosciences公司；CAT:340498)，
其中包括：1、核酸染料/CD34-PE/CD45-PreCP
2、核酸染料malindi/IgG1-PE/CD45-PreCP
3、TruCOUNT Tubes
七、实验操作：
1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml；或新鲜肝素抗凝骨髓。
2、染色和固定细胞：
（1） 标本管编号A，另取TruCOUNT管两只AT、AC。
（2） AT管加入核酸染料/CD34-PE/CD45-PreCP 20ul。AC管加入核酸染料/IgG1-PE/CD45-PreCP 20ul。
（3） AT、AC管中精确加入全血50Ul，混均。
（4） 置室温，避光孵育15min。
成人英语培训（5） 加入FACSLysing溶血液0.5ml，置室温，避光孵育30min。
3、混匀后上机检测；仪器自动分析结果；打印实验报告。
八、参考值：
外周血CD34+细胞：0.01-0.1%
骨髓中CD34+细胞：0.05-0.5%
九、临床意义：
在恶性血液病时，大剂量化疗或放疗摧毁了病变的骨髓细胞后，造血干细胞移植保证了血细胞及基质细胞的造血重建。实体瘤患者也可以通过造血干细胞移植抵抗大剂量化疗造成的致死性血液毒性，延长了患者的生命。造血干细胞计数可以判断动员效果，掌握干细胞采集时机。也可通过检测采集物中CD34+responsiblefor细胞含量，确定回输的量，通常要求CD34+细胞回输量应达到2*106/KG体重。
十、质量控制：宝威
1、 采用免洗方法，避免了洗涤过程中CD34+细胞的丢失。
2、 因CD34+细胞数量较少，因此收集细胞数至少大于60000个/ul。
一般将来时态3、 采用反向加样技术，避免因血液粘附于滴头，而影响实验结果准确性。
4、 使用TruCOUNT管，直接计数CD34+细胞绝对数，避免血球计数器带来可能的误差。
授 权 人 | 质 vlai量 主 管 | 操 作 人 员 | 生 效 日 期 |
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