2021年第5期广东化工
第48卷总第439期 · 173 · UV法快速检测辅酶Q10软胶囊的含量
邓乾华1,2，杨善彬1,2*，李想1,2，冯婷婷1,2，张雪华1,2，夏艳1,2，陈荣彬1,2，
廖友林1,2，陶桂英2，王晓楠1，苟文琼1，唐佳丽1，李倩蘭1，李霄2,3，蒲道俊2,3* (1．重庆师范大学化学学院，重庆401331；2．重庆师范大学活性物质生物技术教育部工程研究中心，重庆401331；
3．西南药业股份有限公司缓控释制剂重庆市企业重点实验室，重庆400038)
[摘要]以无水乙醇作为溶剂，在检测波长274 nm的条件下，建立了一种用紫外-可见分光光度计快速检测辅酶Q10含量的方法。以辅酶Q10标准品质量浓度(C)为横坐标，以不同浓度标准品的吸光度测量值(A)为纵坐标建立标准曲线，得线性回归方程为：y=0.0251x-0.0053，R2=0.9996，在1.02~25.50 μg/mL范围内呈现良好的线性关系。且该方法具有精密度高、稳定性和重现性好等优点。
[关键词]紫外-可见分光光度法；辅酶Q10；含量检测
[中图分类号]O657.3 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2021)05-0173-02
Using UV-vis Spectrophotometry to Detect the Content of Coenzyme Q10 Soft
Capsule Rapidly
Deng Qianhua1,2, Yang Shanbin1,2*, Li Xiang1,2, Feng Tingting1,2, Zhang Xuehua1,2, Xia Yan1,2, Chen Rongbin1,2,
Liao Youlin1,2, Tao Guiying2, Wang Xiaonan1, Gou Wenqiong1, Tang Jiali1, Li Qianlan1, Li Xiao2,3, Pu Daojun2,3*
(1. College of Chemistry, Chongqing Normal University, Chongqing 401331；2. Engineering Rearch Center for Biotechnology of Active Substances, Ministry of Education, Chongqing Normal University, Chongqing 401331；3. Chongqing Enterpri Key Laboratory of Sustained and Controlled Relea Preparations of Southwest Pharmaceutical Co., Ltd., Chongqing 400038, China) Abstract: Anhydrous ethanol as solvent, detection wavelength at 274 nm, a method for measuring the content of coenzyme Q10 was established by UV-vis spectrophotometry. Using the standard quality concentration of Coenzyme Q10 (C) as the abscissa, and the absorbance measurement value (A) of the standards of different concentrations as the ordinate to establish a standard curve, the linear regression equation was y=0.0251x-0.0053, R2=0.9996. It shows a good linear relationship in the range of 1.02~25.50 μg/mL. This method has the advantages of high precision, good stability and reproducibility.
Keywords: UV-vis spectrophotometry；Coenzyme Q10；Content determinationfarmington
pul
辅酶Q10(Coenzyme Q10)，又名泛醌[1]。其结构类似于维生素E、维生素K与质体醌相似，在人体细胞内参与能量制造及活化，是预防动脉硬化形成最有效的抗氧化成分[2-3]。临床研究已经证实，辅酶Q10具有提高人体免疫力、增强抗氧化能力和延缓衰老等，可用于心血管系统疾病的辅助治疗，同时也作为营养保健品及食品添加剂被广泛使用[4]。
目前，针对辅酶Q10的检测方法主要有高效液相色谱法和紫外
-可见分光光度法[5]。高效液相色谱法是一种高速、高效、高灵敏度的分离分析方法[6]。但是其分析成本高、日常维护费用昂贵、分析时间长，不适合长时间的频繁测定。紫外-可见分光光度法具有操作简单、检测成本低、分析速度快等优点[7-8]。本文建立了紫外-可见分光光度法测定辅酶Q10含量的方法，进行了方法学考察，并应用于检测辅酶Q10软胶囊中辅酶Q10的含量。
1 材料与仪器
1.1 材料
辅酶Q10(1611109F2)，浙江医药股份有限公司新昌制药厂；辅酶Q10标准品(925B022)，北京索来宝科技有限公司；无水乙醇(2018020701)，成都科隆化学品有限公司；辅酶Q10软胶囊(20200530)，实验室自制。
1.2 仪器
紫外-可见分光光度计(Uv-2550)，日本岛津仪器有限公司；电子天平(FB124)，上海佑科仪器仪表有限公司；超纯水仪(KMR-10)，成都浩纯仪器设备设备有限公司；康士洁超声波清洗机(PL-J08)，东莞市康士洁超声波科技有限公司。
2 方法与结果
2.1 最大吸收波长的确定
可能的英文
称取适量辅酶Q10标准品于50 mL容量瓶中，加入无水乙醇超声溶解，冷却至室温，定容、摇匀。在200~400 nm范围内进行紫外全波长扫描，结果见下图。
图1 辅酶Q10标准品紫外扫描图
Fig.1 Ultraviolet scanning of coenzyme Q10
根据图1可知，辅酶Q10标准品溶液在274 nm处有最大吸收，确定274 nm为辅酶Q10最大吸收波长。
2.2 标准曲线的绘制
称取5.10 mg辅酶Q10标准品于50 mL容量瓶中，加入无水乙醇超声溶解，冷却至室温后，配置成0.102 mg/mL储备液。分别移取0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL、10.0 mL、12.5 mL储备液于50 mL容量瓶中，再次用无水乙醇稀释为一系列浓度梯度的溶液，取适量样品溶液在274 nm处测量其吸光度，结果见下表。
[收稿日期] 2020-12-31
[基金项目] 重庆市高校创新团队项目( CXTDX201601018)；活性物质生物技术教育部工程研究中心开放基金项目(No.20150408，AS201903)；重庆师范大学成果转化项目基金(15XZH08)；重庆师范大学博士启动项目(12XLB006)；重庆市大学生创新创业训练计划项目(S201910637014，
S202010637012)；重庆市社会事业与民生保障科技创新专项项目(cstc2015shmszx80060)
[作者简介] 邓乾华(1995-)，女，四川人，硕士研究生，研究方向为天然产物化学。
*为通讯作者：杨善彬，男，教授，博士，研究方向为药物化学与制药工程。
蒲道俊，男，高级工程师，研究方向为药物开发和应用。
表1 吸光度测量结果
Tab.1 Measurement results of absorbance
浓度C/(μg/mL) 1.02 2.04 5.10 10.20 15.30 20.40 25.50 吸光度0.029 0.040 0.121 0.247 0.381 0.509 0.635
图2 辅酶Q10标准曲线Fig.2 Standard curve of coenzyme Q10
根据表1所知，以辅酶Q10标准品质量浓度为横坐标，以不同浓度标准品的吸光度测量值为纵坐标建立标准曲线，结果见图
2。
根据图2可知，线性回归方程为：y=0.0251x-0.0053，R2=0.9996。说明辅酶Q10标准品溶液在1.02~25.50 μg/mL范围内，
呈现良好的线性关系。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度实验
制备10.20 μg/mL、15.30 μg/mL、20.40 μg/mL三种不同浓度的辅酶Q10标准品溶液，取样，于274 nm处连续测量6次，记录
alarming
其吸光度值，并计算RSD值，结果见下表。
根据表2所知，不同浓度辅酶Q10标准品溶液的RSD均小于
2 %，说明该方法精密度良好。
表2 精密度实验测量结果
Tab.2 Measurement results of precision experimental
浓度/(μg/mL) 1 2 3 4 5 6 RSD/%
10.20 0.247 0.247 0.248 0.249 0.247 0.246 0.418
15.30 0.381 0.380 0.380 0.381 0.382 0.381 0.198
knowledge20.40 0.509 0.508 0.507 0.506 0.509 0.509 0.249
2.3.2 稳定性实验
制备10.20 μg/mL、15.30 μg/mL、20.40 μg/mL三种不同浓度的辅酶Q10标准品溶液，室温下避光放置，每隔2 h取样于274 nm 处测量其吸光度，共6次，并计算RSD值，结果见下表。
表3 稳定性实验测量结果
Tab.3 Measurement results of intraday stability experiment
浓度/(μg/mL) 0 h 2 h 4 h 6 h 8 h 10 h RSD/%
音乐用英语怎么说10.20 0.247 0.249 0.244 0.246 0.250 0.248 0.873
15.30 0.381 0.379 0.382 0.380 0.378 0.383 0.492
20.40 0.509 0.512 0.511 0.509 0.508 0.511 0.304
根据表3所知，不同浓度的辅酶Q10标准品溶液在室温下避光放置10h，其浓度未曾发生太大的变化，RSD均小于2 %，说明辅酶Q10标准品溶液在室温下避光放置10 h比较稳定。
2.3.3 重复性实验
称取20.00 mg辅酶Q10原料药于100 mL棕色容量瓶中，加入无水乙醇超声溶解，冷却至室温后定容、摇匀。取供试品溶液5.0 mL于50 mL棕色容量瓶中，继续用无水乙醇稀释，制备6份同等浓度的供试品溶液，取样，于274 nm处测量其吸光度，并计算RSD值，结果见下表。
表4 重复性实验测量结果
Tab.4 Measurement results of repeated experiments
供试品 1 2 3 4 5 6 RSD/% 吸光度0.282 0.290 0.290 0.295 0.293 0.291 1.532
根据表4所知，测量6份同等浓度供试品溶液的吸光度，其RSD值小于2 %，说明其重复性好。
2.4 测定辅酶Q10软胶囊中辅酶Q10的含量
称取辅酶Q10软胶囊内容物0.20 g于50 mL棕色容量瓶中，加入无水乙醇超声溶解，冷却至室温后定容、摇匀。过0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释定容，取样，于274 nm处测量其吸光度，并计算含量，结果见下表。
表5 含量测定结果
Tab.5 Measurement results of content determination
样品 1 2 3 平均值/(mg/粒)
welly吸光度0.040 0.043 0.041
17.25
含量/(mg/粒) 16.76 17.87 17.13
根据表5可知，辅酶Q10软胶囊的平均含量为17.25 mg/粒。
3 结论
本文运用紫外-可见分光光度法建立了一种测量辅酶Q10含量的方法，以无水乙醇作为空白溶剂，经紫
外图谱扫描，确定其在274 nm处有最大吸收。在274 nm处测量不同浓度下辅酶Q10标准品溶液的吸光度，并建立标准曲线，得线性回归方程：y=0.0251x-0.0053，R2=0.9996，辅酶Q10标准品在1.02~25.50 μg/mL 范围内，呈现良好的线性关系。该方法具有精密度高、稳定性和重现性好等优点，运用该方法测定辅酶Q10软胶囊中辅酶Q10的平均含量为17.25 mg/粒。与其他分析检测方法相比较，该方法操作简单、分析速度快、结果准确可靠，可用于各种药物制剂中辅酶Q10含量的快速检测。
参考文献
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(下转第184页)
u(x 0)=974/408726×(1/1+1/5+0.007191/0.09172)1/2=0.00269 μg/mL
自由度n x =5-2=3
相对不确定度u(x 0’)=0.00269/(2.96×20/1000)=0.04544
2.3.2.8 标准溶液引入的不确定度
本实验采用的标准溶液为直接购买的国家标准物质，编号为GBW(E)082711A ，浓度为1000 μg/mL ，不确定度为2 %，按均匀
分布，标准溶液纯度的相对不确定度u(S)=u(S 02
。
月份
配置校准曲线采用微量进样器，并用1 mL 使用线性最小二乘法拟合曲线，拟合的前提是横坐标的量的不确定度远小于纵坐标的量的不确定度，因此标准溶液配置浓度的不确定度的计算仅与峰面积不确定度有关，因此忽略该分量。 2.3.2.9
()u C
()u C u(C)=0.003419 μg/mL 2.3.2.10 合成不确定度评定jeans是什么意思
2.3.2.11 扩展不确定度的评定
取包含因子k=2，置信概率=95 %，β-六六六测量结果的扩展标准不确定度U(X)为：
U(X)=u(X)×k=2×0.16μg/kg=0.32 μg/kg 。 2.4 不确定度报告与表示
本次实验测量结果为2.96 μg/kg ，用气相色谱仪测定土壤中β-六六六的扩展不确定度为：U 95%=0.32 μg/kg(k=2)，结果表示为2.96±0.32 μg/kg 。
2.5 不确定度结果分析
根据上述计算可知，校准过程中引入的相对不确定度为0.0578，称量过程引入的相对不确定度为0.001445，定容过程引入的相对不确定度为0.0058，稀释过程为0，根据数据可知，校
准过程中引入的相对不确定度占主导，这与陆华等研究结果相一致[12]，即在低浓度时，校准过程带来的不确定度是整个不确定度的主要来源。
3 结论
本实验通过对气相色谱仪测定土壤中β-六六六进行不确定度评定，分析了不确定度的来源，建立合理的数学模型，经过计算，该测量样品β-六六六的扩展不确定度为：U 95%=0.32 μg/kg(k=2)，结果表示为2.96±0.32 μg/kg 。根据分析结果可知，校准过程引入的不确定度所占比例较高，称量和定容过程相对较少。
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(上接第174页)
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