conduction
盐酸地芬尼多片体外溶出一致性评价研究
唐小鹏，陈 莉，陈珉珉，欧阳春华
（株洲市食品药品检验所，湖南 株洲 412011）
摘 要：目的 考察盐酸地芬尼多片国产仿制药与原研药的体外溶出一致性。方法 采用高效液相色谱法（HPLC ）测定盐酸地芬尼多在不同溶出介质中的溶解度，绘制溶解度曲线。测定A 、B 、C 三厂家自研剂与原研药在4种不同溶出介质（pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水）中的溶出度，分别绘制溶出曲线，并采用相似因子（f 2）法对自研剂和原研剂的溶出曲线进行拟合分析。结果 A 、B 、C 三厂家国产仿制药在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、水中的溶出行为与原研药一致，而在pH 6.8磷酸盐溶液中，仅B 厂产品与原研药溶出曲线一致。结论 部分国产仿制药尚需进行工艺改进，以达到与原研药体外溶出一致。关键词：盐酸地芬尼多片；体外溶出；一致性评价；相似因子
中图分类号：R943 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2018）02-0132-04
Consistency Evaluation of In Vitro Dissolution of Difenidol Hydrochloride Tablets
TANG Xiao-peng, CHEN Li, CHEN Min-min, OU YANG Chun-hua (Zhuzhou Institute for Food and Drug Control , Zhuzhou 412011, China )
Abstract: Objective To rearch the in vitro dissolution consistency between the generic and original preparations of Difenidol Hydrochloride Tablets. Methods The solubility of difenidol hydrochloride in different dissolution mediums were determined by HPLC, and the solubility curves were drawn. The dissolution of the generic preparations from A, B, C companies and the original preparation in 4 different dissolution mediums (pH 1.2 hydrochloric acid solution, pH 4.0 sodium acetate solution, pH 6.8 phosphate solution, water) were determined, then the dissolution curves of tho preparations were drawn, and the similarity factors (f 2) were calculated to evaluate the in vitro dissolution consistency between the generic and original preparations. Results The dissolution properties of the generic preparations from A, B, C companies were similar to the original preparation in pH 1.2 hydrochloric acid solution, pH 4.0 sodium acetate solution and water. But in pH 6.8 phosphate solution, only the preparation B has similar dissolution curve to original preparation. Conclusion Some generic preparations need to be improved in order to have the same in vitro dissolution as original preparation.
Key Words: Difenidol Hydrochloride Tablets; in vitro dissolution; consistency evaluation; similarity factor
收稿日期：2017-08-01
基金项目：湖南省食品药品监督管理局食品药品安全科技项目（湘食药科R201618）作者简介：唐小鹏，硕士研究生，从事药品质量检验研究 E-mail:
家人用英语怎么说盐酸地芬尼多片用于防治多种原因引起的眩晕、恶心、呕吐，原研厂家为日本新药工业株式会社，目前国内已批准注册的生产企业为41家。为提升国内制药行业的整体水平，国家从2012年开始推出仿制药的质量一致性评价[1]。相比复杂、昂贵的体内生物等效性评价，体外溶出度一致性评价简单
方便、灵敏度高，用体外溶出度一致性评价对仿制药进行筛选，能大大提高体内生物等效性评价的成功率。多种pH 值体外溶出曲线的测定能全方位地反映仿制药与原研药在不同介质中的溶出行为差异，是国内外评价口服固体制剂品质的重要手段[2-3]。本文参照日本橙皮书公布的盐酸地芬尼多
片的溶出度测定方法，考察了国产仿制药在4种不同介质中的溶出曲线，并采用相似因子法（f2）对国产仿制药和原研药进行评价。
1 仪器与试药
1.1 仪器
AG-135电子分析天平（梅特勒-托利多）；RCZ-8M溶出试验仪（天津天大天发）；Agilent 1260 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；pHS-3F型pH计（雷磁-上海仪电）；SHY-2A恒温水浴振荡器（上
海世平实验设备公司）。
1.2 试药
updating是什么意思
盐酸地芬尼多原料药（湖南千金湘江药业，批号151010，含量100.0 %）；市场抽检盐酸地芬尼多片国产仿制药3批（规格25 mg/片，均为糖衣片，A、B、C 3家企业生产）；盐酸地芬尼多片原研药（日本新药工业株式会社，规格25 mg/片，批号381601）；盐酸地芬尼多对照品（中国食品药品检定研究院，批号10084-201303，含量99.6 %）；盐酸，乙酸，三乙胺（分析纯，国药集团）；乙酸钠，磷酸二氢钾，氢氧化钠（分析纯，天津光复）；甲醇为色谱纯，水为超纯水。
障碍物2 方法与结果
2.1 盐酸地芬尼多溶解度曲线的测定
2.1.1不同pH介质的配制考察盐酸地芬尼多原料药在pH 1.2，pH 2.0，pH
3.0，pH
4.0，pHbubble
5.5，pHsuperfly
6.0，pH 6.8，pH 8.0和水9种不同介质中的溶解度，不同pH值介质参考《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》[4]（以下简称指导原则）配制，实测各介质的pH值为±0.1左右，水的pH值为5.8。
2.1.2溶解度曲线的测定精密称取盐酸地芬尼多原料药约2.0 g，置入250 ml锥形瓶，加入上述9种不同pH介质100 ml，密塞，置37±0.5 ℃恒温水浴振荡器中振摇24 h，静置，取上清滤过，续滤液稀释后按2.2项方法测定，计算盐酸地芬尼多在不同pH介质中的溶解度S（mg/ml），结果见图1。结果表明，盐酸地芬尼多在各pH介质中均能较好地溶解，均达到漏槽条件，在pH 4.0介质中溶解度最高，为25.4 mg/ml。由于其p K a=9.5，呈弱碱性，当介质pH达到6.0以后，溶解度急剧下降，pH 6.8时溶解度下降到
3.6 mg/ml。
图1 盐酸地芬尼多溶解度曲线（37 ℃）2.1.3不同pH介质中稳定性测定将2.1.2项下过饱和溶液在37±0.5 ℃恒温水浴中放置0，12，24，36，48，72 h后分别取样，滤过，取续滤液稀释后测定含量，计算溶解度。结果表明盐酸地芬尼多在上述9种不同介质中，72 h内的溶解度RSD（n=6）分别为0.40 %，0.52 %，0.38 %，0.69 %，0.41 %，0.83 %，0.85 %，1.22 %，0.66 %，均小于2.0 %，说明稳定性良好。
2.2 溶出度测定
2.2.1溶出介质的选择参照指导原则及盐酸地芬尼多溶解度曲线的测定结果，选择以下4种溶出介质进行下一步考察：pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水。
2.2.2含量测定
2.2.2.1色谱条件[5]色谱柱：Inertsil ODS-3 C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为0.5 %三乙胺溶液（用磷酸调pH 4.0）-甲醇（44:56）；流速1.0 ml/ min；柱温30 ℃；检测波长210 nm；进样量20 µl。laura story grace
2.2.2.2 溶液的配制精密称取盐酸地芬尼多对照品约25 mg，置入100 ml量瓶，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置入50 ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45 µm滤膜滤过，作为对照品溶液。取2.2.3项下各溶出度测定样品10 ml，0.45 µm滤膜滤过，弃去初滤液5 ml，续滤液作为供试品溶液。
2.2.2.3 专属性考察分别取4种溶出介质、处方辅料溶液（取玉米淀粉、羧甲纤维素、滑石粉等处方辅料，按比例混匀后，称取约0.05 g，按对照品溶液配制方法配制辅料溶液，0.45 µm滤膜滤过）、盐酸地芬尼多对照品溶液各20 µl
，注入高效液相
色谱仪，记录色谱图，结果见图2。结果表明流动相、各溶出介质、处方辅料对盐酸地芬尼多的测定无干扰，方法专属性良好。
A：空白辅料；B：pH 1.2盐酸溶液；C：pH 4.0醋酸盐溶液；D：pH 6.8磷酸盐溶液；E：水；F：盐酸地芬尼多对照品
图2 各溶液色谱图
2.2.2.4线性关系考察精密称取盐酸地芬尼多对照品约30 mg，置入100 ml量瓶，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1，2，3，4，5 ml各4份，置入50 ml量瓶，分别用4种溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取20 µl，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，以盐酸地芬尼多质量浓度为横坐标（X），色谱峰面积为纵坐标（Y）进行回归分析。结果表明在6.01~30.05 µg/ml 范围，盐酸地芬尼多在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水中线性关系均良好，回归方程分别为：Y=25.597X+5.48，r=0.9997；Y=26.664X-1.91，r=0.9997；Y=26.146X+22.04，r=0.9994；Y=26.426X +4.98，r=0.9997。
2.2.2.5稳定性考察将盐酸地芬尼多对照品溶液及4种溶出介质的供试品溶液于室温放置0，4，8，12，
16，20，24 h后取样，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，结果对照品溶液以及4种溶出介质的供试品溶液峰面积的RSD（n=7）分别为0.68 %，0.82 %，0.69 %，1.04 %，0.90 %，表明溶液稳定性良好。
2.2.2.6加样回收率考察精密称取盐酸地芬尼多对照品适量，置入100 ml量瓶，按处方比例加入辅料试剂，分别用4种溶出介质振摇溶解并定容至刻度，滤过，精密量取续滤液5 ml，置入50 ml 量瓶，加溶出介质稀释至刻度，制成质量浓度为20.03，25.04，30.05 µg/ml的对照品溶液，每个浓度平行配制3份。将各对照品溶液注入高效液相色谱仪测定含量，计算回收率。得到盐酸地芬尼多在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水中的回收率依次为99.63 %，100.22 %，99.76 %，99.83 %，RSD（n=9）依次为0.38 %，0.65 %，0.42 %，0.59 %，表明盐酸地芬尼多在4种溶出介质中回收率良好。
2.2.2.7滤膜干扰测定取盐酸地芬尼多片1片，置入900 ml溶出介质，超声30 min使溶解，摇匀，取10 ml溶液2份，一份经高速离心后取上清注入高效液相色谱仪，另一份用微孔滤膜（尼龙0.45 µm）过滤，弃去初滤液5 ml，续滤液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果两种方法处理的样品峰面积一致，表明微孔滤膜对盐酸地芬尼多的溶出度测定无干扰。
2.2.3溶出度测定根据指导原则的要求，仿制药与原研药进行体外溶出度一致性考察应尽量采用原研药
公布的溶出度测定方法[4]。因此，本文采用日本橙皮书公布的盐酸地芬尼多片溶出度测定方法对国产仿制药进行考察。采用溶出度测定第二法浆法，分别取pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水为溶出介质，介质体积900 ml，温度37±0.5 ℃，转速50 r/min。取仿制药和原研药各12片，依法操作，并在5，10，15，20，30，45 min时取样10 ml，用0.45 µm滤膜滤过，弃去初滤液5 ml，取续滤液作为供试品溶液，按2.2.2项方法测定含量，计算溶出度，绘制溶出曲线。2.3 溶出曲线测定结果
盐酸地芬尼多片国产仿制药与原研药在4
种不
a：原研药；b：A企业国产仿制药, c：B企业国产仿制药,
d：C企业国产仿制药
图3 国产仿制药与原研药在4种不同溶出介质中
的平均溶出曲线
同溶出介质中的平均溶出曲线（n =12）见图3。2.4 溶出度一致性评价结果
advi的用法
对盐酸地芬尼多原研药与国产仿制药在各个取样时间点的溶出度平均值，采用非模型依赖的相似因子法（f 2）进行分析，f 2值大于50则认为仿制药与参比制剂溶出曲线相似[4]。f 2的计算公式为：
f 2=50log{[1+
t t 1
1(-)n
i R T n
often是什么意思=∑]-0.5×100}其中n 为取样时间点的个数，R t 为原研药在t 时刻的溶出度值，T t 为国产仿制药在t 时刻的溶出度
值。根据指导原则，当仿制药与原研药在15 min 内的溶出量≥85 %时，认为仿制药与原研药溶出行为相似，无需进行f 2值的比较。由表1可见，3家不同企业的国产仿制药在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、水中， 15 min 内溶出量均85 %以上，溶出行为与原研药相似。但在pH 6.8磷酸盐溶液中，3家企业中仅其中一家与原研药一致，另外2家在pH 6.8磷酸盐溶液中溶出量很低，与原研药相差甚远。
表1 相似因子拟合结果
溶出介质样品溶出量/%f 20 min 5 min 10 min 15 min 20 min 30 min 45 min pH 1.2盐酸溶液
原研0659195969899─A 0276585919499─B 0558288969799─C 0347089949699─pH 4.0醋酸盐溶液
原研05889939799100─A 02472929698100─B 05385929498100─C 04282969798100─pH 6.8磷酸盐溶液
原研0598793979899─A 058121824359B 0387485899699─C 024354246556829水
原研05589959898100─A 02470879296100─B 04587939497100─C
38
78
90
94
96
99
─
3 讨论
本文选取pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐溶液、pH 6.8磷酸盐溶液、水4种溶液作为溶出介质，测定受试制剂的溶出曲线，既符合人体不同生理部位pH 的变化规律，也覆盖了盐酸地芬尼多的溶解范围。结果表明，制剂在4种介质中的溶出速率为pH 4.0醋酸盐溶液＞水＞pH 1.2盐酸溶液＞pH 6.8磷酸盐溶液，与盐酸地芬尼多在以上4种溶液中的溶解度大小顺序一致。
根据生物药剂学分类系统（BCS ）分类原则[6]，盐酸地芬尼多属于BCS Ⅰ类高溶解度高渗透性药物。通常BCS Ⅰ类药物溶出速度较快，因此在绘制溶出曲线时选取5，10，15，20，30，45 min 为取样点，能灵敏地反映制剂在不同介质中的溶出行为，便于与国产仿制药进行充分比较。
溶解度高的药物并不一定溶出速度快，制剂配方、生产工艺对药物的溶出有一定影响，对于糖衣片来说，制剂的崩解速度对药物溶出速率影响很大[7]
。本文对市场抽检3家企业的国产仿制药进行
了考察，结果仅一家企业能达到4条溶出曲线与原研药一致，另外两家企业仅3条溶出曲线与原研药一致，在pH 6.8磷酸盐溶液中溶出度均偏低，与原研药相差甚远。
目前国内仿制药质量一致性评价已拉开帷幕，各企业需要进一步改善生产工艺、提高产品质量，保证临床疗效，才能在激烈的市场竞争中立于不败之地。
参考文献
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