-中药工业-
UPLC 同时测定通迪胶囊中8个活性成分的含量△
薛尧*
*，展冠军，马静△［基金项目］
江苏省南京药学会一一常州四药医药药学科研基金项目(299XY926)
* ［通信作者］ 薛尧，药剂师，研究方向：临床药学；E-mail ： 7533734962@qq. com
南京市大厂医院，江苏南京010948
［摘要］目的：建立超高效液相色谱法（UPLC ）同时测定通迪胶囊中3个活性成分的含量。方法：采用UPLC
同时测定通迪胶囊中三七皂苷R 7、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg 7、人参皂苷Re 、延胡索乙素、鸡矢藤 苷甲酯、人参皂苷RS 的含量，采用ACQUILY UPLC BEH 0/色谱柱（（54 mmx2. 7 mm , 7.7 p m ），流动相为乙腈
（A ）-9. 73%磷酸溶液（B ），梯度洗脱；检测波长293 nm （三七皂苷R 7、人参皂苷Rg 7、人参皂苷Re 、人参皂苷
Rb|）、276 X1（白花丹醌及去氢延胡索甲素）、289 nm （延胡索乙素）、347 nm （鸡矢藤苷甲酯），流速/.CmL-miy-7，柱
温34 C ，进样量2pL 。结果：三七皂苷R 7、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg 、人参皂苷Re 、延胡索乙
素、鸡矢藤苷甲酯、人参皂苷RS 检测质量浓度分别为9.937 ~9.69、9.917 ~9.227、9.710 ~4, 307, 9.720 -9. 700,
9.917 ~9.22、9.927 ~9. 414、9.095 ~ 9. 099、9.917 ~9.228 mg-mL -；平均加样回收率分别为 99.7%、98 4%、
96.2%、99.6%、96.9%、95.7%、96.9%、97.4%。结论：该方法简单、有效、结果准确，可用于通迪胶囊中上
述8个活性成分含量的同时测定。
［关键词］超高效液相色谱法；通迪胶囊；含量测定
［中图分类号］R236 ［文献标识码］A ［文章编号］1673 4899（2927）94 479446
doi ：14. 1339// issn. 1673 4899. 20209542093
Simultaneyue Determination of Eight Conskthents in Tongd ： Capsules by UPLC
XUE Yvo * , ZHAN Guan-jun , MA JUg
Nanjing DacOang Hospital , Nanjing 010948 , China
［Abstract ］ Objective : To establish an UPLC method for the simultaneous deOrminahoo of eight coostituenW in
Toogdi Capsules. Method:: The determinahoo was penormed on ACQUILY UPLC BEH C ^ （ 94 mm x 0. 7 mm , 7. 2 p m ） column with modile pha consisted of aceOoitrile A. 73 % phosphoho acid （ ypgiebt elution （ at the C ow rate of 9. 3 mL - min - 7.
The deOction wavelength was t at 203 nm for noOginnoside R 7 , yixeboside Rg 7 , yixeboside Re and yixeboside Rb 7 ,
276 nm for plumbagin and UePyyrofusooe , 239 nm for Otradyypxalmahne , 347 nm for feretosihe , the column temperaOre was t at 34 C and the injection volume was 0 p L. Resultt : The linear range was 9. 9310. 610 my • mL -7 for noOginnoside
R 7 , 9.9110.227 my - mL - for plumbagin , 9. 924. 327 my - mL - for UePyyrofusooe , 9. 7294. 790 my - mL - for yixeboside Rgi , 9.7114.22 my • mL 7 for yixeboside Re , 9.7214.414 my • mL 7 for OWagyyropalmahne , 9.795
91 099 my • mL -7 for feretoside , 9. 7114. 223 my • mL -7 for yixenoside Rb7 , respecnvolyi Average recoveries were 99. 7% , 98. 7% , 96. 7% , 99. 7% , 96. 9% , 95. 7% , 96. 7% and 97. 7% , nwectOby. Concision ： The method is siople ,
ebechve and accypte. It can be ud for simuOaneous deOrminahoo of 8 active coostituenW in Toogdi Capsulesi
［Keywonis ］ UPLC ； Toogdi Capsules ； deOrminahoo of content
通迪胶囊由三七、紫金莲、延胡索、七叶莲、 鸡矢藤、细辛2味中药制成，具有活血行气、散瘀
止痛之功效，临床常用于头痛、痛经、肩颈痹痛、
脘疼痛、胃痛、跌打疼痛、术后疼痛及癌症疼痛
等［7］0方中君药三七为五加科植物三七Panax
ootoginng (Burk. ) F. H. Chec 的干燥根和根茎，具 有散瘀止血、消肿定痛之功效，主要含有皂苷类成 分和多糖化合物，其中活性成分主要为三七皂苷R 7、
-704 -
人参皂苷Rg/、人参皂苷R”和人参皂苷Rb）®6；紫金莲所含主要活性成分白花丹醌，其显著的抗菌、抗病毒、抗凝血、抗生育、降血压及祛痰等作用，对痤疮和细菌感染引起的疖也有很好的治愈作用［°5］；延胡索具有活血散瘀、理气止痛之功效，其活性成分主要为生物碱类，典型代表化合物有去氢延胡索甲素、延胡索乙素等，是延胡索发挥镇痛、镇静解痉主要药理活性成分［2］；鸡矢藤是一种常用民族民间药，具有消食健胃、化痰止咳、清热解毒及止痛的功效，环烯醚萜苷类成分鸡矢藤苷甲酯是其主要生物活性成分，是其抗炎镇痛作用的主要药理活性成分［10］°通迪胶囊现行标准中对三七中人参皂苷Rb i等成分做了定量检测规定，相关文献也有采用高效液相色谱法（HPLC/检测通迪胶囊中三七皂苷R/、人参皂苷Rg）、人参皂苷Rb）、细辛脂素、白花丹醌等成分，但未见采用超高效液相色谱法（UPLC/测定通迪胶囊中多种活性成分的报道［/1/］°本研究采用UPLC同时测定通迪胶囊中三七皂苷R、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Ry】、人参皂苷R”、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲
酯和人参皂苷Rb5个活性成分含量，方法简单实用、科学准确，能为系统客观评价通迪胶囊质量提供参考。
1材料
ACQUIUY UPLC M-Clas s型超高效液相色谱仪（美国Waters公司）；AE226型触摸式彩屏电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；HU9159D 型恒奥数控超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；LaPTowar EDI型超纯水仪（美国赛默飞世尔公司）。
通迪胶囊市售，规格：2.25g/粒，贵州景诚制药有限公司生产，批号分别为76321、7257、76621、76625、72923、777、777、72325、79467129422；去氢延胡索甲素对照品（批号：7/22，纯度：902%）购自上海融禾医药科技有限公司；鸡矢藤苷甲酯对照品（批号：27736878，纯度：902%）购自上海源叶生物科技有限公司；白花丹醌对照品（批号：P0946，纯度：95.2%）购自上海纯优生物科技有限公司；白花丹醌对照品（批号: SLBG3636V，纯度：902%）购自美国Sigma公司；对照品三七皂苷R）（批号：112775821912，纯度：5.2%）、人参皂苷R”（批号：112776821527，纯度：93.4%）、人参皂苷Rg）（批号：72723821731，纯度：93.6%）、人参皂苷R/i（批号：7772682726，纯度：91.1%）、延胡索乙素（批号：11272682778，纯度：99.2%/均来源于中国食品药品检定研究院；甲醇和乙腈均为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。
2方法与结果
241色谱条件
色谱柱为ACQUIUY UPLC BEH C7（159mm X 2.1mm,55j m）；流动相为乙腈（A）8.23%磷酸溶液（B），梯度洗脱（2~5mid,2%-7%A；5-8mix,/%-7%A；8-/mix,7%-/%A；/-22mix,/%-45%A；22-22mix,45%-59%A；26-33mix,59%-95%A；33-35mix, 65%〜2%A）；检测波长：223nm（2〜6、7-7、22-35mh，检测三七皂苷R）、人参皂苷Rg/、人参皂苷Ro及人参皂苷Rb［/、270nm（6-7mix，检测白花丹醌及去氢延胡索甲素）、286nm（7-22mix，检测延胡索乙素）、347nm（22-22mix，检测鸡矢藤苷甲酯）；流速：2.3mL-mi/"1；进样量：2j L；柱温：32°C。
242溶液的制备
24.1混合对照品溶液精密称取三七皂苷R）、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg i、人参皂苷R”、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯和人参皂苷Rb对照品各适量，加55%甲醇制成三七皂苷R71.931mymL-、白花丹醌2.552mymL-、去氢延胡索甲素2.862mg-mL-1、人参皂苷Rgi /026mg-mL"7人参皂苷Re2.525mymL"、延胡索乙素1.236mymL"、鸡矢藤苷甲酯2.245mg-mL-7和人参皂苷Rb）2.569mg-mL"7的混合对照品储备溶液。精密量取上清液1mL，置7mL量瓶中，加85%甲醇稀释至刻度，混匀，滤过（2.22j m），取续滤液，即得混合对照品溶液。
244供试品溶液取通迪胶囊内容物适量，混合均匀，取细粉约2.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入55%甲醇35mL，称定质量，加热回流2h，放冷置室温，再称定质量，用85%甲醇补足减失质量，摇匀，滤过（2.22j m），取续滤液，即得。243系统适用性试验
取混合对照品溶液和供试品溶液，按24项下
-705-
色谱条件，精密吸取9 p L 注入UPLC 仪，记录色谱
图，结果见图1o 结果，各目标化合物与前后杂质
峰分离完全（X.5），色谱峰对称性良好（0.92~
1. 6），理论塔板数均大于5500，表明该色谱系统 适应本方法。
4
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15
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//min
Z/min
注：A.混合对照品溶液；B 供试品溶液；0三七皂苷R 1； 2.
白花丹醌；3•去氢延胡索甲素；0.人参皂苷Ru 1； 5：人参皂苷
Re ； 6.延胡索乙素；7 .鸡矢藤苷甲酯；&人参皂苷Rb 1o
图1对照品及通迪胶囊UPLC 图
2.4线性关系考察
取2.2.1项下混合对照品储备溶液，精密吸取
0. 5、0 0、2. 0、5. 0、8 0、6. 4 mL ，分别置于 25 mL 量瓶中，加88%甲醇稀释至刻度，摇匀，得 不同质量浓度对照品混合溶液。按22项下色谱条
件分别进行测定，记录色谱图，以质量浓度（X ）为
横坐标，各成分峰面积（Y ）为纵坐标进行线性回 归，绘制标准曲线，求算回归方程及『，结果见表 1o 取2.2.1项下混合对照品溶液，按成倍稀释法，
记录当信噪比（S/N ） = 3及S/N = 5时各成分质量
浓度，分别标记为该成分检测限和定量限，结果见 表1o
2.5精密度试验
取2.2.1项下混合对照品溶液，按2.1项下色 谱条件连续进样2针，记录色谱图峰。结果三七皂
苷R 1、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg 1、 人参皂苷Re 、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯和人参皂 苷Rb 0峰面积的RSD 分别0.3%、0.5%、0.4%、
0. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 6%、0. 3% （a = 6），表 明仪器精密度良好。
2.6稳定性试验
取同一批通迪胶囊供试品（批号：3030、）溶液， 按2.1项下色谱条件，分别于配制后0、3、6、5、
6、24、36、48 h 进样，结果三七皂苷R 1、白花丹
醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rgi 、人参皂苷Re 、 延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯、人参皂苷Rb 峰面积
的 RSD 分别为 0.5%、0.8%、0.2%、0.4%、
0. 8%、0 8%、0 0%、0. 6% （a =8），表明 48 h 内
供试品溶液的稳定性良好。
2.7重复性试验
取同一批通迪胶囊供试品（批号：180361）内容物 适量，混合均匀，按2.2.2项下方法，平行制备2份供
试品溶液，按2. 5项下色谱条件进行测定分析，记录色补肾壮阳吃什么药效果好
谱图峰面积，计算各成分含量RSD o 结果三七皂苷R
白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg 1、人参皂苷
Re 、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯、人参皂苷Rb 含量
RSD 分别为 0. 4%、0. 2%、0. 4%、0. 4%、0.2%,
0 4%、0. 8%、0. 5% （a =6），表明方法重复性良好。
2.8加样回收率试验老师的重要性
取已知含量的通迪胶囊样品（批号：36325内 容物适量，平行2份，每份1.0 g ，精密称定，分别 加入混合对照品储备溶液0 2 mL ，按2.2.2项下方法 制备，按2. 5项下色谱条件进行测定分析，记录色谱
峰，计算各成分的加样回收率及RSD ，结果见表9o
表1
通迪胶囊线性关系、检测限及定量限考察结果
成分
回归方程
厂
线性范围/mg ・mL-1
upnp怎么开启
检测限/ p g • mL "1
定量限/ p g *
m L 1
三七皂苷R 17 二 846. 36X + 36. 29 4. 999 6 4. 431 .-4 : 250.58
学会成长0 89白花丹醌y = 265. 85X + 8. 91 4. 999 1 4.43 .-0.221
4. 36 2. 70
去氢延胡索甲素7 = 354 10X-10. 81 4. 998 2 4.45 .-0.361 3.3416. 48人参皂苷R u 17 = 1 384. 23X +29. 6 4. 999 6 4. 020 :-0.0621236
五五开是谁4. 39
人参皂苷Re 7 二 632. 91X + 0. 60 4. 999 4 4.43 .-0.210
2. 40 6. 17
延胡索乙素7 = 354 16X-7. 88
4. 999 1 4. 921 .-4.055236
17. 62鸡矢藤苷甲酯
7 = 541. 02X-36. 07
4. 998 6 4. 005 :-0.299 3.9516. 60人参皂苷Rb 1
7 二 632. 13X + 18. 31
4. 999 4
4. 43 .-4.923
0 98
3.44
-706
-
成分样品中含量/mg对照品加入量/my测得量/my回收率6%平均回收率/%RSD6%三七皂苷R70.5530.6058.2299.5799.70.4
0.5110.6058.2599.59
0.5090.6058.2099.61
0.5530.6058.2199.60
0.5200.605 5.29999.60
0.5090.6058.12102.77
白花丹醌00944 2.933 1.38196.6393.40.2
《赠范晔》古诗0.945 2.933 1.37693.46
0.947 2.933 1.6693.59
0.945 2.933 1.6693.91
00944 2.933 1.37499.2
0.945 2.933 1.37693.47
去氢延胡索甲素 1.2939 5050.6296.2096.091
1.2999 5050.52098.2
1.3019 5050.05197.50
1.2939 5050.59595.21
1.2979 5050.62097.01
1.2999 5050.6296.20
人参皂苷Rg 1.3539 760 5.56799.9499.60.4
1.3539 760 5.56699.38
1.649 760 5.57699.31
1.3769 760 5.57799.74
1.699 760 5.55793.70
1.649 760 5.56399.04
人参皂苷Re0.741 2.390 1.72093.2790.99 5
0.799 2.390 1.70397.77
0.733 2.390 1.60797.70
0.797 2.390 1.53995.55
0.740 2.390 1.59497.79
0.790 2.390 1.59096.39
延胡索乙素 1.6209 7713733097.298.70.2
1.7209 771 5.29798.10
1.629 771 5.30798.39
1.6179 771 5.29598.2
1.6209 771 5.30995.92
1.629 771 5.23794.77
鸡矢藤苷甲酯0.330 2.4200.79795.2090.991
0.330 2.4200.74097.25
0.335 2.4200.74993.05
2.3330740.74496.17
00340074 2.75097.60
2.3330740.74897.2
人参皂苷RS 2.353 2.407 1.6497.3597.49 8
2.60 2.207 1.79796.79
2.355 2.207 1.3999.9
2.65 2.207 1.329
3.35
世界儿童日2.60 2.207 1.79996.39
2.61 2.207 1.7695.77
2.9样品测定
取10批通迪胶囊样品，按2.4.4项下方法制备供试品溶液，按2.2项下色谱条件测定，记录色谱图，按外标法求算三七皂苷R7、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rg、人参皂苷Re、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯、人参皂苷RS的质量分数，结果见表3。
-707-
质量分数
myg-7
批号
三七皂苷R）白花丹醌去氢延胡索甲素人参皂苷R/i人参皂苷Re延胡索乙素鸡矢藤苷甲酯人参皂苷Rb］
1323210.817 2.945 5 296 1.370 2.775 5 2/ 2.340 2.377 132517 4.534 2.943 5 8205350 2.734 5 217 2.334 2.352 70621 4.455 2.947 5 2935377 2.207 5 210 2.334 2.351 70625 4.481 2.945 5 2925865 2.233 5 620 2.346 2.866 729230.57 2.943 5 8215377 2.257 5 219 2.346 2.865 71210 4.487 2.945 5 299 1.865 2.205 5 2/ 2.339 2.860 7127 4.495 2.945 5 2975374 2.731 5 219 2.333 2.862 179325 4.482 2.946 5 8255375 2.752 5 217 2.346 2.866 179421 4.489 2.947 5 8245370 2.772 5 629 2.346 2.865 179420 4.577 2.949 5 8245863 2.207 5 620 2.332 2.355
3讨论
341提取条件的优化
本研究分别考察了不同提取介质（82%乙醇、32%乙醇、36%甲醇、85%甲醇及甲醇）、不同提取方式（浸渍、超声、加热回流）、不同提取时间（32、62、172mix）对通迪胶囊中8个成分提取效果的影响，结果显示，以55%甲醇为溶出介质时，加热回流2h提取效果最佳。
342色谱条件的优化
在波长选取时，笔者通过查阅相关文献资料，在222-462nm波长对各考察成分进行光谱扫描，发现各
成分最大吸收峰位置存在差异，以单一波长很难实现5成分同时测定，最终实验采用分段波长自动切换法开展，即223nm（2~6、7~7、36-35 mix，检测三七皂苷R）、人参皂苷Rg/、人参皂苷Re及人参皂苷Rb7）、272nm（6~7m/，检测白花丹醌及去氢延胡索甲素）、282nm（18~22mP，检测延胡索乙素），347nm（22~26m/，检测鸡矢藤苷甲酯）［I/N4］°流动相选取时，分别考察甲醇8.1%磷酸水溶液、乙腈8.1%磷酸水溶液、乙腈8.1%甲酸水溶液及乙腈8.1%醋冰酸水溶液等流动相系统，发现乙腈8.1%磷酸水溶液系统最佳，在此条件下5个成分均有较好信号强度，且与前后杂质峰分离度较好，为减少高浓度磷酸溶液损伤仪器，最终流动相定为乙腈8.23%磷酸水溶液进行梯度洗脱。
本研究建立UPLC同时测定通迪胶囊中8个活-728-性成分含量，通过对准确性及精密度等指标的考察，发现方法准确度高、重复性好、简单实用，可用于通迪胶囊中三七皂苷R）、白花丹醌、去氢延胡索甲素、人参皂苷Rgi、人参皂苷R”、延胡索乙素、鸡矢藤苷甲酯、人参皂苷Rb含量的同时测定，为通迪胶囊质量评价提供参考。
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（下转第775页）
