黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞活力、增殖
及ＨＭＧＢ１表达的影响
张健１ ，彭煜晖１，李毅１，梁欣明１，付文莉１，张婷１，柏华２，禹文峰１，吴昌学１ ，
张启芳１
（１ 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室＆贵州省医学分子生物学重点实验室，贵州贵阳 ５５０００４；２ 贵州医科大学第三附属医院医学中心实验室，贵州都匀 ５５８０００）
［摘 要］目的 探讨黄连素（ＢＢＲ）对去势抵抗性前列腺癌（ＣＲＰＣ）紫杉醇（ＰＴＸ）耐药细胞活力、增殖及高迁
移率族蛋白１（ＨＭＧＢ１）表达的影响。方法 取对数生长期的ＰＴＸ耐药前列腺癌细胞株ＤＵ１４５Ｒ
，用０、５、１０、２０、３０及５０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理，采用细胞计数试剂盒８（ＣＣＫ８）分别于４８和７２ｈ评估６组ＤＵ１４５Ｒ细胞的细胞活力；分别用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、１０及２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理对数生长期的ＤＵ１４５Ｒ细胞，采用细胞克隆形成实验检测３
组ＤＵ１４５Ｒ细胞的克隆形成数；利用Ｏｎｃｏｍｉｎｅ数据库与人类蛋白质图谱数据库（ＨＰＡ）分别分析ＨＭＧＢ１
ｍＲＮＡ
及蛋白在前列腺癌和正常组织中的表达，利用ＴＩＭＥＲ２ ０数据库分析ＨＭＧＢ１表达与前列腺癌患者生存的相关性；取对数生长期细胞ＤＵ１４５及ＤＵ１４５Ｒ（分为０、１０及２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理组），采用蛋白印迹法检测２组细胞中ＨＭＧＢ１蛋白表达。结果 与０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组相比，各浓度组ＤＵ１４５Ｒ细胞的细胞活力降低（Ｐ＜０ ０５）；与ＤＭＳＯ组相比，５和１０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组ＤＵ１４５Ｒ细胞的克隆形成数量减少（Ｐ＜０ ０５）；与正常组织相比，前列腺
癌组织中ＨＭＧＢ１ｍＲＮＡ及蛋白表达增加（Ｐ＜０ ００１），且ＨＭＧＢ１高表达与前列腺癌患者不良预后相关（Ｐ＝
０ ０１９３）；与ＤＵ１４５组相比，ＤＵ１４５Ｒ各组细胞ＨＭＧＢ１的表达明显增高（Ｐ＜０ ００１）；与０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组相比，１０和２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组ＤＵ１４５Ｒ细胞ＨＭＧＢ１蛋白表达下调（Ｐ＜０ ０５）。结论 ＢＢＲ可抑制ＣＲＰＣＰＴＸ耐药细
胞增殖、细胞活力及ＨＭＧＢ１的表达。
手抄报样式图片大全［关键词］前列腺肿瘤；前列腺癌细胞；紫杉醇；耐药；Ｏｎｃｏｍｉｎｅ数据库；人类蛋白质图谱；高迁移率族蛋白
１；黄连素
［中图分类号］Ｒ７３７ ２５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］２０９６ ８３８８（２０２１）０６ ０６３２ ０７
ＤＯＩ：１０．１９３６７／ｊ．ｃｎｋｉ．２０９６ ８３８８．２０２１．０６．００３史祖能
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｂｅｒｂｅｒｉｎｅｏｎｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄＨＭＧＢ１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ
ＺＨＡＮＧＪｉａｎ１，ＰＥＮＧＹｕｈｕｉ１，ＬＩＹｉ１，ＬＩＡＮＧＸｉｎｍｉｎｇ１，ＦＵＷｅｎｌｉ１
，ＺＨＡＮＧＴｉｎｇ１，ＢＡＩＨｕａ２，ＹＵＷｅｎｆｅｎｇ１，ＷＵＣｈａｎｇｘｕｅ１，ＺＨＡＮＧＱｉｆａｎｇ
１（１．ＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｄｅｍｉｃａｎｄＭｉｎｏｒｉｔｙＤｉｓｅａｓｅｓ＆ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆ
ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｅｎｔｅｒ，ｔｈｅＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄｕｙｕｎ５５８０００，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｂｅｒｂｅｒｉｎｅ（ＢＢＲ）ｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，
ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｐｒｏｔｅｉｎ１（ＨＭＧＢ１）ｏｆｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（ＰＴＸ）ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｉｎｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ（ＣＲＰＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｅＰＴＸ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｒａｉｎ
ＤＵ１４５Ｒ
ｉｎｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０，５，１０，２０，３０，ａｎｄ５０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ，ａｎｄｔｈｅ
第４６卷 第６期２０２１年６月 贵州医科大学学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＺＨＯＵＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ｖｏｌ．４６ Ｎｏ．６
２０２１．６
［基金项目］国家自然科学基金（３１９６０１３７）；贵州省科技厅重点基金［黔科合基础（２０１６）１４１６］ 贵州医科大学２０１８级研究生 通信作者
Ｅ ｍａｉｌ：３４８９２１５７６＠ｑｑ．ｃｏｍ；１５０７２９５１１４＠ｑｑ．ｃｏｍ
ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ８（ＣＣＫ８）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＤＵ１４５Ｒｃｅｌｌｓａｔ４８ａｎｄ７２ｈ．ＴｈｅＤＵ１４５ＲｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＤＭＳＯ，１０，ａｎｄ２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｃｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｏｆＤＵ１４５Ｒｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｃｅｌｌｃｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅ
ｎｔ．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＯｎｃｏｍｉｎｅｄａｔａｂａｓｅａｎｄＨｕｍａｎＰｒｏｔｅｉｎＡｔｌａｓＤａｔａｂａｓｅ（ＨＰＡ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴＩＭＥＲ２．０ｄａｔａｂａｓｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ａｎｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ．ＴｈｅｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｃｅｌｌｓＤＵ１４５ａｎｄＤＵ１４５Ｒ（ｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ０，１０，ａｎｄ２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ）ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅＨＭＧＢ１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｔｈｇｒｏｕｐｓｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＤＵ１４５Ｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅ０μｍｏｌ／ＬＢＢＲｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＤＭＳＯｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆＤＵ１４５Ｒｃｅｌｌｓｃｏｌｏｎｉｅｓｉｎｔｈｅ５ａｎｄ１０μｍｏｌ／ＬＢＢＲｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｐｒｏｓｔａｔｅｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＨＭＧＢ１ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｐｒｏｓ
ｔａｔｅｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜０ ００１）．Ｐｌｕｓ，ＨＭＧＢ１ｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ（Ｐ＝０．０１９３）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＤＵ１４５ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｉｎＤＵ１４５Ｒｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０ ００１）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅ０μｍｏｌ／ＬＢＢＲｇｒｏｕｐ，ＤＵ１４５ＲｃｅｌｌｓｏｆＨＭＧＢ１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎ１０ａｎｄ２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０ ０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＢＢＲｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｉｎＣＲＰＣＰＴＸ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｐｒｏｓｔａｔｉｃｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ；ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ；ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｏｎｃｏｍｉｎｅｄａｔａｂａｓｅ；ｈｕｍａｎｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ（ＨＰＡ）；ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ１（ＨＭＧＢ１）；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ（ＢＢＲ）
前列腺癌是男性泌尿系统的恶性肿瘤，已成为全世界男性癌症相关死亡率的第２大原因［１］，因其早期症状与前列腺炎相似，常被人忽视，致使多数前列腺癌患者在被诊断时已为转移性前列腺癌（
ｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ，ｍＰＣａ）［２］。ｍＰＣａ通常接受雄激素剥夺治疗［３］，该疗法在早期阶段有效，然而许多ｍＰＣａ患者慢慢发展雄激素不敏感，即去势抵抗性前列腺癌（ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒ，ＣＲＰＣ）［３］。紫杉醇（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ，ＰＴＸ）通常为ＣＲＰＣ患者标准治疗选药，ＰＴＸ是一种生物碱，可通过作用于细胞微管发挥其抗肿瘤作用，但是ＣＲＰＣ对ＰＴＸ的耐药性限制了其治疗效果［４］。小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ＢＢＲ）是一种天然生物碱化合物，存在于几种药用植物中，如刺檗；因它可从中药黄连中分离，又称黄连素，是黄连抗菌的有效成分［５］。近几年研究表明，ＢＢＲ能通过不同靶基因有效地抑制几种肿瘤细胞生长，也可通过上调ｍｉＲ ２０３增强胃癌细胞对顺铂的敏感性，亦可通过抑制核因子κＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａ Ｂ，ＮＦ κＢ）通路阻碍黑色素瘤细胞Ａ３７５ Ｓ２迁移［６－７］；ＢＢＲ可以诱导胶质母细胞瘤细胞Ｕ２５１和Ｕ８７进入衰老状态，不再生长［８］；ＢＢＲ通过诱导肝癌细胞自噬介导的死亡和凋亡介导的死亡［９］。但是，ＢＢＲ对ＤＵ１４５Ｒ细胞的影响机制尚不清楚。此外，高迁移率族蛋白１（ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐｂｏｘ１，ＨＭＧＢ１）在多种癌组织的表达也显著高于相应的正常组织［１０－１１］；ＨＭＧＢ１和ＲＡＧＥ共表达与前列腺癌不良预后密切相关［１２］；小鼠结肠癌细胞ＣＴ２６中，ＨＭＧＢ１的释放促进了细胞的转移［１３］；ＨＭＧＢ１可通过激活蛋白激酶Ｂ信号通路从而促进前列腺癌的转移［１４］。重要的是，在人耐ＰＴＸ去势性前列腺癌细胞中抑制ＨＭＧＢ１的表达后，细胞增殖受到显著抑制［１５］，但在人耐ＰＴＸ去势性
前列腺癌细胞中ＢＢＲ是否与ＨＭＧＢ１作用尚不清楚。因此，本研究拟探讨ＢＢＲ是否可通过ＨＭＧＢ１表达影响ＤＵ１４５Ｒ的细胞活力和增殖，现将结果汇报如下。
１ 材料与方法
１ １ 材料
１ １ １ 细胞来源 人前列腺癌细胞株ＤＵ１４５细胞购于美国模式培养物集存库（Ａｍｅｒｉｃａｎｔｙｐｅｃｕｌ ｔｕｒｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ），人耐ＰＴＸ去势性前列腺癌细胞株ＤＵ１４５Ｒ为本实验室构建。
６期张健等 黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞活力、增殖及ＨＭＧＢ１表达的影响
１ １ ２ 主要试剂和仪器 ＲＰＭＩ１６４０培养基及澳
洲胎牛血清（美国Ｇｉｂｃｏ），黄连素（中国大连美仑生物），兔抗单克隆抗体ＨＭＧＢ１与ＨＲＰ标记的抗兔的二抗（美国ＣＳＴ），超敏化学发光试剂盒（ｅｎ ｈａｎｃｅｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＥＣＬ）和聚偏二氟乙烯（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅｆｌｕｏｒｉｄｅ，ＰＶＤＦ）膜（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ），二辛可宁酸（ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃａｃｉｄ，ＢＣＡ）蛋白定量试剂盒和蛋白Ｍａｒｋｅｒ（美国Ｔｈｅｒｍｏ），抗体稀释液、封闭液、十二烷
基苯硫酸钠－聚丙烯酰胺（ｓｏｄｉｕｍｄｏ ｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ ＰＡＧＥ）凝胶配置试剂盒（中国碧云天），ＰＴＸ和二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ；美国Ｓｉｇｍａ），ＧｅｎｅＧｎｏｍｅＸＲＯＮＰＣ化学发光成像仪（英国ＳＹＮ ＧＥＮＥ），ＶａｒｉｏｓｋａｎＬＵＸ多通道酶标仪（美国Ｔｈｅｒ ｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ），Ｂｉｏ ＲｄａＭｉｎｉⅡ／Ⅲ垂直电泳仪和Ｂｉｏ ＲｄａｐｏｗｅｒｐａｃＨＣ高流电源（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ）。
１ ２ 方法
１ ２ １ 细胞培养及处理 人前列腺癌细胞株ＤＵ１４５及ＰＴＸ耐药前列腺癌细胞株ＤＵ１４５Ｒ放于含有１０％胎牛血清和１×Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ的ＲＰＭＩ１６４０培养基，５％ＣＯ
２
的３７℃培养箱中培养。
１ ２ ２ 细胞活力检测 取对数生长期ＤＵ１４５Ｒ细胞，调整细胞悬液浓度为１×１０４个／孔，接种于９６孔板中。使用０、５、１０、２０、３０及５０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ（即０、５、１０、
２０、３０及５０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组）处理４８和７２ｈ，使用细胞计数试剂盒８（ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ ８，ＣＣＫ８）检测４５０ｎｍ波长处的光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ，
ＯＤ）值，并计算抑制率［抑制率＝（ＯＤ
对照组
－
ＯＤ
处理组）／ＯＤ
对照组
×１００％］评估细胞活力。
１ ２ ３ 细胞克隆形成实验 取对数生长期ＤＵ１４５Ｒ细胞，消化重悬制备为单细胞悬液，调整细胞浓度为３×１０３接种于６孔板中，ＤＭＳＯ、１０及２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理细胞（即ＤＭ
ＳＯ组、１０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组及２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组），每３天更换１次含药物的培养基，１４ｄ后甲醇固定，结晶紫染色并计算克隆形成数量。
１ ２ ４ ＨＭＧＢ１基因表达分析及预后分析 利用Ｏｎｃｏｍｉｎｅ数据库分析ＨＭＧＢ１ｍＲＮＡ在人前列腺癌及正常组织中的差异表达，然后利用人蛋白质图谱（ｈｕｍａｎｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ，ＨＰＡ）数据库分析ＨＭＧＢ１在正常组织和前列腺癌中的蛋白表达差异；使用ＴＩＭＥＲ２ ０在线分析工具分析ＨＭＧＢ１基因表达于前列腺癌患者预后的关系，根据ＨＭＧＢ１基因表达中位值将前列腺癌患者分为ＨＭＧＢ１高表达组与ＨＭＧＢ１低表达组。
１ ２ ５ 蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）法检测ＨＭＧＢ１蛋白表达 取对数生长期细胞ＤＵ１４５作为ＤＵ１４５组，０、１０及２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理对数生长期ＤＵ１４５Ｒ细胞分别作为０、１０及２０μｍｏｌ／ＬＤＵ１４５Ｒ组，收集各组细胞，提取总蛋白，蛋白上样３０μｇ，８０Ｖ恒压电泳并将目的蛋白转移到ＰＶＤＦ膜；５％脱脂牛奶室温封闭１ｈ，室温下孵育ＨＭＧＢ１一抗（１∶１０００）２ｈ，然后孵育抗兔二抗（１∶１０００）１ｈ，ＥＣＬ超敏化学发光液检测蛋白的表达，利用ＩｍａｇｅＪ分析图像强度。
１ ３ 统计学分析
用ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ６ ０统计学软件进行数据分析。每组实验重复３次，数据以均数±标
准差（ｘ±ｓ）表示；２组差异采用ｔ检验，多组间比较采用单因素方差分析，Ｐ＜０ ０５表示差异有统计学意义。
２ 结果
２ １ 细胞活力
使用０、５、１０、２０、３０及５０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理ＤＵ１４５Ｒ４８和７２ｈ后，ＣＣＫ８试剂盒检测ＢＢＲ对细胞活力的影响。结果表明，与０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组相比，各浓度组中ＤＵ１４５Ｒ细胞的抑制率降低（Ｐ＜０ ０５或Ｐ＜０ ０１）。见图１。
２ ２ 细胞增殖
克隆形成实验结果表明，与ＤＭＳＯ组相比，５与１０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组ＤＵ１４５Ｒ细胞的克隆形成数量减少（Ｐ＜０ ０５或Ｐ＜０ ０１）。见图２。
２ ３ ＨＭＧＢ１在耐药细胞高表达和与前列腺癌的临床相关性
采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测了ＨＭＧＢ１在ＤＵ１４５Ｒ中的表达，结果显示ＨＭＧＢ１在ＤＵ１４５Ｒ中的表达明显高于ＤＵ１４５细胞（Ｐ＜０ ００１）；使用Ｏｎｃｏｍｉｎｅ数据库及
ＨＰＡ分别分析ＨＭＧＢ１在前列腺正常组织与前列腺癌中的ｍＲＮＡ及蛋白表达水平，结果显示，前列腺癌中的ＨＭＧＢ１ｍＲＮＡ及蛋白表达水平均高于前列腺正常组织；利用ＴＩＭ ＥＲ２ ０数据库获取前列腺癌患者生存数据，生存分析结果表明，ＨＭＧＢ１高表达与前列腺癌患者不良预后相关（Ｐ＝０ ０１９３）。见图３。
贵州医科大学学报 ４６卷
注：０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组比较，（１）Ｐ＜０ ０５，（２）
Ｐ＜０ ０１。
图１ 不同浓度ＢＢＲ处理ＤＵ１４５Ｒ
形容女孩漂亮的词语细胞４８和７２ｈ对细胞活力的影响
Ｆｉｇ．１ ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＢＢＲｏｎｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＤＵ１４５Ｒ
ｃｅｌｌｓｆｏｒ４８ａｎｄ７
２ｈ
注：与ＤＭＳＯ组比较，（１）Ｐ＜０ ０５，（２）
Ｐ＜０ ０１。
图２ ＢＢＲ对ＤＵ１４５Ｒ
细胞的克隆形成的影响（结晶紫染色）
Ｆｉｇ．２ ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＢＢＲｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＤＵ１４５Ｒ
ｃｅｌｌｓ（ｃｒｙｓｔａｌｖｉｏｌｅｔｓｔａｉｎ）
２ ４ ＨＭＧＢ１的表达
为了检测在Ｄ
Ｕ１４５Ｒ
细胞中ＢＢＲ是否影响了ＨＭＧＢ１的表达，利用１０和２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ处理细胞１２ｈ后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＨＭＧＢ１表达水平，
结果显示，
１０和２０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组ＤＵ１４５Ｒ
细胞中ＨＭＧＢ１的表达水平分别低于０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组，差异均有统计学意义（
Ｐ＜０ ０５），提示ＢＢＲ能抑制ＤＵ１４５Ｒ
细胞中ＨＭＧＢ１的表达。见图４。
３ 讨论
克服ＣＲＰＣ耐药性是临床治疗ＣＲＰＣ的一大
如何点评作文难题［１６］。本课题组前期结果表明ＰＴＸ诱导的ＨＭＧＢ１的表达促进ＣＲＰＣ细胞的ＰＴＸ耐药［１５］。
吃了精子会怀孕吗本研究结果显示，与对照组相比，ＢＢＲ处理
ＤＵ１４５Ｒ烧鱼头
细胞后，细胞活力及增殖能力分别随着浓
度的增加而降低（Ｐ＜０ ０５），说明ＢＢＲ能够抑制
ＤＵ１４５Ｒ
细胞活力及细胞增殖；在前列腺癌组织中浙江特产
ＨＭＧＢ１ｍＲＮＡ水平和蛋白水平明显高于正常组织（Ｐ＜０ ００１），ＨＭＧＢ１高表达与前列腺癌患者不良预后相关（Ｐ＝０ ０１９３），这说明ＨＭＧＢ１与前列腺癌具有临床相关性；在蛋白水平上，ＢＢＲ处理下调了ＨＭＧＢ１的表达，进一步揭示了ＢＢＲ抑制
ＤＵ１４５Ｒ细胞活力和增殖的机制。
肿瘤细胞以多种方式对化疗作出反应，包括诱导和释放损伤相关分子模式（
ｄａｍａｇｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｎｓ，ＤＡＭＰ）［１７］
。ＤＡＭＰ可诱导免疫原性细胞死亡，从而促进宿主抗癌免疫力［１２］。
６期张健等 黄连素对人耐紫杉醇去势性前列腺癌细胞活力、增殖及ＨＭＧＢ１表达的影响
梅花的作文
注：Ａ、Ｂ分别为ＨＭＧＢ１在ＤＵ１４５Ｒ
中的表达和定量结果，Ｃ为ＨＭＧＢ１ｍＲＮＡ的表达，Ｄ、Ｅ分别为正常组织和前列腺癌组织中ＨＭＧＢ１蛋白表达（２００×），Ｆ为ＨＭＧＢ１表达与患者生存时间分析；（１）与ＤＵ１４５细胞或正常组比较，Ｐ＜０ ００１。
图３ ＨＭＧＢ１的表达与预后Ｆｉｇ．３ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆＨＭＧＢ
１
注：（１）
与０μｍｏｌ／ＬＢＢＲ组比较，Ｐ＜０ ０５。
图４ ＢＢＲ对ＤＵ１４５Ｒ
细胞中ＨＭＧＢ１表达的影响
Ｆｉｇ．４ ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＢＲｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｉｎＤＵ１４５Ｒ
ｃｅｌｌｓ
ＨＭＧＢ１是ＤＡＭＰ家族成员之一［１８］
。最近研究报道，由于前列腺素Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，ＰＧＥ２）的作用，致使Ｈ
ＭＧＢ１并没有激活免疫活力的能力［１７，１９］
。研究报道，ＨＭＧＢ１的敲低会增加细胞死
亡，并在体内和体外恢复癌细胞的化学敏感性［２０］
，
这表明此敲低可能导致诱导癌症进展和耐药性。释放到细胞外ＨＭＧＢ１可增强化疗后幸存的残余癌细胞的再生、转移和化学耐药性，例如释放的
贵州医科大学学报 ４６卷
