泽桂癃爽对实验性自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺IFN-γ和IL-4的影响
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
义胆忠肝作者：木海琦，杨森，张磊，陈映鹤
【摘要】目的：探讨泽桂癃爽(Zegui Longshuang)对实验性自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织IFN-γ和IL-4表达的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为EAP模型阳性对照组、泽桂癃爽干预组(0.9 g·kg-1)和阴性对照组。以Wistar大鼠前列腺蛋白提纯液辅以完全弗氏佐剂和百白破疫苗制作EAP模型。通过HE染色观察各组前列腺组织炎性细胞浸润情况，通过电镜观察前列腺细胞及细胞周围超微结构的变化，应用半定量RT-PCR法检测前列腺组织IFN-γ和IL-4的含量。结果：与EAP阳性对照组比，泽桂癃爽干预组大鼠的前列腺炎性细胞浸润减轻，前列腺组织的IFN-γ降低(P0.01)，IL-4升高(P0.05)，差异均有显著性。结论：泽桂癃爽可降低前列腺组织IFN-γ含量，提高IL-4的含量，减轻EAP的前列腺组织炎症浸润。
【关键词】泽桂癃爽；实验性自身免疫性前列腺炎;IFN-γ;IL-4 Abstract: Objective: To explore the effects of Zegui
Longshuang on IFN-γand IL- 4 in prostate of rats with experimental autoimmune prostatitis. Methods: Wistar rats were randomly divided into three groups: EAP model positive control group (Group 1)，Zeg
ui Longshuang treatment group (0.9 g·kg-1) (Group 2)，and negative control group (Group 3). Male rats were intradermally immunized with a saline extract of male rat prostate glands (RPG) in Freund’s complete adjuvant (FCA) and Pertussis-Diphtheria-Tetanus vaccine into EAP model; To obrve the infiltrate of inflammatory cell of each group by HE staining，the ultrastructure of the prostate cells and cells’surrounding was obrved under electron microscopy，and the expression of IFN-γand IL-4 in prostate were detected with mi-quantitative RT-PCR. Results: Inflammatory cell in prostate of Zegui Longshuang treatment group showed lower infiltration than EAP model positive control group ; Compared with EAP model positive control group，expression of IFN-γin prostate of Zegui Longshuang treatment group was lower (P0.01)，and expression of IL-4 in prostate was higher(P0.05). Conclusion: Zegui Longshuang can decrea IFN-γin prostate，elevate IL-4 and relieve inflammatory infiltration of EAP prostate.
Key words: Zegui Longshuang;experimental autoimmune prostatitis;IFN-γ;IL-4
慢性前列腺炎一直是男科和泌尿外科的常见疾病和要解决的重要问题之一，发病率较高，其中又以慢性非细菌性前列腺炎的发病率最高[1]。对发病机制的研究上，多位学者[2-3]通过基础实验发现，自身免疫在慢性非细菌性前列腺炎的整个发病机制中起着重要的作用。目前对该病的治疗非常困难且疗效不尽如人意，症状迁延不愈，反复发作，严重地影响患者的全面生活质量[4]。抗生素作为经验用药，
仍然被较多临床医师采用。在此基础上，抗生素加用α-受体阻滞剂、免疫调节剂等的应用，在临床治疗上获得了满意的疗效[5]。但长期运用抗生素的缺陷是显而易见的。有关中医药治疗前列腺炎的报道越来越多，且其在临床症状的改善、前列腺局部炎症消退等方面均取得了较好的疗效。因此，本研究选用临床上主要治疗膀胱瘀阻型良性前列腺增生及慢性前列腺炎的常用中药胶囊——泽桂癃爽胶囊，来治疗实验性自身免疫性前列腺炎(experimental autoimmune prostatitis，EAP)大鼠模型，观察模型动物前列腺的组织学变化，测定IFN-γ和IL-4含量，了解泽桂癃爽对前列腺炎局部免疫的影响，进一步阐明其对自身免疫性前列腺炎的作用机制。
1 材料和方法
如何取消打印机的打印任务1.1 动物、药品与试剂
上巽下乾1.1.1 动物：用于制模的大鼠：Wistar大鼠29只，雄性，180～220 g，清洁级；用于提取前列腺蛋白的大鼠：Wistar大鼠15只，雄性，240～300 g，清洁级。均由上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2007-0005。
1.1.2 主要药品、试剂：泽桂癃爽胶囊，购自江苏正大天晴药业股份有限公司，批号080606(灌胃时以无菌蒸馏水配制)，福氏完全佐剂(FCA)购自Sigma公司，百白破疫苗由温州市卫生防疫站提供，0.5% TritonX-100的生理盐水(自配)，0.1 mol/L pH 7.2的PBS 缓冲液(自配)，Trizol(Invitrogen公司)，氯仿
和异丙醇(BBI公司)，DEPC水和5×TBE缓冲液(上海生工生物工程技术服务有限公司)，琼脂糖Agaro(Biowest公司)，RT-PCR试剂盒(Fermentas公司)。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组：29只Wistar大鼠随机分成3组：①阳性对照组(n=10);②泽桂癃爽干预组(n=9);③阴性对照组(n=10)。
民族传统节日1.2.2 大鼠前列腺蛋白提纯液的制作：取240～300 g雄性Wistar种大鼠15只，脱颈椎处死，在无菌条件下剥取前列腺组织，用冷生理盐水洗净，加入含0.5% TritonX-100的生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器制成匀浆，10 000 r/min离心30 min，取上清液，采用比浊法进行蛋白含量测定，最后用0.1 mol/L pH 7.2的PBS 缓冲液稀释浓度至15 mg/mL。
香猪1.2.3 EAP动物模型制作：参照文献[6-7]的方法。大鼠以5%水合氯醛0.5 mL/100 g腹腔注射麻醉，腹腔注射百白破疫苗0.5 mL，多点皮下注射15 mg/mL大鼠前列腺蛋白提纯液和FCA乳剂(比例为1:1的混悬液)1.0 mL。阳性对照组制作模型后正常喂养；阴性对照组分别行腹腔及皮内多点注射0.9%生理盐水注射液1.0 mL，制作完成后正常喂养；泽桂癃爽干预组是在制作EAP模型第8周，开始予泽桂
癃爽粉末水溶液按0.9 g·kg-1连续灌胃1周[13]。所有大鼠于第9周脱颈椎处死，取前列腺进行病理学检查、透视电镜观察和IFN-γ、IL-4含量测定。
1.2.4 组织病理学检查：取部分前列腺组织经福尔马林固定，石蜡包埋切片，常规HE染色，光镜下观察大鼠前列腺腺腔及间质的炎性细胞浸润情况。创新的事例
1.2.5 透视电镜观察：将大鼠前列腺组织切成1 mm×1 mm×1 mm的组织块，投入2.5%戊二醛及1%锇酸中双重固定，用递增浓度的丙酮梯度脱水，用Epon812环氧树脂包埋，经超薄切片机切片后，用醋酸铀、柠檬酸铝双重染色，透射电镜观察。
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1.2.6 半定量RT-PCR：采用Trizol一步抽提法提取总RNA。将提取的RNA根据半定量RT-PCR试剂盒(TaKaRa)说明合成cDNA。PCR引物采用Pubmed上相应基因的参考序列，通过primer 5.0自行设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；根据说明完成PCR后，取PCR产物5μL，用1.5%的琼脂糖凝胶(EB，0.5μg·mL-1)电泳，用Gel Documentaion System (Bions SC6200)凝胶成像系统和Gel-Pro 3.1分析结果，以目的基因与β-actin的灰度Volume之比作为反映目的基因mRNA水平的相对指标。
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1.3 统计学处理方法组间差异采用q检验。
2 结果
2.1 病理学检查结果阴性对照组前列腺组织结构完整，无明显炎性细胞浸润或水肿;EAP阳性对照组大鼠的前列腺腺体局部组织结
