A disrtation submitted to Huazhong University of
Science and Technology for the Degree of
Doctor of Medicine
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Inhibitory effect of Calcium/calmodulin-dependent protein kina Ⅱinhibitor 1 (CAMK2N1) on prostate cancer cell growth
Candidate: Liu Zhuo
Major: Urology
Supervisor: Prof. Liu Jihong
Huazhong University of Science & Technology
Wuhan 430030, P. R. China
May, 2012
独创性声明
本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。
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日期： 年 月 日
学位论文版权使用授权书马的生活习性
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本论文属于
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学位论文作者签名： 指导教师签名：
日期：年月日日期：年月日
目录
中文摘要 (1)
Abstract (5)
前言 (10)
四年级下册英语单词
第一部分 CAMK2N1真核表达载体的扩增、测序鉴定及体外表达验证
材料与方法 (14)
结果 (26)寝室文化建设
讨论 (30)
第二部分过表达CAMK2N1对前列腺癌细胞生长抑制作用的体外研究
前言 (31)
材料与方法 (32)
吉林省概况结果 (40)
讨论 (45)
数据库建设参考文献 (49)
第三部分 CAMK2N1在前列腺癌组织中的表达以及与临床病理特征相关性的研究
前言 (53)
材料与方法 (54)
结果 (59)
讨论 (64)
参考文献 (66)
全文结论 (71)
综述前列腺癌间歇内分泌治疗与持续内分泌治疗效果比较的Meta分析 (72)
参考文献 (83)
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附录一（英文缩略词表） (88)
附录二（博士研究生期间发表的论文） (89)
致谢 (90)
华中科技大学博士学位论文
钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制物1（CAMK2N1）对前列腺癌抑
制作用的实验研究
博士研究生：刘卓
导师：刘继红教授
华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科
中文摘要
第一部分
CAMK2N1真核表达载体的扩增、测序鉴定及体外表达验证
目的
扩增CAMK2N1真核表达载体（pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒）并进行测序鉴定。将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染前列腺癌细胞系PC3细胞后验证过表达CAMK2N1的效果，为后续实验在PC3细胞中过表达CAMK2N1蛋白提供保证。方法
（1） 将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转化大肠杆菌感受态细胞，扩增后提取质粒，进行DNA测序，与基因库序列进行比对；
（2） 体外培养前列腺癌细胞系PC3细胞，用脂质体转染法将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染至
PC3细胞，24h后采用聚合酶链式反应（PCR）法以及免疫印迹法（Western blotting）检测CAMK2N1的表达变化。结果
（1） 成功扩增pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒，经测序鉴定载体所携带的
华中科技大学博士学位论文
CAMK2N1 ORF序列准确无误；
（2） pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染PC3细胞后，能在mRNA水平以及蛋白水平上调CAMK2N1的表达。
结论
pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒能在真核细胞内成功表达CAMK2N1-GFP融合蛋白，为下一步使用该载体在前列腺癌细胞内过表达CAMK2N1蛋白奠定了基础。
关键词
钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制物；表达质粒；基因转移；基因表达
第二部分
过表达CAMK2N1对前列腺癌细胞生长抑制作用的体外研究
目的
将pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒转染体外培养的前列腺癌细胞系PC3细胞，上调CAMK2N1蛋白的表达后，检测对PC3细胞生长曲线、增殖率、细胞周期、凋亡率、细胞侵袭性的影响。
方法
前列腺癌PC3细胞培养于含10%（体积分数）胎牛血清的RPMI1640培养基中，置于含5% C02的37°C培养箱中。将细胞分为三组：空白组、对照组、实验组，处理方式分别为不加干预、转染pCMV6-AC-GFP空载体、转染pCMV6-AC-GFP-CAMK2N1质粒，转染采取脂质体法（Lipofectamine 2000）。转染24h后，采用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）检测各组细胞的生长情况，绘制生长曲线；EdU（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）核素掺入法检测细胞增殖率；
