[错过会后悔系列六]细胞迁移与侵袭实验常见问题
细胞迁移与侵袭实验FAQ
⚑ 细胞迁移与侵袭实验有什么区别？
细胞迁移是细胞在化学信号（如：趋化因子）的驱使下沿着浓度梯度从一个区域转移到另一区域的运动。损伤修复、细胞分化、胚胎发育以及恶性肿瘤转移等诸多生理/病理过程都需要通过细胞迁移来完成。
细胞侵袭与细胞迁移比较类似，但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层（ECM）或基底膜基质层（BME），在这个过程中细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍，从而在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。细胞侵袭可以发生在正常细胞的炎症反应过程中，也常发生在恶性肿瘤细胞的转移过程中。因此，研究其中的机制对多种生理/病理过程都有着重要的意义。
⚑ 迁移、侵袭实验的大致步骤是怎样的？
邻里互助Corning的Transwell小室产品（以及我司旗下Falcon品牌的Inrt小室产品）可为迁移、侵袭实验构建绝佳的研究模型。您可将待研究的细胞接种在Transwell/Inrt小室的微孔膜上，在上下室分别加入含有不同浓度的趋化因子的培养基；细胞在迁移、侵袭实验时，受到趋化因子的吸引，会挤压自身以穿过膜上的小孔，并在膜的背侧贴附下来。实验结束后，您可统计穿过膜的细胞的情况来评价迁移/侵袭实验。
与迁移实验不同的是，侵袭实验中需要在微孔膜上额外包被一些基质蛋白（ECM/BME），如胶原、纤粘蛋白、层粘连蛋白等，CorningMatrigel产品也被非常广泛地应用在侵袭实验中。
花简笔
⚑ 如何选择用于迁移/侵袭实验的产品？
Corning品牌Transwell小室主要的两种膜材质聚碳酸酯（Polycarbonate, PC）和聚酯（Polyesteror Polyethylene Terephthalate，PET）均可用于迁移、侵袭实验。
Falcon品牌的Inrt产品膜材质均为聚酯（PET）。
两种材质的主要区别在光透性方面，即PC膜半透明，不太方便在培养的过程中观察上室细胞的形态；PET膜透明，方便在相差显微镜下观察细胞的状态。您可根据是否有需要观察细胞状态来挑选膜材质。请注意Falcon品牌的Inrt产品膜材质虽然均为聚酯（PET），但是针对孔密度的不同而分为透明膜及半透明膜两种。
在膜孔径的选择方面，需要根据您所研究的细胞种类来决定，下表为一些常见细胞种类进行迁移、侵袭实验的孔径推荐，供您参考，同时也可以参考已发表的相关文献来辅助您的判断。目前我司提供的小室产品最大孔径为8um，能够满足大多数较大细胞（如多数肿瘤细胞）迁移、侵袭实验的需求。（对于一些要求严格的实验，我们建议在正式实验前选取一系列孔径进行预实验来确定最适合于您的细胞培养和特殊应用的尺寸。）
在进行侵袭实验时，如选用Matrigel来进行小室的包被，在没有特殊要求的情况下（如：酚红不会影响您的实验和后续检测），标准浓度的Matrigel产品便可满足您的需要。（如Corning货号356234—5ml规格/354234—10ml规格。如您的研究涉及生长因子及其相关信号通路，您可选择生长因子减量型GFRMatrigel。）由于侵袭实验中需要用到的Matrigel终浓度并不高（一般为200-300ug/ml），高浓度的Matrigel产品非常粘稠，在稀释时容易造成浓度不准确，可能会影响您的实验结果，因此不推荐使用高浓度Matrigel产品进行侵袭实验。
我司亦有预包被了Matrigel 的小室产品出售，Corning® BioCoat™ Matrigel® Invasion Chamber 354480/354481/354483。
灵芝孢子粉的用法⚑ 脆皮烤鸭技术在进行细胞侵袭实验时，如何包被小室？
准备包被小室的Matrigel可使用冰上预冷的无血清培养基或phosphate-bufferedsaline (PBS), pH 7.4稀释（关于Matrigel的使用您可参考Matrigel相关技术文档）。大多数情况下，您可使用培养实验细胞的同种培养基（无血清）。
失败与成功我司推荐的Matrigel包被浓度为200～300ug/ml。不同板式的小室包被量可参考下表：
报表格式您可根据您的细胞种类、侵袭能力等优化Matrigel包被浓度，并通过预实验进行验证。在稀释到所需浓度后，您可使用预冷的吸头将Matrigel稀释液加入小室中，再将小室连同接收板一并放入37°C细胞培养箱中1～2小时，包被即完成。由于侵袭实验所需要的Matrigel稀释
前赤壁赋液终浓度不会大于Matrigel的成胶浓度，因此，包被完成后，您并不会观察到小室内有一厚层果冻状的凝胶。您可将小室稍稍倾斜，用吸头小心吸去上室内多余的包被液（请勿触碰小室底部，以免破坏膜上包被好的Matrigel）。包被好的小室即可接种细胞了。推荐您在包被的当天使用包被好的小室。
⚑ 水化（Rehydration）是个什么步骤？我需要对包被好的小室进行“水化”吗？
水化步骤仅适用于预包被Matrigel的侵袭小室产品，Corning® BioCoat™ Matrigel® Invasion Chamber 354480/354481/354483。在将预包被Matrigel的侵袭小室从冰箱中取出，除去包装并平衡到室温后，您需要向小室内和接收板的孔中加入温热的无血清培养基（加液体积请参考下表），在37°C细胞培养箱中水化约2小时。之后，请小心去除多余的培养基（请勿触碰小室底部，以免破坏膜上包被好的Matrigel）。
如果您是自行包被的小室，包被好的小室即可接种细胞，不需要进行额外的“水化”步骤。
⚑ 我需要在小室内接种多少细胞？北京特色菜
这需要根据您使用的细胞种类和状态进行优化，下表为我司的推荐用量，供您参考，您可在推荐量上下设计梯度以选取最适合您实验的细胞接种数量。
⚑ 迁移/侵袭实验需要进行多长时间？
在许多情况下，迁移实验所需的时间相对侵袭实验短，可能数小时便可得到所需结果，而侵袭实验一般需要相对长的时间，如24小时、甚至48小时。但是迁移/侵袭实验所需的时间与多方面因素有关，如诱导因子的种类、浓度，细胞的性质，基质蛋白屏障的包被浓度和“用量“（仅针对侵袭实验）等。因此，进行预实验来优化迁移/侵袭实验时间非常关键。
需要注意的是，迁移实验的孵育时间越长，细胞自发进行转移的情况会相应增多；另外，如果实验进行的时间过长，也需要考虑细胞生长状态以及增殖的因素，这些都会影响实验的结果。
⚑ 在迁移/侵袭实验孵育结束后，应进行哪些操作？
首先弃去小室内的液体，接着，您可使用培养基或PBS湿润过的棉签倾斜着擦拭小室膜的上层，以去除未发生迁移/侵袭的细胞。当棉签头在膜表面移动时，请对膜施加轻柔但持续的压力。请小心操作，勿破坏膜和小室结构，同时，由于小室膜底部与接收板的距离并不大，请您留意勿使膜接触孔底，破坏迁移/侵袭到背侧的细胞。随后，使用第二支棉签重复擦拭并用洗液洗涤上室。
