分类号：R9单位代码：10343
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硕士学位论文论文题目:FGF23C-tail通过抗炎缓解糖尿病肾病的研究
研究生姓名：张晓敏
学科专业：药学
类型：学术型
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论文题目:FGF23C-tail通过抗炎缓解糖尿病肾病的研究
农历新历
答辩委员会主席：朱虹教授
综合干>脚底长痣好不好>cad怎么安装答辩委员会成员：蔡琳教授
刘志国副教授
刘彦隆副研究员
论文答辩日期2018年5月20日
目录
中文摘要 (2)
六级分数分布英文摘要 (4)
英文缩略词表 (6)
皓腾前言 (7)
仪器与材料 (10)
实验方法 (12)
实验结果 (18)
分析与讨论 (30)
附录 (38)
致谢 (39)
综述及参考文献 (40)
学位论文独创性声明 (55)
FGF23C-tail通过抗炎缓解糖尿病肾病的研究
中文摘要
背景：糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）是由糖尿病诱发的以肾功能减退，尿蛋白增多，水肿等为主要特征的代谢性疾病，是糖尿病患者最常见的并发症之一，也是导致终末期肾病的主要因素。糖尿病肾病的发生机制十分复杂，涉及多种信号通路，其中炎症反应是糖尿病肾病重要因素，缓
解体内炎症状态有助于治疗糖尿病肾病。此外，大量研究显示，糖尿病肾病患者血液中成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平显著上升，与糖尿病肾病的发生发展密切相关。而且，有确切研究表明FGF23与炎症反应的发生关系密切，两者相互促进导致疾病发生。因此，我们提出假设，有效抑制糖尿病患者体内FGF23水平上升可以从某种程度上缓解炎症发生，从而产生肾脏保护效果。而借助蛋白质结构生物学研究成果，FGF23的碳末端（FGF23C-tail）可以和全长的FGF23竞争性结合受体FGFR1及共受体βklotho，从而达到拮抗FGF23活性的目的，缓解由FGF23水平升高导致的一系列疾病。
目的：本研究探索FGF23的竞争性拮抗剂FGF23C-tail对糖尿病肾病的保护作用，并进一步证实FGF23C-tial的肾脏保护作用是通过缓解炎症反应实现的。通过此次研究，我们将更进一步了解FGF23在糖尿病肾脏疾病中的作用，同时为临床治疗糖尿病肾病提供新的思路，为开发糖尿病肾病治疗药物提供理论指导。
方法：根据血糖、体重选取20只8周龄雄性db/db(C57BLKS/J-leprdb/leprdb)小鼠及10只同窝野生型db/m鼠用于本次实验研究。db/db小鼠随机分成模型对照组和给药组（10只/组），分别腹腔注射（IP）磷酸盐缓冲液（PBS）和FGF23C-tail 蛋白溶液（0.5mg/kg）。隔天给药，连续注射3个月；处死前一天代谢笼收集24h 尿液。水合氯醛麻醉后眼眶取血，采集小鼠双侧肾脏用于后续实验分析。采用Elisa试剂盒（mou）检测所有小鼠血清中全长的FGF23的含量及相关炎症因子（IL-6、TNFα、MCP-1、IP-10）水平，尿液中微量白蛋白水平；比色法检测小鼠血肌酐、血磷及尿素氮含量。通过W
estern Blot方法检测肾脏组织匀浆液中纤维化（Fibronectin、collagenⅣ、αSMA）及炎症因子（CD68、IL-6、TNFα、MCP-1）的表达水平，同时通过qRT-PCR技术在基因水平检测了小鼠肾脏内纤维化及炎症相关基因的表达；此外，我们对小鼠肾脏组织进行病理切片分析，采用苏木素-伊红（HE），PAS染色，Masson染色及免疫组化/荧光方法在组织原位对纤维化及炎症因子进行半定量，检测其表达量。通过透射电子显微镜技术观
察了小鼠肾小球滤过屏障的损伤情况，用以评估试验药肾脏保护作用。
结果：与模型对照组相比，注射了FGF23C-tail的db/db小鼠血清中FGF23及磷含量均有轻微下降，但无统计学差异，说明FGF23C-tail并不是通过降低全长FGF23含量或者血磷水平来发挥作用的。尿生化及血生化分析结果显示糖尿病小鼠肾功能指标血清肌酐、尿素氮及尿蛋白含量上升，而给予FGF23C-tail治疗后，各项指标均会下降；同时，给药组db/db小鼠肾脏指数[肾重(mg)/体重(g)]比模型组也明显降低，这些结果有力说明了FGF23C-tail具有肾脏保护作用。此外，HE、PAS以及Masson染色显示模型组小鼠出现严重肾小球肥大，肾小球系膜扩张以及肾脏纤维化，而经药物治疗后，这些症状均有显著改善；Western印迹、肾组织免疫组化/荧光以及实时荧光定量PCR结果分析发现，FGF23C-tai明显缓解了肾脏纤维化，减轻了肾脏炎症。
结论：长期腹腔注射FGF23C-tai可以显著改善Ⅱ型糖尿病模型（db/db）小鼠肾脏纤维化和炎症、肾功
能障碍，而给予药物治疗的小鼠在肾脏功能改善的同时，体内全长的FGF23和血磷水平并无明显变化，这说明FGF23C-tail改善肾脏纤维化及炎症是通过拮抗FGF23部分活性而并不影响机体本身FGF23的表达来实现的，而且也并不通过降低肾病后期血磷水平升高而改善肾功能。然而FGF23C-tail肾脏保护作用的内在机制并不清楚，有待后期进一步研究探索。
关键词：FGF23；糖尿病肾病；抗炎；纤维化；
咔嚓咔嚓
