Fluo-4,AM 操作说明
货号：F8500
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。大团队
产品说明：
脑筋急转弯儿童CAS：273221-67-3
中文名：钙荧光探针Fluo-4,AM
英文名：
填写的英文甲醛有味道>梦见掉牙怎么回事1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-me thylphenoxy
)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid,pentaacetoxymethyl ester
结构式：
分子式：C 51H 50F 2N 2O 23
分子量：1096.94
性质：
1.外观：橙红色粉末
2.纯度：≥90%（HPLC）
3.产品描述：
Fluo-4是一种将Fluo-3结构中的Cl 替换成F 的钙荧光探针。由于将Cl 替换成了电子吸引力更强的F，它的最大激发波长会向短波长处偏离10nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4的荧光强度比Fluo-3强一倍。
Fluo-4,AM 穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为494nm，最大发射波长为516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
操作说明：（for Human T cells）老岳母
1，试剂
2mM 的Fluo-4,AM/DMSO （将1mg Fluo-3,AM 溶于442µL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na 2HPO 4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl 2，0.5mM MgCl 2，5mM Gluco，0.1%BSA，pH 7.4）钾是什么东西
2，操作
（1）向Fluo-4,AM/DMSO 溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Fluo-4,AM 在HBSS 中聚合并能帮助其进入细胞。
言什么什么据
（2）用HBSS 稀释Fluo-4,AM 溶液，制备4µM 的Fluo-4,AM 工作液。
（3）将Fluo-4,AM 工作液加入细胞，在37℃培养20分钟。
（4）加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
（5）用HEPES buffer saline 洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline 使细胞重悬浮，制成1×105
cells/mL 的溶液。
（6）37℃下培养10分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长494nm，发射波长516nm 。
注意：标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
