慢性束缚应激抑郁症大鼠模型的复制及逍遥散对海马色氨酸代谢途径的调节作用
焦海燕;严志祎;姜幼明;刘玥芸;陈家旭
【摘 要】Objective To establish the depression rat model by chronic immobilization stress method,and obrve the change of tryptophan metabolism pathway in hippocampus and the regulation of Xiaoyaosan.Methods 24 SD rats were randomly divided into normal group,model group,Xiaoyaosan group and fluoxetine group,the 21 days depression rat model was made by chronic immobilization stress method,and the model was evaluated by bodyweight change,sucro preference test,novelty suppresd feeding test and open field test.ELISA method was ud to determine the contents of tryptophan and 5-HT in hippocampus.Results The results of sucro preference test and novelty suppresd feeding test showed that there was a significant difference between model group and normal group (P＜0.01),the central enterance,central residence and total cross number of rats in model group were significantly different compared with that of normal group (P＜0.01,P＜0.05).The ELISA results showed that the content of 5-HT in hippocampus of rats in
model group was significantly lower than that of normal group (P＜0.01),the contents of 5-HT of rats in Xiaoyaosan group and fluoxetine group were significantly higher than that of model group (P＜0.05,P＜0.01);the content of tryptophan in model group was significantly higher than normal group (P＜0.01).Conclusion There existed abnormity in the tryptophan metabolic pathway of depression model rat by chronic immobilization stress,which was cloly related to the incidence of depression,and Xiaoyaosan could posss antidepressant effect by regulating the tryptophan metabolism in hippocampus.%目的 通过慢性束缚应激方法复制大鼠抑郁症模型,并观察海马色氨酸代谢途径的变化与逍遥散的调节作用.方法 将24只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、逍遥散组与氟西汀组.采用21天慢性束缚应激的方法复制大鼠抑郁症模型,通过大鼠体重变化、糖水偏好实验、新环境抑制进食实验、旷场试验对模型进行评价.采用ELISA法测定各组大鼠海马色氨酸(tryptophan,Trp)与5-羟色胺(5-HT)的含量.结果 模型组大鼠糖水偏好量和新环境进食时间与正常组大鼠相比有显著差异(P＜0.01);旷场试验的中央区进入次数、中央区停留时间以及总穿格次数与正常组相比均有统计学差异(P＜0.01,P＜0.05).ELISA结果显示,模型组大鼠海马5-HT含量显著低于正常组(P＜0.01),而逍遥散组和氟西汀组海马5-HT含量明
显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01);模型组大鼠海马中色氨酸的含量较正常组明显增加(P＜0.01).结论 在慢性束缚应激抑郁症大鼠海马中存在色氨酸代谢途径的异常,这与抑郁症的发病密切相关,且逍遥散能够通过对海马色氨酸代谢的调节起到一定的抗抑郁作用.
【期刊名称】《环球中医药》
【年(卷),期】2017(010)011
【总页数】5页(P1198-1202)
辣的菜【关键词】抑郁症;色氨酸代谢途径;5-羟色胺;逍遥散安全教育新闻稿
【作 者】焦海燕;严志祎;姜幼明;刘玥芸;陈家旭
护士ppt模板【作者单位】100029 北京中医药大学中医学院;100029 北京中医药大学中医学院;100029 北京中医药大学中医学院;100029 北京中医药大学中医学院;100029 北京中医药大学中医学院
【正文语种】中 文
奸臣迅雷【中图分类】R285.5
抑郁症是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的情感障碍类精神疾病，其典型表现有情绪低落、思维迟钝、对工作失去兴趣、语言动作减少、不思饮食、负罪感以及自觉无用、有自杀倾向等。抑郁症的发病机制尚不明确，目前临床上运用的抗抑郁药主要是基于“单胺类神经递质假说”研发，虽具有一定治疗效应，但存在效率低、起效慢等缺点。中医学对抑郁症的认识较早，但并没有抑郁症之病名，古代文献多把它归在郁证中，属中医学情志病范畴。抑郁症中医证候要素研究表明抑郁症的病位在肝和脾，主要病性为气郁、气虚[1]，肝失疏泄，脾失健运，脏腑气机紊乱，阴阳失调等是郁证的主要病机[2]。肝郁脾虚证为抑郁症的常见证型，而逍遥散作为疏肝健脾的名方，在对抑郁症治疗方面有较好的理论及临床基础。本实验通过慢性束缚应激的方法复制大鼠抑郁症模型，通过糖水偏好实验、新环境抑制进食实验及旷场实验对模型进行评价。采用ELISA法检测大鼠海马色氨酸与5-HT的含量，并观察逍遥散对中枢色氨酸代谢的影响，探索抑郁症的中枢机制，以期进一步为逍遥散抗抑郁作用提供科学依据。
龙应台的目送人文内涵1.1 实验动物
SPF级健康雄性SD大鼠，体重(200±20)g，共24只。所有大鼠在开始进行实验前于北京中医药大学动物三级实验室适应性饲养7天，室温为(22±2)℃，相对湿度60%±5%，环境保持安静，正常光照、昼夜节律。动物许可证号：SCXK(Beijing)2012-0001。
1.2 药物
逍遥散出自《太平惠民和剂局方》(北柴胡30 g、茯苓15 g、当归30 g、白芍30 g、白术30 g、生姜10 g、炙甘草15 g、薄荷10 g)，购自北京同仁堂饮片有限责任公司，由中日友好医院中药制剂室按照原方配伍比例煎煮、浓缩成药粉，1 g药粉含生药量3.18 g，使用时需用去离子水配制成混悬液。盐酸氟西汀胶囊(Patheon France)规格为20 mg/粒，购自礼来苏州制药有限公司。中国古代十大名曲
1.3 主要试剂和仪器
大鼠束缚架(自制)，旷场箱(自制)，WV-CP470摄像头(Panasonic，Japan)，ACS-2EAS型电子秤(北京市菲姆斯科技开发公司)，Etho Vision3.0分析软件(Noldus)，Serotonin ELISA kit(Enzo)，Tryptophan ELISA kit(Abnova)，低温高速离心机(Eppendorf)，37℃恒温箱(BINDER)，全波长扫描酶标仪(Thermo Scientific)。
1.4 模型制备
采用体重随机数分组法对24只SD大鼠进行随机分组，分为正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组，共4组，每组6只。采用21天慢性束缚应激的方法复制大鼠抑郁症模型，大鼠束缚架底座为长20 cm、宽10 cm、厚1 cm木质结构，上方束缚台长22 cm，宽6.6 cm，束缚台的两侧各有两条可以调节的粘贴带，用来束缚实验大鼠的胸腹部。
正常组大鼠采用常规方法饲养，不对其进行造模，其余3组大鼠每天束缚3小时。每日于束缚前1小时对模型组大鼠灌服去离子水，逍遥散组大鼠灌服逍遥散混悬液，氟西汀组灌服氟西汀溶液，并按人体有效用药剂量进行换算。逍遥散给药量为每100 g大鼠体重给药0.61 g，氟西汀给药量为每100 g体重0.2 mg，大鼠的灌胃容积为每100 g体重1 mL。造模持续21天。通过观察大鼠体重变化，并采用糖水偏好实验、旷场实验、新环境抑制进食实验对大鼠抑郁症模型进行评价。
1.5 取材
造模结束后进行取材：首先用10%水合氯醛注射大鼠腹腔，使其处于深度麻醉状态，冰上
取脑组织并分离海马，每只大鼠称取100 mg海马组织放置在1.5 mL EP管中，然后加入1000 μL已经预冷的1×PBS溶液，匀浆后存放于-20℃冰箱，反复冻融2次后，于4℃，5000 r/min条件下离心5分钟，分装所得蛋白上清液存放在-80℃冰箱备用。
1.6 ELISA实验
工地安全管理
1.6.1 5-HT含量测定 实验前将Serotonin ELISA kit试剂盒从4℃冰箱取出，放至室温后把所用试剂离心混匀；将500 μL浓度为500 ng/mL的蛋白标准品原液分别稀释为125、31.25、1.95、0.49 ng/mL 4个浓度；打开96孔板，根据加样顺序分别加入缓冲液和标准品溶液，每个待测样品三个复孔，每孔100 μL；加入5-HT抗体，用封板膜将96孔板密封，室温下摇床孵育2小时，清洗3次后通过拍打除去96孔板中残留液体；加入显影液和终止液后立刻在酶标仪下进行读数，得到各孔的OD值，然后通过标准品的OD值绘制出5-HT蛋白浓度的标准曲线，计算出各个样品蛋白含量，结果和海马重量进行换算，得到5-HT的含量和海马组织的质量比，以“ng/mg”表示。
1.6.2 色氨酸含量测定 提前将Tryptophan ELISA kit试剂盒从冰箱拿出，放至室温，并把所用试剂离心、混匀；然后将25 μL蛋白标准品Standard A-F(浓度依次为0、2.5、7.5、25、
75、250 μg/mL)、待测样品和对照蛋白品分别加入96孔板的相应孔，每个样品3个复孔；加入50 μL色氨酸抗体，4℃孵育过夜；结束后倒掉板中液体，加入清洗液清洗3次，通过拍打除去残留液体；加入酶标抗体工作液，孵育30分钟后倒掉板中液体，加入清洗液清洗；加入显影液，室温避光孵育30分钟后加入终止液，混匀后立即在酶标仪下读数，得到各孔的OD值，然后通过标准品的OD值绘制色氨酸蛋白浓度的标准曲线，计算样品蛋白含量，再与海马组织重量进行换算，得到色氨酸的含量和海马的质量比，以“ng/mg”表示。
