首发精神分裂症病人血清微小RNA-24-2、微小RNA-30b 的
检测水平及意义
雷雨，刘伟，包黎
作者单位：武汉市精神卫生中心精神科，湖北
武汉430022
摘要：目的
检测首发精神分裂症（FES ）病人血清中微小RNA -24-2（mir -24-2）、微小RNA -30b （mir -30b ）水平，并探讨血清中
mir -24-2、mir -30b 表达水平与FES 发病的关系。方法
前瞻性选取2016年11月至2018年9月于武汉市精神卫生中心就诊的
98例FES 病人为研究对象（FES 组）；同期选取76例健康体检者作为对照（对照组）。分析两组受试者一般资料；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT -PCR ）检测两组受试者血清中mir -24-
2、mir -30b 表达水平，并对FES 病人进行阳性与阴性症状量表（PANSS ）评分；分析FES 病人血清中mir -24-2、mir -30b 水平与PANSS 评分相关性；分析血清中mir -24-2、mir -30b 水平对FES 的诊断价值。结果
FES 组血清mir -24-2（1.81±0.58）、mir -30b 水平（1.46±0.37）、PANSS 总评分（78.64±12.31）分、阳性症状
评分（12.64±3.73）分、阴性症状评分（20.56±4.32）分、认知评分（8.73±1.84）分、兴奋评分（8.96±2.13）分、抑郁情绪评分（6.75±2.06）分显著高于对照组［（1.00±0.31）、（1.00±0.26）、（35.42±5.37）分、（4.51±1.12）分、（6.94±1.21）分、（3.86±0.95）分、（4.19±0.38）分、（4.12±1.08）分］（均P <0.05）；FES 病人血清中mir -24-2、mir -30b 水平与PANSS 总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关（P <0.05）；血清mir -24-2、mir -30b 诊断FES 的曲线下面积（AUC ）分别为0.863（95%CI ：0.808~0.919）、0.856（95%CI ：0.801~0.911），特异度分别为93.4%、84.2%，灵敏度分别为68.4%、76.5%；两者联合诊断FES 的AUC 为0.936（95%CI ：0.899~0.973），特异度为88.2%，灵敏度为89.8%。结论血清mir -24-2、mir -30b 水平在FES 病人
中明显升高，且与PANSS 评分呈正相关。血清mir -24-2、mir -30b 可能有助于疾病诊断，对评价精神分裂症的早期危险性有重
要意义。
关键词：精神分裂症；早期诊断；血清；微小RNA -24-2；微小RNA -30b
Detection levels and significance of rum mir -24-2and mir -30b in patients
with first -episode schizophrenia
LEI Yu,LIU Wei,BAO Li
Author Affiliation:Department of Psychiatry,Wuhan Mental Health Center,Wuhan,Hubei 430022,China
Abstract ：Objective
To detect the levels of microRNA -24-2(mir -24-2)and microRNA -30b (mir -30b)in the rum of patients with
first -episode schizophrenia (FES),and to explore the relationships between the expressions of mir -24-2and mir -30b in the rum and the pathogenesis of FES.Methods
Ninety -eight FES patients,who were treated in Wuhan Mental Health Center from November 2016
to September 2018,were prospectively lected as the study objects (FES group);76healthy people were lected as the control group
at the same time.The general data of the two groups were analyzed.The expression levels of mir -24-2and mir -30b in rum of the two
groups were detected by real -time fluorescent quantitative PCR (qRT -PCR),and the positive and negative symptom scale (PANSS)scores of FES patients were evaluated.The correlations between the levels of rum mir -24-2and mir -30b and PANSS were analyzed;and the diagnostic values of mir -24-2and mir -30b in rum for FES were analyzed.Results
The levels of mir -24-2[(1.81±0.58)],mir -
30b [(1.46±0.37)],PANSS total score [(78.64±12.31)points],positive symptom score [(12.64±3.73)points],negative symptom score
[(20.56±4.32)points],cognitive score [(8.73±1.84)points],excitement score [(8.96±2.13)points]and depression score [(6.75±2.06)points]in FES group were significantly higher than tho in the control
group [(1.00±0.31),(1.00±0.26),(35.42±5.37)points,(4.51±1.12)points,(6.94±1.21)points,(3.86±0.95)points,(4.19±0.38)points,(4.12±1.08)points](all P <0.05).The levels of mir -24-2and
mir -30b in FES patients were positively correlated with PANSS total score,positive symptom score,negative symptom score,cognitive score,excitement score and depression score (P <0.05).The area under curve (AUC)of rum mir -24-2and mir -30b in diagnosing FES were 0.863(95%CI :0.808-0.919)and 0.856(95%CI :0.801-0.911).The specificity were 93.4%and 84.2%,the nsitivity were 68.4%and 76.5%,respectively.The AUC of the combination in diagnosing FES was 0.936(95%CI :0.899-0.973),the specificity was 88.2%,and the nsitivity was 89.8%.Conclusions
The levels of rum mir -24-2and mir -30b are significantly incread in patients
with FES and positively correlated with PANSS score.Serum mir -24-2and mir -30b may be helpful for the diagnosis of the dia and ◇临床医学
◇
引用本文：雷雨，刘伟，包黎.首发精神分裂症病人血清微小RNA -24-2、微小RNA -30b 的检测水平及意义［J ］.安徽医药，2021，25（6）：1204-1207.DOI ：10.3969/j.issn.1009-6469.2021.06.035.
are important to evaluate the early risk of schizophrenia.
Key words：Schizophrenia;Early diagnosis;Serum;MicroRNA-24-2;MicroRNA-30b
精神分裂症（episode schizophrenia，ES）是一种慢性、遗传性精神障碍，病因目前尚未明确，主要有免疫和病毒学假说，ES病人临床症状主要有阳性症状、阴性症状及认知功能障碍、情绪异常等［1-3］。首发的精神分裂症病人一般较为年轻、病程短、社会功能缺损程度较轻，其病人长期服用抗精神药物会引起心血管死亡，对病人病程发展和预后有着深远影响，但目前缺乏ES诊断相关的生物学指标［4-5］。阳性与阴性症状量表（positive negative syndrome
ccale，PANSS）评分是为评定不同类型精神分裂症病人严重程度而设定的标准化量表评分，主要适用于成年人，由经量表使用训练的精神科医师对病人做检查，再综合有关信息进行评定，但一般ES病人临床症状与其它类精神疾病相似，难以正确判断［6-7］。微小RNA（microRNA，miRNA）在中枢神经系统中含量非常丰富，可作为新的调节因子参与神经系统发育的各个阶段，目前许多种miRNA已被证实在ES病人体内异常表达，可能影响ES发病［8］，其中mir-24-2、mir-30b在中枢神经系统疾病、精神类疾病病人中表达异常，进而引发神经系统紊乱，可能影响疾病发生［9-10］。但是目前仍
未有关于ES病人体内血清mir-24-2、mir-30b表达水平的研究。因此，本研究分别通过检测首发ES（first ES，FES）病人血清中mir-24-2、mir-30b表达水平，探讨FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS评分的关系，为血清mir-24-2、mir-30b作为生物学指标评价ES发生的早期危险性提供一定的参考依据。
1资料与方法
1.1一般资料前瞻性选取2016年11月至2018年9月于武汉市精神卫生中心就诊的98例FES病人为研究对象（FES组），病程（16.27±3.31）月；同期选取76例健康体检者作为对照（对照组）。本研究中所有病人均由主治医师明确诊断，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求，所有受试对象近亲属均由专业人员详细告知研究内容并签署知情同意书。
纳入标准：①符合国际疾病分类第十一次修订本（ICD-11）精神与行为障碍（草案）关于精神分裂症和其他原发性精神障碍诊断标准［11］；②智力正常者；③首次发病，入组前未服用过抗精神并药物者；
④无攻击行为和自杀倾向。排除标准：①伴有急慢性感染疾病及各种免疫疾病者；②伴有严重的心、脑、肝、肾等器质性疾病者；③有其它精神障碍性疾
病或脑器质性疾病，如：痴呆、抑郁症、癫痫、精神发育迟缓等；④妊娠期或哺乳期妇女；⑤精神活性药物滥用史。
收集病人入院时一般资料，包括性别、年龄、体质量指数（BMI）、FES病人病程、受教育年限、吸烟史、饮酒史。
1.2主要试剂与仪器RNA提取试剂盒（货号R1200-100），购自北京索莱宝科技有限公司；反转录试剂盒（货号KL266），购自上海康朗生物科技有限公司；SYBR Premix Ex TaqⅡ（货号RR820A），购自北京百奥创新科技有限公司；Rox reference dye （货号XY320），购自上海信裕生物科技有限公司。ABI7700实时荧光定量PCR仪，购自美国Applied Biosystems公司。
1.3研究方法
1.3.1样品采集及保存采集两组受试者清晨空腹静脉血样，3000r/min离心15min后收集血清，置于−80℃保存待测。
1.3.2血清mir-24-2、mir-30b水平测定采用RNA提取试剂盒提取两组受试者血清总RNA，反转录试剂盒将RNA反转录为互补DNA（cDNA）。采用实时荧光定量PCR仪对目的基因mir-24-2、mir-30b 和内参U6进行扩增。反应体系共10μL：cDNA模板（50mg/L）1μL，正反向引物（10μmol/L）各0.4μL，S
YBR Premix Ex TaqⅡ（2×）5μL，Rox reference dye（50×）0.2μL，双蒸水3.0μL，引物由上海生工生物公司设计并合成（引物序列见表1）。反应条件：95℃10min；94℃5s，58℃30s，72℃20s，40个循环。每个样品重复3次。采用2−∆∆CT法对两组受试者血清中mir-24-2、mir-30b表达水平进行定量分析。
1.3.3PANSS评分［12］PANSS由7项阳性症状、7项阴性症状及16项一般精神病理症状组成。本研究采用PANSS中的P1、P3、P5、G9项目评估阳性症状，N1、N2、N3、N4、N6、G7项目评估阴性症状，P2、N5、表1实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）
咸鸭蛋的危害
引物序列
基因
mir-24-2
mir-30b
U6
正向引物5′-3′
CGACTACGACTCGGTG‐
CAGCC
CGGTATCATTTGGCAGT‐
GTCT
GCTTCGGCAGCA‐
CATATACTAAAAT
反向引物5′-3′
CCGAGAAGCCGCTCCA‐
CATAC
GTGCAGGGTCCGAGGT
CGCTTCACGAATTTGC‐
GTGTCAT
G11项目评估认知功能，P4、P7、G8、G14项目评估兴奋状态，G2、G3、G6评估抑郁情绪。每个项目分为7级评分：7分极重度，6分重度，5分偏重，4分中度，3分轻度，2分很轻，1分无症状。
1.4统计学方法利用SPSS23.0对数据进行统计学分析，计量资料均符合正态分布，以xˉ±s表示，两组间比较行t检验；计数资料以例数表示，两组间比
较行χ2检验；采用Pearson法分析FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS评分相关性；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）分析血清中mir-24-2、mir-30b水平对FES的诊断价值。P<0.05代表差异有统计学意义。
2结果
2.1两组一般资料比较两组性别、年龄等一般资料比较，均差异无统计学意义（P>0.05），见表2。
2.2两组PANSS评分比较FES组PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分显著高于对照组（P<0.05），见表3。
2.3两组受试者血清mir-24-2、mir-30b水平比较FES组血清mir-24-2、mir-30b水平显著高于对照组（P<0.05），见表4。
2.4FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS评分相关性FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关（P<0.05），见表5。
2.5血清中mir-24-2、mir-30b水平对FES的诊断价值分别以血清中mir-24-2、mir-30b单个指标及两者联合预测值为检验变量绘制ROC曲线，结果显示，血清mir-24-2诊断FES的曲线下面积（AUC）为
0.863（95%CI：0.808~0.919），截断值为1.407，特异度为93.4%，灵敏度为68.4%；血清mir-30b诊断FES 的AUC为0.856（95%CI：0.801~0.911），截断值为1.913，特异度为84.2%，灵敏度为76.5%；两者联合诊断FES的AUC为0.936（95%CI：0.899~0.973），特异度为88.2%，灵敏度为89.8%。
3讨论
ES是一组症状群组成的临床综合征，通常青壮年时期起病，ES发病率、复发率、致残率均较高且治愈率低，病人需长期服用抗精神药物缓解，但长期服用此类药物易造成心源性猝死、心血管死亡等严重后果［13］。因此寻找特异性较高的生物学指标，快速、客观地实现ES的正确诊断，是精神病学领域的一大难题［14］。
miRNA是一类高度保守的内源性单链非编码RNA，广泛存在于真核细胞内，长约22个核苷酸，可通过调控基因转录后过程调控细胞增殖和凋亡［15］。miRNA可与靶基因mRNA3′端非编码区特异性结合，结合后可影响神经网络模式，使其表达或沉默，进而干扰神经生物［16］。miRNA在神经细胞的增殖发育、分化、凋亡及突触塑形等过程中有着非常重要的作用，且目前有研究表明，许多miRNA在ES病人体内异常表达，可能与ES发病有关［17］。Sun等［18］
表2两组首发精神分裂症（FES）一般资料比较
组别
对照组FES组t（χ2）值P值例
数
76
98
男性/例
人造蓝宝石43
52
（0.214）
0.644
年龄/
（岁，
xˉ±s）
46.32
±8.84
45.48
±7.53
0.676
0.500
体质量
指数/
（kg/m2，
xˉ±s）
22.18±
2.84
22.65±
3.82
0.897
0.371
受教育
年限/
（年，
xˉ±s）
11.32±
2.79
11.46±
3.16
0.305
0.761
有吸烟
史/例
29
38
（0.007）
怎样大脸变小脸0.934
有饮酒
史/例
32
41
（0.001）
0.972
表3两组首发精神分裂症（FES）阳性与阴性症状量表（PANSS）评分比较/（分，xˉ±s）
组别对照组FES组
t值
P值例
数
76
98
PANSS
总评分
35.42±
5.37
78.64±
12.31
28.559
<0.001
阳性症
状评分
4.51±
1.12
12.64±
3.73
18.360
<0.001
阴性症
状评分
6.94±
1.21
20.56±
4.32
26.670
<0.001
认知
评分
3.86±
地震应急包0.95
8.73±
1.84
20.996
<0.001
兴奋
评分
4.19±
0.38
8.96±
2.13
19.275
<0.001
抑郁情
绪评分
4.12±
1.08
6.75±
2.06
10.101
<0.001
购物评价
表4两组首发精神分裂症（FES）受试者血清mir-24-2、
mir-30b水平比较/xˉ±s
组别
对照组
FES组
t值
P值
例数
76
98
mir-24-2
1.00±0.31
1.81±0.58
11.011
<0.001
mir-30b
1.00±0.26
我爱我的国
1.46±0.37
9.214
<0.001
表5首发精神分裂症（FES）病人血清中mir-24-2、mir-30b
水平与阳性与阴性症状量表（PANSS）评分相关性
指标
mir-24-2
mir-30b
统计
值
r值
P值
r值
P值
PANSS
总评分
0.583
0.005
0.568
0.006
阳性症
状评分
0.627
<0.001
0.612
0.002
阴性症
状评分
0.614
<0.001
0.594
0.004
认知
评分
0.545
0.007
0.548
0.006
兴奋
评分乡导
0.576
0.004
0.536
0.008
抑郁
情绪
评分
0.497
0.014
0.521
0.014
研究显示，miR-30可调控大鼠神经生成影响海马区功能。而人类海马区与学习、记忆等高级认知功能密切联系，此外海马区神经功能的异常表达与精神疾病之间存在重要相关性［19］。Sun等［20］研究结果中显示mir-24在脑梗死病人神经元细胞凋亡中发挥重要作用，提示mir-24可能与神经系统疾病关系密切。本研究结果表明，FES组血清mir-24-2、mir-30b水平显著高于对照组。提示血清mir-24-2、mir-30b的高表达可能会影响FES，且可能对FES发病机制和诊断的研究具有重要意义。PANSS是为评价不同类型ES症状严重程度设计的评定量表，本研究结果显示FES组PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分显著高于对照组。FES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平与
PANSS总评分、阳性症状评分、阴性症状评分、认知评分、兴奋评分、抑郁情绪评分均呈正相关。提示血清中mir-24-2、mir-30b水平升高可能加重FES病人临床症状表现，即加重病人疾病程度。血清mir-24-2、mir-30b诊断FES的AUC分别为0.863、0.856，特异度分别为93.4%、84.2%，灵敏度分别为68.4%、76.5%。提示两者对FES的诊断可能均有重要参考价值，且血清mir-24-2的参考价值可能优于mir-30b。两者联合诊断FES的AUC为0.936，特异度为88.2%，灵敏度为89.8%。提示两者联合检测有助于提高FES的诊断价值，临床中可将两者作为参考指标。
综上所述，ES病人血清中mir-24-2、mir-30b水平高于正常人，血清中mir-24-2、mir-30b水平可能与ES疾病的发生、发展密切相关。血清mir-24-2、mir-30b可能对评价ES发生的早期危险性有重要意义，对ES的诊断具有一定的参考价值。但本研究只通过查阅门诊及住院病例来研究，样本资料的质量、数据的准确性和完整性均会对结果造成一定的影响，此研究存在一定不足。且本研究中血清中mir-24-2、mir-30b水平影响ES的具体作用机制及两者之间的互作机制有待深入研究。
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