.10 •中 Pi 与膝床Pharmacy and Clinics o f Chine Materia Medica 2Q2\.，\2(V)
•地制制利•橙皮苷固体分散体的制备及其表征
宋佳文，李小芳' 龙家英，邛茂，陈慧娟
[摘要]目的：制备橙皮苷固体分散体(HD-SD)，改善溶解度。方法：以体外溶出度为指标，通过单因素试验，筛选
最优质的制备工艺；建立体外溶出度测定方法，测定HD-SD的体外溶出度；利用HPLC测定HD-SD中橙皮苷的含量；考
察固体分散体系的制备方法、载体种类、溶剂种类、药物-载体质量比例对HD-SD制备工艺的影响，并进行验证.通过
以上实验考察，可以得到HD-SD的最佳制备工艺。结果：以溶剂-熔融法，采用无水乙醇作为溶剂，羟丙基P环糊精为载 体，药载比为1:3，制备HD-SD。此工艺制备的HD-SD在PH7.4磷酸缓冲液中溶出效果最佳。可以得出以羟丙基p环糊精
为载体材料，橙皮苷与载体质量比为1:3制备成的橙皮苷固体分散体系能够改善其溶解度，提高生物利用率。结论：以
羟丙基P环糊精为载体材料制备成橙皮苷固体分散体可以改善其溶解性能，加快其溶出速率。
[关键词]橙皮苷；固体分散体；溶解度
[中图分类号]R 283.1 [文献标识码] A [文章编号]1674-926X(2021)01-003-05
Study on the preparation and characterization of hesperidin solid dispersion/SOA^G Jia-wen, LI Xiao-fang, LONG Maying, DENG Mao, CHEN Hui-juan// (School o f P harmacy, Chengdu University o f Traditional Chine Medicine; Chengdu 611137, Sichuan)
[Abstract] Objective: To prepare solid dispersions of hesperidin (HD-SD) and improve their solubility. Method: Using in vitro dissolution as index, the single-factor test was ud to screen the optimized quality preparation process. In vitro dissolution determination method was established to determine the in vitro dissolution of HD-SD. HPLC method was ud to determine the content of hesperidin in HD-SD. The effects of the preparation method of dispersion system, carrier type, solvent type and drug- carrier mass ratio on HD-SD preparation process were verified. Through the above experimental investigation, the best preparation process of HD-SD was obtained. Result: HD-SD was prepared by solvent-melting method, using absolute ethanol as solvent, hydroxypropyl-P-cyclodextrin as carrier and drug loading ratio of 1:3. The HD-SD prepared by this process had the be
st dissolution effect in pH7.4 phosphate buffer. It can be concluded that the hesperidin solid dispersion system prepared with hydroxypropyl-P- cyclodextrin as carrier material and mass ratio of 3:1 with hesperidin can improve its solubility and increa the bioavailability. Conclusion: Using hydroxypropyl-(3-cyclodextrin as a carrier material to prepare a solid dispersion of hesperidin can improve its dissolution performance and accelerate its dissolution rate.
|Key words] Hesperidin; solid dispersion system; solubility
橙皮苷(hesperidin,HD)别名陈皮苷、柑果苷、
[基金项目]四川省科技厅：基于“药效组分-粒子复合”模式 纳米复合粒子的制备及其稳态增效机制的研究
(2019Y F S0113)；四川省科技厅：新型稳定
剂一茶皂素：用于橙皮苷纳米晶及其抗炎活性
研究（2020095)
[作者单位]成都中医药大学药学院，四川，成都611137
[作者简介]宋佳文，在读硕士研究生，研究方向为中药新制剂、新剂型、新技术Tel：丨3398144923
Email:*****************
[通讯作者]李小芳，教授，研究方向为中药新制剂、新剂 型、新技术Tel:138****5110
Email:lixiaofang918@ 163 .com
[收稿日期]2020-11-20橘皮苷，为二氢黄酮衍生物，主要存在于柑拮属 CirtusL.植物中，陈皮中最主要的黄酮类化合物之 一[1乂其化学结构（见图1，C28H34015)为具有双 氢黄酮氧苷结构，呈弱酸性，白色针状晶体，略带 苦味，难溶于水，几乎不溶于丙酮、苯、氯仿。药 理学研究表明，HD具有维持渗透压、降血压、增强 毛细血管韧性、降低胆固醇、抗氧化、抑菌、抗病 毒及提高机体免疫力等药理作用，在临床上用于心 血管系统疾病的辅助治疗，可培植多种防止动脉硬 化和心肌梗塞的药物，是成药“脉通”的主要原料之 一，由此可见，HD在功能性食品和医药领域具有 良好的应用前景15_81。但HD溶解性较差，这极大限 制了其临床应用.药物的吸收及利用受制于药物的溶
中药与临床尸/；anwac_y a«t/ C//m_cs q/" CW/je Afo/en'a Med/ca 2021; 12( 1)•11 •
出度，溶出度太低，从而会限制其生物利用度.想要 更好的发展橙皮苷在医药领域的应用，提高其利用 率，增强药物的吸收，就必须研究如何提高HD的溶 解性能，以提高其生物利用度。目前关于HD的
增溶 研究已有包合物191、自微乳|H)1等报道。
固体分散体(SD)是一种以分子、微晶态[111均匀 分散在载体中，以固体形式存在的分散系统112]，可 以增加难溶药物的溶解度，通过合适的载体可以达 到抗缓释药物的溶出效果，是一种中间剂型，实现 增加药物溶出、延缓释放、改善药物稳定性[13]。作 为一种新型制药技术，SD是现代新剂型、新技术研 究的主要方向之一，在改善难溶性药物的溶解性方 面取得了十分显著的成果，可帮助许多药物解决吸 收速率低下的难题。SD的传统制备方法有熔融法、溶剂法、溶剂一熔融法，还可以应用共融原理用研 磨法形成低共熔混合物以及药物溶于有机溶剂分散 吸附于惰性材料（如二氧化硅）形成粉状溶液％151。
1材料和试剂
HD对照品，批号MUST-18032502，质量分数 98.76%，成都曼斯特生物科技有限公司；橙皮苷 (批号XC20180616，质量分数95%)；羟丙基-P-环糊精、胶态二氧化硅（上海风泓药用辅料技术有 限公司，药用级）；泊洛沙姆188 (德国BSAF公 司），聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙二醇4000 (成都市 科龙化工试剂厂）；聚乙二醇6000 (广东汕头市西 陇化工厂）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1橙皮苷固体分散体的制备
2.1.1溶剂法电子分析天平称取HD原料药与载体比1: 3，分别溶解于适量无水乙醇中，将原料药溶液缓慢加入载体溶液，充分搅拌，并超声5 min使混匀。转移至80 X：恒温水浴锅中，继续加热至完全蒸发掉无水乙醇，将所得产物于60 °C干燥12 h后，置于干燥箱中平衡48 h，刮取所得产物，放干燥器备 用。
2.1.2溶剂-熔融法以1: 3比例称取HD原料药和载 体，将HD溶解于适量无水乙醇中，不断搅拌，并超 声5 min使之充分溶解，再缓慢加入到水浴加热至已 熔融的载体中，混合均匀，于80 °C恒温水浴锅中继 续搅拌加热至完全蒸去有机溶剂，迅速转移至-2(KC 冰箱中冷却固化12 h后，转移至干燥箱中平衡48 h，放干燥器备用。
采用上述两种方法分别制备HD-SD。固定药物 与载体比例为1: 3的条件下，改变羟丙基卩环糊精 和无水乙醇的用量。采用溶剂法制备时，药物在转 移过程中损失量大，工艺相对复杂，操作不方便，且有机溶剂用量大，可导致药物的重结晶，降低药 物的分散性，从而影响主药的溶解度。溶剂-熔融法 经济便宜，易于制备和操作。故综合考虑，选择溶 剂-熔融法制备SD。
2.2建立橙皮苷含量测定的方法
2.2.1色谱条件[16]色谱柱为Diamonsil-C丨8柱（250 mm><4.6mm，5|im)；检测波长283 nm；流动相为 甲醇-醋酸-水（35 : 4 : 61)，体积流量1mL/min；柱温35 'C ；进样量5 nL；理论塔板数按HD峰面积
算应不低于2000。
2.2.2溶液配制[17]精密称取HD对照品10.22 mg，置 于50 m L量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声，定容 至刻度，摇匀，配制成质量浓度204.4 M g/mL的HD 对照品溶液。精密量取HD样品20 mg，置于100 mL 量瓶中，加人适量甲醇，超声30 m in后，静置10 min，用甲醇定容至100 mL，用微孔滤膜滤过，取续 滤液作为供试品溶液。另取甲醇溶液作空白对照。2.2.3专属性考察分别取对照品溶液、供试品溶 液及空白对照溶液，进高效液相色谱仪检测，供试 品溶液在对照品对应位置有色谱峰，空白对照无干 扰，样品中其他成分不影响测定。
2.2.4线性关系考察分别精密吸取橙皮苷对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL置10 mL量瓶中，用甲 醇定容至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤后加入样品 瓶中，按“2.2.1”项下色谱条件，进样5卟测定峰面 积，以HD对照品质量浓度x为横坐标，峰面积y为纵 坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为y= 10.841X + 2
3.66，R2 = 0.9997，表明橙皮苷在 20.44—122.64 H g/mL
线性关系良好。
•12 •中 Pi 与临床Pharmacy and Clinics o f C hine Materia Medica 2Q2\;\2(\) 1600
1400 1200
:10.841x +23.66
R! - 0.9997
表3重复性试验(n=3>
序号峰面积平均峰面积SD值RSD(%)
11812.6
21810.7
31809.5
1810.5 2.300.13
41813.6
51809.2
61807.4
2.2.8加样回收率试验精密量取已知质量分数的
橙皮苷2 mL，置于10 mL量瓶中，平行9份，分别
精密加人橙皮苷对照品溶液1、2、3 mL，各3份，
加甲醇稀释至刻度，超声混匀，制得含低、中、高
质量浓度橙皮苷的供试品溶液，用微孔滤膜滤过后
加入到样品瓶中，进样5 pL测定峰面积，计算低、
中、高不同质量浓度的平均回收率分别为95.79%、
98.44%
0.38%,
、95.04%, RSD 依次为 1.80%
表明方法准确度高。
表4加样回收实验(n=3)
、0.7%、
供试品
浓度
(ng/mL)
加入对照
品浓度
(|ig/mL)
峰面积
回收率
(%)
平均回
收率(％)
SD
RSD
(%)
阿西莫夫基地652.393.9095.79 1.72 1.80
20.44657.896.21
642.397.26
901.698.6198.440.690.70
项目质量管理
38.7340.88897.297.68
903.599.02
1102.195.3495.040.370.38
61.321097.294.64
1100.895.15
2.3累积溶出方法的建立
按照《中国药典》2015年版溶出度测定法（通
则0931第二法）（桨法）进行测定，设定转速为
(75土1) r/min，水浴温度（37±0.5) °C，溶出介质
定为鱗酸缓冲液（PH6.8和PH7.4) 900 mL。分别精
密称取橙皮苷原料药、橙皮苷羟丙基固体分散体200
mg，均匀分散于溶出介质中，粉末刚接触溶出介质
时计时，分别于 10、20、30、40、50、60、120
min时取样4 mL，立即补充于相同温度下保温的溶出
介质4 mL，样品用0.45 nm微孔滤膜过滤，续滤液按
“2.2.1”项下测定含量，计算样品的累积溶出度。
拟选择磷酸缓冲液（PH6.8和PH7.4)两种介
质，以筛选出的最佳制备工艺所制备的H D-S D为样
品，分别在两种溶出介质中按照上述方法测定相应浓度Hg/mL
图2 HD含量测定HPLC线性关系考察
2.2.5精密度试验分别精密吸取对照品溶液1、5、10mL置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成 20.44、102.2、204.4 ng/mL 的低、中、高 3 个质量浓度的HD对照品溶液，分别连续进样6次，每次进样量5 nL，记录HPLC图谱中HD的峰面积，计算其RSD分别为1.52%、0.33%、0.12%，表明
该 方法精密度良好。
表1精密度试验(n=6)
取样量(mL>含量(卩g/mL)平均峰面积SD值RSD(%) 120.44235.15 3.571.51
5102.21118.92 3.670.33
10204.42222 2.600.12
2.2.6稳定性试验取在室温下贮存的供试品溶液，0.45 pm微孔滤膜滤过后装人样品瓶，按“2.2.1”项下色谱条件，分别于〇、2、4、6、8,.10、12、24 h进样5 nL测定峰面积，计算其RSD为0.35%，表明HD 样品溶液在24 h内稳定性良好。
表2稳定性试验(n=3)
时间(h)峰面积平均峰面积SD值RSD(%) 01812.6
21825.6
41809.6
61809.3
1813.87 6.280.35 81820.1
101806.9
121811.2
241815.7
2.2.7重复性试验取同一批HD样品6份，按制备供 试品溶液方法配制，分别取适量溶液经微孔滤膜滤 过后装人样品瓶，按“2.2.1”项下色谱条件进样5 pL测定峰面积，计算其R SD为0.13%，表明方法重复性
良好。
中药与临床Pharmacy and Clinics o f C hine Materia Medica 2Q2\.，\2、\.、•13 •
时间点溶出度，考察不同溶出介质对HD溶出度的影 响，结果见图3所示。结果表明，在PH7.4磷酸缓冲 液中，SD在lOmin内的溶出度就达到了60%以上，溶 出效果明显，溶出速度以及溶出度都比PH6.8磷酸缓 冲液中更高，原因可能是橙皮苷作为苷类物质在弱 碱性环境具有更高的溶解度。故溶出介质定为PH 7.4 磷酸缓冲液。
K H药m-6.SK计释放度
原枓药PH-7.4累计释放度
样品PH=6.S累计释放度
样品PH-7.4累计释放度
图3不同溶出介质中HD对照品和HD-SD体外溶出曲线
2.4制备工艺的优选
日本悬疑小说作家
2.4.1载体种类的选择以聚乙二醇4000 (PEG 4000)、聚乙二醇6000 (PEG 6000)、胶态二氧化 硅（Si02)、泊洛沙姆188 (F188)、聚乙烯吡咯烷 酮K30 (PVPK30)、羟丙基(3环糊精为载体，选择 药载比为1:3，采用溶剂-熔融法，制备HD-SD。结 果显示，HD只在胶态二氧化硅、聚乙二醇4000、聚 乙二醇6000以及羟丙基p环糊精中分散成型，而四种 载体中，与羟丙基P环糊精的混合度最高，因此，羟 丙基卩环糊精是五种载体中性能最好的材料，最终确 定载体为羟丙基P环糊精2.4.2药物-载体比例的选择 以羟丙基P环糊精为载体，药载比分别定为1 : 2、1: 3、1: 4、1 : 5、1 : 6，选择溶剂-溶融法 制备橙皮苷固体分散体。分别称取含相同质量浓度 的不同比例HD-SD，按“2.3”项下建立的累积溶出度 测定方法分别对HD原料药和HD-SD进行体外溶出度 测定，结果见图4所示。结果表明，与纯药物相比，SD显示出更高的溶出度和溶出速率。4000、PEG 6000、羟丙基p环糊精、胶态二氧化桂 各5份，分别溶于2 mL甲醇、无水乙醇、丙三醇，液态聚乙二醇4000和吐温-80中，充分振摇使其充分 溶解，观察HD与四种载体的溶解状态。结果显示，HD在甲醇和乙醇中溶解程度相似，在其他三种溶剂 中溶解度不佳，可见粉末；四种载体中胶态二氧化 硅和羟丙基P环糊精在甲醇和无水乙醇中溶解，在另 三种溶剂中不溶；而PEG 4000、PEG 6000在几种溶 剂中都不溶。综合考虑载体与HD在溶剂中年的溶解 性，甲醇和无水乙醇更占优势，因为甲醇有毒性；所以最终首选无水乙醇为制备溶剂。
2.4.5验证试验按考察所得最佳制备条件：以无水 乙醇为溶剂，选择药载比为1: 3，以羟丙基卩环糊 精为载体，按照溶剂-熔融法制备3份HD-SD样品，并按“2.3”项下方法，以PH 7.4磷酸缓冲液为溶出介 质，分别测定3批样品的溶出度，皆达到85%。
2.5差不扫描量热法(DSC)
取适量HD原料药、羟丙基卩环糊精、羟丙基p环 糊精与HD物理混合物、HD固体分散体(1: 5)，分别 进行DSC扫描。工作条件：以空铝坩埚为参考池，升温速度为l〇°C/min，升温范围为50〜65(T C，结果 如图5所示。结果显示，羟丙基卩环糊精在175 X：存在 放热峰，为结晶峰；HD原料药在180、230 °C存在放 热；羟丙基P环糊精与HD的物理混合物在150、180、230 °C处存在一个弱放热峰，羟丙基卩环糊精在175 °C的特征峰与HD重叠，以上可能是由于HD与羟丙 基P环糊精在升温过程中熔融混合后发生某种反应，形成了低共熔物，导致其放热峰和峰形受到影响；HD-SD的DSC曲线中，HD和羟丙基p环糊精的吸热及 放热峰都不明显，只在230 r存在一较弱且窄的放热 峰，表明HD-SD制备成功，提示HD与羟丙基p环糊精 在制备成固体分散体过程中可能发生了某些化学反应 反应，HD在羟丙基p环糊精中以无定形状态存在的，少部分可能与结晶形式（且非药物单体）存在。
时间(m in)
图4 PH7.4磷酸缓冲液中不同药载比的HD-SD体外溶出度
2.4.3溶剂的选择分别精密称取20 mg橙皮苷、PEG
a ir(=〇
图5A〜Dffi次为羟丙基p环糊精、橙皮苷、物理混合物和HD-SD
(％g
蜜雨堂
运
訖
.14 .中 Pi 与1偽床Pharmacy and Clinics o f Chine Materia Medica 2Q2\.，\2(\)
3结论与讨论
3.1结论
经过前期实验，本实验确定的HD-SD最佳制备 工艺为：羟丙基P环糊精作为制HD-SD的载体，以无水乙醇为溶剂，HD与羟丙基卩环糊精质量比例1: 3，用溶剂-熔融法制备HD-SD。DSC表征图谱证明 HD-SD的成功合成。以此工艺所制备的HD-SD在PH 7.4磷酸缓冲液中测溶出效果最佳，表明其能显著改 善HD的溶解性能。
3.2讨论
以上实验选择了 6种载体，但只有四种载体与HD 混合较好，成功制备了SD。其中泊洛沙姆188在与 HD进行熔融混合时，状态还算良好，但在蒸千乙醇 冷冻之后干燥过程中始终难以完全干燥成固体。而 PVPK30在与HD加热熔融混合的过程中，出现了絮状 沉淀，使药物与载体完全无法混合。推测HD由于某 些原因可能不能均匀的高度分散于这两种载体中。
而另外四种载体虽然与HD成功制备成SD，但胶 态二氧化硅与HD制成的SD中，可以明显看到少许白 色粉末，推测是未与HD充分均匀混合的二氧化硅。可能原因是二氧化硅载体相较于HD而言太多，已有 的药物已附着于载体上，多余的二氧化硅未附着HD 依旧呈较为明显的白色^ PEG4000和PEG6000与HD 制备而成的SD中，可以看见细小的晶体，不完全成 粉末状，推测是未与药品充分混合的载体，是成品 为呈现均匀的粉末。相比于上三种载体，羟丙基P环 糊精与HD所制成的SD燥良好，成均匀的黄褐色的粉 末，显示HD与载体充分混合，附着良好。
4展望
HD的作用广泛，不仅在医药方面值得研究，在 食品，保健品和化妆品方面也有很大的探索空间。其在临床应用上做发挥的作用也让越来越多的学者 对和研究人员认识到它所蕴含的巨大潜在价值。对 于提高HD的溶解度，虽然现在已有许多这方面的研 究，也取得了较好的成果，但都由于种种原因无法 全面推广应用于医药研究和工业生产中，对这方面 的技术和研究还需要不断努力学习。要不断地尝试 新方法，使用更多新技术，开发更多新路径，扩展 HD的应用领域。
随着近年来越来越多的难溶性药物的发现，通 过提高其溶出度来提高人体生物利用度的方法，已成为近年来难溶性药物研究的重点。SD的制备，可显著提高难溶性药物的溶出度，增强其生物利用 度，已备受关注和广为研究。因此，SD技术十分值 得推广应用。
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(责任编辑：傅舒)
