阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌活性的研究李 兰1，何家康1，汤树生1，谢仕锦2，张朝明1，郭召绪1，肖希龙1过年祝福的话
(1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193; 2.广东省佛山市南海金德诚兽药经营部，广东佛山528200)
中图分类号:S859.79+9.1 文献标识码:B 文章编码:0529 6005(2010)10 0091 02
近年来，我国兽医临床畜禽疾病多呈混合感染或继发感染，导致现有单一抗感染药物无法控制多种病原体混合感染的局面，因此，联合用药已成为克
收稿日期:2009 07 14
钓鱼鱼漂
基金项目:"十一五"国家科技支撑计划项目"兽用复方新制剂的研制与应用"(2006BAD31B08)
作者简介：李兰(1983 )，女，硕士生，从事兽医药理学与毒理学研究,E mail:
通讯作者：肖希龙,E mail:xiaoxl@ 服单一抗感染药物抗菌范围有限而不能有效防治混合感染的缺陷的一种较好方案。兽医临床上，阿莫西林是防治金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性菌感染的常用药物，而硫酸粘菌素常用于治疗大肠杆菌、沙门菌等疾病。如能合理开发阿莫西林和硫酸粘菌素复方
制剂，将是防治畜禽混合感染性疾病的有效措施。因此本试验旨在通过考察阿莫西林与硫酸粘菌素联合用药的体外抗菌活性，为复方制剂的研制提供科学依据。
产生对Ca2+,M g2+ ATP酶活性的抑制，还有待于进一步研究证实。
以往研究表明，安氟醚、氙、氧化亚氮能、氯胺酮等均可抑制大鼠不同脑区Ca2+,Mg2+ ATP酶活性[10 11]。当前国内外尚未发现有关噻环乙胺对大鼠不同脑区突触体该酶活性影响的文献报道，而仅见关于氯胺酮及噻拉唑复合用药后对不同脑区突触体该酶活性影响的少量研究报道。我们的试验结果与张志龙等[12]研究氯胺酮的结果存在差异，在丘脑这一脑区噻环乙胺及氯胺酮对突触体该酶活性的影响较为相似，而张志龙等未对小脑内该酶活性的变化进行研究，对于该酶活性在大脑皮层中未发生明显的改变这一现象。推断可能与药物剂量及药物分子结构不同有关。但前一种推断更有依据，在张志龙等的试验中对大鼠注射氯胺酮的剂量为100mg/kg 体重，而我们高剂量噻环乙胺组的用量只有60m g/ kg体重，而且高剂量噻环乙胺组在大鼠翻正反射消失后大脑皮层突触体Ca2+,M g2+ AT P酶活性下降7.79%，且该酶活性在整个麻醉过程中的变化趋势与大鼠行为学变化相平行。因此，推测如果继续提高噻环乙胺的用量，大脑皮层突触体该酶活性很可能出现与张志龙等研究结果类似的变化。
4 结语
噻环乙胺的全麻作用与抑制小脑和丘脑突触体Ca2+,Mg2+ AT P酶活性相关。此酶可能是噻环乙胺全
麻作用的靶位之一。
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C hine Journal of Veterinary M edicin e 中国兽医杂志2010年(第46卷)第10期
1 材料
1.1 供试药品 阿莫西林：含量99.5%，批号20080312，珠海联邦制药股份有限公司提供；硫酸粘菌素：含量23694IU/mg，批号N0710003J，丽珠集团福州福兴制药股份有限公司提供。
1.2 受试菌株 大肠杆菌17株、金黄色葡萄球菌10株、沙门菌8株、链球菌16株、巴氏杆菌6株(均由本院药理与毒理教研室提供，系临床分离致病菌)。质控菌为大肠杆菌ATCC25922，购自中国药品生物制品检定所。
1.3 培养基 MH肉汤、小牛血清(供链球菌，巴氏杆菌培养用)。
2 方法
2.1 药物储备液的配制及保存 抗菌药物储备液的配制方法见表1。两药配制后无菌分装至2mL 塑料离心管，封口后置于-20 冰箱保存，阿莫西林有效期为1个月，硫酸粘菌素有效期3个月。
表1 抗菌药物储备液的配制
抗菌药物溶剂 储备液浓度( g/mL)
阿莫西林pH值6.0,0.1mol/L磷酸缓冲液1280
硫酸粘菌素超纯水2560
2.2 菌液的制备 菌种经复壮、重新划板分离单个菌落，接种到2mL M H肉汤中，于37 培养12h。以平板计数法进行细菌计数，用M H肉汤稀释使菌液最终浓度为1106CFU/m L。
2.3 药物原液的稀释 参照CLSI提供的药物敏感性范围及已发表文献报道的阿莫西林、硫酸粘菌素对上述5种细菌的MIC值，确定稀释药物溶液的浓度范围。试验时用MH肉汤稀释至所需工作浓度。2.4 单药最低抑菌浓度(M IC)测定方法 取灭菌的96孔板,A H八排分四组，每组测1株菌。无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液由低浓度至高浓度分别加到96孔聚苯乙烯板中，第1~第11孔每孔100 L，第12孔不加药液作为生长对照。接着将制备的菌悬液每孔100 L加入第1~ 11孔。第12孔加入200 L菌液，作为阳性对照。阴性对照及质控菌的MIC均在单独的96孔板上进行。密封后将96孔板置于37 恒温培养箱内培养16~20h后观察记录结果。试验重复3次。链球菌试验的孵育时间为20~24h。
2.5 联合药敏试验 以单药最低抑菌浓度(M IC)试验结果为依据，肉汤稀释棋盘法设计两药的4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍、1/8倍和1/16倍M IC进行77联合。将阿莫西林、硫酸粘菌素原液用MH 肉汤稀释至所需药物浓度。试验设计如表2所示，选取96孔板A H排的1 8孔作为试验区域，阿莫西林的7个浓度由低至高以纵列方式分别从第7纵列至第1纵列加入，每孔50 L，第8纵列作为硫酸粘菌素的单药对照。硫酸粘菌素的7个浓度由低至高以横列方式分别从G排至A排加入，每孔50 L,H排作为阿莫西林
的单药对照。阿莫西林、硫酸粘菌素的单药对照孔内加相对应浓度的药液100 L。然后最后各孔加入100 L上述制备的菌悬液,H排第8孔加200 L菌液，作为阳性生长对照。阴性对照在单独的96孔板中进行。将96孔板放于37 恒温培养箱,18h后观察并记录结果。
2.6 结果判定
2.6.1 MIC结果判定 当阳性对照孔内细菌明显生长，阴性对照孔未见细菌生长，质控菌M IC在质控范围内时，以无细菌生长孔的最低药物浓度为该药的MIC。当出现单一跳孔时，记录抑制细菌生长的较高药物浓度。如出现多处跳孔，结果无效，需重复试验。
e的笔顺2.6.2 FIC结果判定[1] 选择最佳组合效应时各自的MIC甲药联用、M IC乙药联用以计算FIC指数。
FIC指数计算与判读标准:
FIC指数=
M IC甲药联用
M IC甲药单用
+
MIC乙药联用
MIC乙药单用
FIC指数!0.5为协同作用;>0.5~1为相加作用;>1~2为无关作用;>2为拮抗作用。
音乐的起源
3 结果
较场尾
3.1 阿莫西林与硫酸粘菌素单用的M IC结果 阿莫西林对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的MIC范围分别为 2.0~ 512.0 g/m L,0.125~ 2.0 g/mL,0.5~512.0 g/mL,0.015~0.5 g/m L,0.031~0.50 g/m L；硫酸粘菌素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的M IC范围分别为0.125~
4.0 g/mL,8.0~128.0 g/m L,0.125~8.0 g/ m L,128.0~1024.0 g/m L,4.0~128.0 g/mL。
3.2 阿莫西林与硫酸粘菌素联合药敏试验结果见表2。从表2可以看出,57株受试菌株中4株呈协同作用，所占比例7.02%;49株呈相加作用，所占比例85.96%;4株呈无关作用，所占比例7.02%；无拮抗作用。阿莫西林与硫酸粘菌素联用对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌、巴氏杆菌FIC 指数的平均值分别为0.80,0.59,0.91,0.87,0.98。对所有受试菌FIC指数的平均值为0.82。
3.3 阿莫西林与硫酸粘菌素联用对5种细菌的FIC指数构成比例 阿莫西林与硫酸粘菌素联用对5种细菌的FIC指数构成比例见图1，从图1可以看出,FIC指数主要分布在0.5 1范围内，表明阿莫西林和硫酸粘菌素联用后对5种受试菌的抗菌效果以相加作用为主。
4 讨论
随着近年来兽医临床混合感染性疾病越来越严重，联合用药已成为有效防治混合感染的缺陷的一种较好方案。兽医临床上，阿莫西林和硫酸粘菌素分别为防治金黄色葡萄球菌、链球菌等革兰阳性菌
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表2 阿莫西林与硫酸粘菌素联合药敏试验结果
菌种(株数)协同作用(%)相加作用(%)无关作用(%)拮抗作用(%)平均FIC值
大肠杆菌(17) 5.8888.24 5.8800.80
金黄色葡萄球菌(10)3070000.59
沙门菌(8)0100000.91
链球菌(16)093.75 6.2500.87
巴氏杆菌(6)066.6733.3300.98
总计(57)7.0285.967.0200.
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图1 阿莫西林与硫酸粘菌素联用对
5种细菌的FIC指数分布
感染和大肠杆菌、沙门菌等革兰阴性菌感染的常用药物。因此，兽医临床上常见联合使用单方阿莫西林和硫酸粘菌素制剂来防治革兰阳性菌和革兰阴性菌混合感染。如能合理开发阿莫西林和硫酸粘菌素复方制剂，可扩大抗菌谱、增强抗菌效力，并能减少药物用量和减轻动物应激反应。
国内外现已有一些关于阿莫西林或硫酸粘菌素与其他药物联合应用的研究报道，肖华平[2]等通过体外联合药敏试验表明，阿莫西林、阿米卡星联用对沙门菌具有协同作用；康宇[3]等采用棋盘法研究表明，氟苯尼考与粘菌素联用对猪大肠杆菌、链球菌分离株具有协同效果。此外，亦有许多报道表明，硫酸粘菌素与多种药物联合应用具有协同作用(利福平[4 5]、环丙沙星、磺胺嘧啶钠、对氨基苯甲酸[6]、诺氟沙星[7]、头孢他定[8]、恩诺沙星[9]、硫酸黄连素[10])。
马红伟等[11]研究了阿莫西林和硫酸粘菌素对大肠杆菌和沙门菌的体外联合抗菌作用，结果表明，对14株试验菌株体外联合抗菌呈协同与相加作用的占78.6%，呈无关作用的占21.4%，无拮抗作用。该研究主要针对猪、鸡的肠道常见病原菌，试验菌数相对有限；因此，本文在前人研究的基础上，增加
了两药对金黄色葡萄球菌、链球菌和巴氏杆菌等常见病原菌的联合抗菌研究，并且增加了受试菌株的数量，以期对阿莫西林和硫酸粘菌素的体外联合抗菌活性进行较系统的研究。
本文57株受试菌株的联合药敏感试验结果显示,85.96%(49/57)的受试菌对两药联用呈相加作用,7.02%(4/57)的受试菌呈协同作用,7.02%(4/ 57)的受试菌呈无关作用，两药联用未见拮抗作用。其中阿莫西林与硫酸粘菌素联用对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门菌，链球菌，巴氏杆菌FIC指数的平均值分别为0.80,0.59,0.91,0.87,0.98；对所有受试菌FIC指数的平均值为0.82。结果表明，两药联用主要以相加作用为主，联用可以增强疗效。此外，从FIC指数还可以看出，两药联用后对于不同敏感度的细菌的增效程度也有差异，其增效顺序为：不敏感或耐药株增效程度>中度敏感株增效程度>高度敏感株增效程度，表明两药联用可以有效抑制或杀灭耐药菌株，减少耐药菌株的产生。
综上所述，阿莫西林、硫酸粘杆菌素两药联用可扩大抗菌谱，有效防治畜禽混合感染或继发感染，并可减少给药剂量，减少耐药株的产生。因此，如能通过合理的制剂技术，将两药制成复方制剂，无疑是防治畜禽混合感染的一种有效措施。
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