IL-33基因单核苷酸多态性与中国南方汉人炎症性肠病临床表型相关
张青森;杨庆帆;陈白莉;何瑶;陈旻湖;曾志荣
【摘 要】目的:探讨白细胞介素33(IL-33)基因单核苷酸多态性(SNP)与中国南方汉人炎症性肠病(IBD)的关系.方法:通过HapMap数据库筛选出IL-33基因8个SNP序列标签;对250例克罗恩病(CD)患者、115例溃疡性结肠炎(UC)患者及622名健康对照采用MALDI-TOF MS技术进行基因分型检测.结果:8个SNP位点的基因型及等位基因频率在病例(包括CD及UC)及对照组中无明显差异(P＞0.05).基因型-临床表型分析发现多个SNP位点与CD部分临床表型相关:rs10118795 T等位基因是肠外表现的保护因素(P＜0.05,OR =0.513,95％CI:0.281 ～0.938),而rs7025417 CC基因型是肠外表现的危险因素(P＜0.05,OR=1.363,95％ CI:1.006～1.846);rs10118795 C等位基因降低肛周病变风险(P ＜0.05,OR =0.480,95％ CI:0.232～0.994),而rs10975519CC基因型增加肛周病变风险(P＜0.05,OR=2.054,95％ CI:1.053～4.009);rs10975509G等位基因是上消化道型CD的危险因素(P＜0.05,OR=3.570,95％ CI:1.328～9.600),且其A等位基因携带者发生回结肠型CD的风险增加(P＜0.05,OR=0.613,95％ CI:0.377～0.996);在治疗方面,rs101 18795、rs10975509和rs7025417
基因型均与CD患者英夫利昔单抗治疗后30周黏膜愈合相关(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05).UC患者中,未发现这8个SNP位点影响其临床表型(P＞0.05).结论:本研究中IL-3基因8个SNP位点不增加中国南方人群CD及UC发病风险,但部分位点影响CD的临床表型,某些SNP位点可能成为预测英夫利昔单抗疗效的标志物.
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】2014(030)005
【总页数】7页(P902-908)
【关键词】白细胞介素33;单核苷酸多态性;克罗思病;溃疡性结肠炎
【作 者】张青森;杨庆帆;陈白莉;何瑶;陈旻湖;曾志荣
【作者单位】中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院消化内科,广东广州510080
【正文语种】中 文
【中图分类】R392.2
炎症性肠病(inflammatory bowel dia，IBD)是一种病因尚不清楚的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn dia，CD)。近年来，炎症性肠病的发病率明显上升[1-2]。然而，其发病机制仍未明确，目前认为是由遗传、环境和免疫等多因素共同作用所致。
白细胞介素33(interleukin-33，IL-33)是新近发现的炎症因子，具有抑制和促进炎症的双重作用[3-4]，与多种免疫及过敏性疾病相关[5-6]。研究发现，其在IBD患者肠、黏膜和血清中明显异常表达[7-8]，并在IBD炎症、黏膜愈合及纤维化等方面发挥重要作用[9]。Latiano等[10]近期发现IL-33基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP) rs3939286增加意大利人IBD发病风险，而关于IL-33基因多态性与中国人群IBD的关系尚无报道，本研究旨在探讨IL-33基因单核苷酸多态性与中国南方人群IBD发病及临床表型间关系。
材 料 和 方 法
1 研究对象
将我院 2003年～2012年IBD诊治中心确诊的365例IBD患者 (CD 250例，UC 115例)，以及同期在我院健康体检的622名性别、年龄匹配的健康人(无免疫系统相关病史)纳入本研究。IBD诊断标准参考2012年中华医学会消化病学分会推荐标准[11]，基于临床表现、消化内镜及组织学检查作出临床诊断，确诊病例为经病情观察符合CD/UC病程经过或通过手术取得病理诊断者。临床资料通过查阅我中心IBD数据库获得，包括患者人口学资料及临床分型特征，即性别、发病年龄、症状、吸烟史、家族史、肠外表现、肛周病变、临床特征等，IBD临床分型采用蒙特利尔分型标准[12]，见表1。本研究已通过中山大学附属第一医院临床研究伦理委员会批准，标本采集获得研究对象的知情同意。
表1 炎症性肠病病人基本资料Table 1. Demographic characteristics of the IBD patientsEIM: extra-intestinal manifestation; 6-MP：6-mercaptopurine;MTX:methotrexate; CTX:cyclophosphamide.IndexCrohn dia(n=250)Ulcerative colitis(n=115)Sex Female90 (36.0%)47 (23.0%) Male160 (64.0%)68 (87.0%)Age (year.Mean±SD)32.7±12.338.0±13.6Age at ont(year.Mean±SD)26.2±10.835.7±12.2Ag
e at diagnosis A1(<16 years)29 (11.6%)6 (5.2%) A2(17～40 years)179 (71.6%)65 (56.5%) A3(>40 years)42 (16.8%)44 (38.3%)Family history (Yes)6 (2.4%)0 (0%)Smoking Yes30 (82.8%)24 (20.9%) No207 (12.0%)81 (70.4%) Data not available13(5.2%)10 (8.7%)Appendectomy Yes19 (7.6%)4 (3.5%) No220 (88.0%)99 (86.1%) Data not available11 (4.4%)12 (10.4%)Dia location (CD) L1 (terminal ileum)38 (15.2%)- L2 (colon)30 (12.0%)- L3 (ileocolon)164 (65.6%)- L4(upper digestive tract)18 (7.2%)-Distribution (UC) E1 (proctitis)-60 (52.2%) E2 (left-sided)-13 (11.3%) E3 (extensive)-39 (33.9%) Data not available-3 (2.6%)Dia behavior (CD) B1 (non-penetrating)55 (22.0%)- B2 (structuring)61 (24.4%)- B3 (penetrating)34 (13.6%)-Perianal lesions Yes59 (23.6%)- No191 (76.4%)-EIM Yes71 (28.4%)24 (20.9%) No171 (68.4%)86 (74.8%) Data not available8 (3.2%)5 (4.3%)Medication historySystemic administration Sulfasalazine31(12.4%)64(55.7%) Mesalazine91(36.4%)71(61.7%) Corticosteroids 135(54.0%)45(39.1%) Azathioprine/6-MP180(72.0%)23(20.0%) MTX22(8.8%)3(2.6%) CTX3(1.2%)- Thalidomide50(20.0%)1(0.9%) Infliximab24(9.6%)1(0.9%) Chine medicine-11(9.6%)Local application Steroids2(0.8%)45(39.1%) Mesalazine3(1.2%)46(40.0%) Houfengsan1(0.4%)26(22.6%)
2 方法
2.1 基因组DNA获取 采集患者及健康对照每人2 mL外周血，利用天根血液基因组织DNA 提取试剂盒 (北京天根有限公司) 提取基因组DNA。操作步骤参见试剂盒说明书。
2.2 SNP挑选及分型检测 本研究选择的8个标签SNP(Tag-SNP)是综合考虑已有文献对于IL-33与疾病关系的报道以及SNP位点在IL-33基因的具体位置而确定的，前者基于IBD与多种免疫相关疾病存在基因重叠，后者基于突变点是否可能影响IL-33的表达及功能(bi.v/SNP/i?chooRs=doublehit&locusId=90865&mrna=NM_001199640.1&ctg=NT_008413.18&prot=NP_001186569.1&orien=forward&refresh=refresh)。各位点的功能特性、最小等位基因频率及与疾病的关系情况见表2。SNP检测采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)，由深圳华大基因有限公司完成。
表2 8个SNP的基本信息Table 2. Information of the 8 SNPsSNPLocationAlleleMAFAllele function Related reportrs10482743’ UTRG/A0.452microRNA binding siteNors10975519ExtronC/T0.463Associated with Japane cedar pollinosisAssociated with Japane cedar pollinosisrs7025417IntronC/T0.476Transcription factor-binding siteN
ors11792633IntronC/T0.433UnknownRelated to ont of Alzheimer s dia in Chine and Caucasian peoplers7044343IntronC/T0.474UnknownRelated to ont of Alzheimer s dia in Caucasian peoplers1929992IntronG/A0.489UnknownAssociated with Japane cedar pollinosisrs10975509IntronA/G0.488Transcription factor-binding siters10118795IntronC/T0.452Transcription factor-binding site
2.3 相关评判标准 内镜下黏膜愈合情况依据CDEIS评分分为愈合、部分愈合和未愈合3个等级；愈合定义为CDEIS评分<3分和(或)内镜下未见溃疡；部分愈合定义为CDEIS评分3～6分和(或)内镜下肠道黏膜轻度炎症、小糜烂、浅溃疡或者溃疡较前好转；无效定义为CDEIS评分较前下降<5分，溃疡仍然存在，较前无明显消失或者变浅[11,13]。英夫利昔单抗临床疗效评估依据CDAI[11]，临床有效定义为CDAI下降≥70分，临床缓解定义为CDAI下降虽<70分但CDAI<150分，临床无效为使用英夫利昔单抗治疗10周时患者临床症状未改善且CDAI评分>150分。
3 统计学处理
应用SPSS 13.0统计软件分析。根据Hardy-Weinberg遗传平衡定律，采用2检验分析CD、
UC及对照组样本的群体代表性。各SNP位点在病例组与对照组基因型及等位基因分布频率的比较采用 Pearson 2检验；基因型及等位基因与IBD临床特征间关系采用单因素和Logistic回归分析，计算优势比(odds ratio，OR)及其95%置信区间(confidence interval，CI)，其中OR值经性别和年龄校正。数据以均数±标准差(mean±SD)表示。以P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
1 一般情况
本研究病例组共纳入365例IBD患者，均为中国南方汉族人(表1)，其中CD 250例，UC 115例。CD患者平均年龄(32.7±12.3)岁，其中男性160(64.0%)例；UC患者平均年龄(38.0±13.6)岁，男性共68(87.0%)例。对照组共622名，平均年龄(31.4±8.0)岁，男性400(64.3%)例。CD及UC组与对照组间的性别和年龄构成比均无显著差异(P>0.05)。
2 IL-33各SNPs基因型在IBD患者及健康人群中的分布
挑选的8个SNP在CD、UC及对照组中基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)
，具有群体代表性。进一步分析比较发现，这8个SNP位点的基因型及等位基因频率在病例及对照组中均无显著差异(P>0.05),见表3。
