石榴日轮丸质量标准提升研究
禄晓艳杨金草+
甘肃省甘南藏族自治州药品检验检测中心，甘肃甘南74700
【摘要】目的：建立藏药制剂石榴日轮丸质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC)对制剂中石榴子、红花进行 定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC)对制剂中胡椒碱进行定量分析，用C A PC E L L P A K C18色谱柱（4.6m m x250 rmn，5，），以甲醇-0.1%磷酸水溶液（70:30)为流动相，流速为1.0 m L.min'柱温为30 t，检测波长为343 n m，胡椒碱在0.850〜3.186叫范围内线性关系良好（「=0.9999)，平均加样回收率为99.99%，RSD=0.35%(n=6).结论：此法简便、准确，具有良好的重复性和回收率、专属性强、灵敏度高，可用于石榴日轮丸的质量控制。
【关键词】石榴日轮丸；石榴子；红花；胡椒碱
【中图分类号】R282.5 【文献标志码】A【文章编号】1007 -8517 (2021) 02 -0043 -04
Study on the Improvement of the Quality Standard of Pomegranate Rilun Pills
LU Xiaoyan Y A N G Jincao*
Gannan Tibetan Autonomous Prefecture Drug Inspection and Testing Center, Gannan 74700, China Abstract ：Objective To establish the quality standard of Ti蛇莓草
betan medicinal preparation Pomegranate Rilun Pi l l s.Methods Thin layer chromatography (T I X)was ud for qualitative identification of pomegranate eds 美术的英文
and safflower； high performance liquid chromatography (H P L C) was ud for quantitative analysis of piperine in C A P C E L L P A K Cl8 column (4. 6 m m x 250 m m, 5 |xm) ,using methanol -0. 1%phosphoric acid aqueous solution (70-30) as the mobile pha, the flow rate i s 1.0 m L • min 1 ,the column temperature i s 30 C ,the detection wavelength i s 343 nm, and the piperine i s0. 850 ~ 3. 186 jxg The linearity i s good within the range (r = 0. 9999) ,the average sample recovery rate i s99. 99% ,R S D=0. 35%(n = 6).Conclusion This method i s simple, accurate, with good repeatability and recovery rate, and specific Strong, high nsitivity, can be ud for quality control of pomegranate Rilun p i l l s.
Key words：Pomegranate Rilun pill；Pomegranate Seeds； Safflower；Piperine
石榴日轮丸为常用藏药制剂（藏文读音：索 吉尼美吉廊日布），由石榴子、冬葵果、肉桂、天 门冬、黄精、西藏棱子芹、荜茇、喜玛拉雅紫茉 莉、红花、蒺藜、豆蔻等11味药材组成，具有温 补胃肾的功能，用于消化不良、腰腿冷痛、小便 频数、脚背浮肿、阳痿、遗精等，是治疗胃、肾 性病症的常用药之一，收载于卫生部药品标准藏 药第一册11]，但标准项下只有显微鉴别和丸剂的常规检验，
没有薄层鉴别和含量关于动物的作文
测定。方中石榴 子及其活性成分鞣花酸均具有抗癌、抗痢疾性腹 泻、抗氧化、降血糖和雌激素样等药理作用[2_3]；荜茇属温里药，具有温中散寒、行气止痛之功效，临床适用于胃脘冷痛、胃寒呕吐或泄泻[4]，其主 要活性成分胡椒碱具有催眠、镇静、抗惊厥、抗 抑郁和骨骼肌松弛等作用临床主要用于胃痛、腹 泻等[5]；红花为活血化瘀的经典中药之一，其有 效成分羟基红花黄色素A具有活血化瘀、抗炎、抗肿瘤等作用16-7]。为了进一步控制该药品质量，本实验采用薄层色谱法（TI.C)对石榴子、红花进 行定性鉴别181，用高效液相色谱法（HPLC)测定 该制剂中荜茇的有效成分胡椒碱含量。
1材料
1. 1仪器 A gilent1260 G7n i A四元杲，A gilent
基金项目：甘肃省中医药管理局科研立项课题（G ZK-2017 -80)。
作者简介：禄晓艳（1981-)，女，汉族，本科，副主任中药师，研究方向为中藏药标准研究及质量分析。E-mail: lu3034@ 163. com
通信作者：杨金草（1971-)，女，藏族，本科，主任药师，研究方向为药品标准研究及质量分析。E-m雪景作文500字
ail:yjc_ 1971 @163. com
1260 G7115A 二极管阵列检测器，Agilent1260 G7129A自动进样器（内置柱温箱）；BT224S、CP -225D电子天平；KH-250DB型数控超声波清洗 器；CAMAGWFHdOWJ薄层呈像系统（半自动 点样仪及数码成像系统）。
1.2 试药胡椒碱对照品（批号：110775 - 201706，供含量测定用，纯度98. 9%)；石榴子对 照药材（12丨431-2〇1002，供薄层鉴别用）；红花 对照药材〇2〇9〇7-201713，供薄层鉴别用）均 购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，默克公司）；水为超纯水，其余试剂均为分析纯；硅胶GF254薄层板、高效硅胶H薄层发射英文
板（青岛海 洋化工厂）；石榴日轮丸由甘南藏族自治州碌曲县 西仓寺院藏医院（批号：190324、190502、190711 、191006、191102)提供。
2薄层鉴别试验
2. 1石榴子TLC鉴别取本品3批各1g，加乙醇 5 mL，超声处理30 min，取上清液作为供试品溶液；另取石榴子对照药材0.5 g，同法制成对照药 材溶液；再取缺石榴子的阴性对照1g同法制成阴
4.石榴子对照药材；
5.阴性对照
图1
3胡椒碱含量测定
3.1色谱条件及系统适应性试验色谱柱选用CAPCELL PAK C18 (
4. 6 m m x250 mm,5 jxm)；流动相：甲醇-〇_ 06%磷酸溶液（70:30)；检测 波长：343 nm，流速：1.0 m L .min_1，柱温：30 T，进样量：对照品IO j j l L，供试品：5pL；理论 板数按胡椒碱峰计算应不低于5000。
3.2对照品溶液的制备取胡椒碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含胡椒碱0.2124 m g 的溶液，即得。性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年 版四部通则0502)试验，吸取上述供试品及阴性 对照溶液各1〇 (xL，对照药材溶液3 pL，分别点于 同一硅胶G F254薄层板上，以石油醚（60〜90丈）-乙酸乙酯（9:1)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外灯（254 rnn)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 荧光斑点，而阴性对照无干扰，如图1所示。
2.2红花TLC鉴别取本品3批各1g，加80%丙酮溶液5 mL，密塞，振摇15 min，静置，取上 清液作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液；再取缺红花的阴性对照 l g同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上 述供试品、阴性对照溶液及对照药材溶液各4 j j l L，分别点于同一高效硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯 一甲酸-水-甲醇（7:2:3:0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位
置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰，如图2所示。
1、2、3.供试品
(批号：190324、190502、190711 );
4.红花对照药材；
5.阴性对照
图2
3.3供试品溶液的制备取供试品5 g，研细，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密 塞，称定重量，放置过夜，超声处理30 min，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.4阴性对照溶液的制备按供试品的处方和制法，制成不含荜茇的阴性样品，按“3.3”项下的 方法制得阴性对照溶液。
3.5系统适用性试验分别精密吸取荜茇阴性对照溶液、空白溶剂（甲醇）及流动相各1〇 |xL，注 人液相色谱仪，测定，即得。结果
：在荜茇阴性
中国民族民间医药2021 年1月第30 卷第 2 期Chine Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2021，Vol. 30，N〇.2• 45•
对照溶液、空白溶剂（甲醇）及流动相色谱图中，在与荜茇对照品色谱峰相应的保留时间点，未见 有色谱峰。结论：阴性无干扰，本品其他药材、
DADl A, S ig-343, 4 R ef o f f
600
400
200
A 溶剂及辅料不干扰本品的胡椒碱含量测定，基线 完全分离，且峰形良好，本方法的专属性很好，如图3所示。
DADl A, S ig343,4R ef o f f
1200
时间lnin.1
B
时间丨minj
S ig-343, 4 R ef o f f S ig343,4R ef o f f
800给客户的祝福语
时间丨n in j
D
：343, 4 R ef o f f
8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
时间丨h n j
A.胡椒碱对照品；
B.供试品溶液；
C.荜茇阴性对照溶液；
D.流动相；
E.空白溶剂
图3胡椒碱HPLC色谱图
3.6线性关糸考察分别精密吸取胡椒碱对照品溶液（浓度为 〇_2124m g .r n L—1)4、6、8、10、12、15 pL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值: 以进样量为横坐标U)，以峰面积积分值为纵坐 标（0，分别作图，得胡椒碱的线性回归方程为：y= 8526.85X- 29. 1158，「= 0.9999；结果表过冷河
明，胡椒碱在〇.850 ~ 3. 186 |xg之间线性关系良好。
3.7仪器精密度试验取胡椒碱同一浓度对照品溶 液，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定胡椒碱 峰面积，RSD为0.25%，表明仪器的精密度良好。
3.8重复性试验称取同一样品（批号：190324) 按“3.3”项下方法平行制创新性思维
备6份供试品溶液，进
行高效液相色谱分析，测定含量，结果胡椒碱的 RSD 为0.47%。3.9稳定性试验取同一供试品溶液并于供试品溶液制备后2、4、6、8、12、24h，分别进样1次，测定峰面积值以考虑溶液的稳定性。结果在 24h内，供试品溶液中胡椒碱峰面积稳定，RSD 为0.55% (;i=6)，供试品溶液在24h分析时间内 稳定性良好。
3.10加样回收率试验取已知含量的石榴日轮丸供试品（批号：190324) 0.5 g，精密称定6份，分3组，每组2份，分别按样品中胡椒碱含有量与 相应对照品加入量的比例约为1:0. 8、1:1、1:1.2, 加人胡椒碱对照品储备液（〇_2124 mg .mL—1) 6.25、7_ 80、9.35 m L，按 “3.3”项下方法制备供试品溶液，依上述色谱条件进行测定，计算回
收率，测得的结果见表1。
• 46• 中国民族民间医药2〇21年1月第 30 卷第 2 期Chine Journal of Ethnomedicine and Elhnophannacy ,2021 , Vol. 30，N〇. 2
表1胡椒碱加样回收率试验结果(n=6)
组别称样量允原有量/m g加入量/m g测得总量/m g回收率/%平均/%R S D/%
10. 5027 1.6591. 325 2. 997100.44
20.5013 1.6541. 325 2.989100. 34
30.5002 1.651 1.6563.30299. 8599. 990. 35
40.5038 1.663 1.656 3.30799.64
50.5005 1.652 1.987 3.62599. 62
60. 5024 1.658 1.987 3.647100. 05
3.11样品的含量测定取5批石榴日轮丸，按 “3.3”项下方法制成供试品溶液。分别进样，测 得峰面积积分值，计算石榴日轮丸中胡椒碱的含 量。结果见表2。
表2石榴日轮丸中胡椒碱的测定结果
(n = 3 ,m g • g'1 )
批号胡椒碱
190324 3.30
190502 3.29
190711 3.31
1910063.32
191102 3.31
结果表明：5批石榴日轮丸指标性成分胡椒碱 含量差异较小，考虑到原料含量的差异、在生产过 程中的损失以及试验操作过程中的误差，结合实际 生产，转移率按80%计算，并综合考虑单味药荜茇 的含量限度，建议本品胡椒碱的含量限度为：本品 每18含胡椒碱（〇1749^)3)，不得少于2.(^。
4讨论
4- 1石榴子的薄层条件选择在石榴子的薄层鉴别中，比较了乙酸乙酯加热回流提取和乙醇超声 提取，环已烷-乙酸乙酯-甲酸（12:12:3)和石 油醚（60 ~90丈）-乙酸乙酯（9:1)展开系统，硅胶G薄层板和硅
胶G F254薄层板。结果表明，加热回流和超声提取效果基本一致，故选用简便、快速的超声提取，以石油醚（60 ~ 90尤）-乙酸 乙酯（9:1)展开剂展开，斑点清晰。
4.2红花的薄层条件选择在红花的薄层鉴别中，分别对硅胶G薄层板、硅胶H薄层板及高效硅胶 H薄层板（展开剂：乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇7 =2:3:0. 4)进行薄层色谱分析，结果以高效硅胶H 板结果斑点清晰，分离度好，R1'值适中。
4.3胡椒碱的流动相选择在流动相的优化中，参照文献[942]，比较甲醇-水、乙腈-水、甲醇 -〇. 1磷酸溶液作为流动相时，胡椒碱的分离效果。结果表明，甲醇-0.1磷酸溶液作为流动相时，胡椒碱出峰时间较早，能够获得较好的分离 效果，峰形对称性较好，该方法专属性强，测定 结果准确可靠，重复性、相关性好，可用于石榴 日轮丸的质量控制。
4.4方法比较根据科技查新报告，有关藏药石 榴日轮丸的质量标准研究方面，国内仅见四川大 学华西药学院王曙的“藏药石榴日轮丸的质量标 准研究”[8]，研究者对石榴日轮丸进行了薄层色谱 鉴别和薄层扫描含量测定研究，本研究在其研究 基础上增加了石榴子的薄层色谱研究，并将胡椒 碱的含量测定方法进行了改进。
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(收稿H期：2020-08-10编辑：程鹏飞）
