血球计数板的使用

血球计数板

生物实验用具

血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小

物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.

血球计数板的构造和使用

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四

条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔

为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中

只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的世界是平的读后感 长和

宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.

计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分

为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.

但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方

格都是由1625=2516=400个小方格组成,见图.

血球计数板的使用

以计数酵母菌为例

(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.

(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5

个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.

(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖肉丸子怎么炸好吃 专用的厚玻

片.

(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌

液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降

到血球计数室内.

(5)计数时,如果使用16格25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,

右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25

格16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中

格(即80个小方格)的酵母菌数.

(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线

上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).

(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所

含的酵母菌个数.

3.计算公式电热水器漏电

(1)16格25格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/10040010稀释倍数

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(2)25格x16格的血球计数板计算公式:

酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80年会流程表 400104稀释倍数

4.血球计数板的清洁

血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或

用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其

干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,

则必须重复清洗直到干净为止.

实验六微生物的显微直接计数法

一、实验目的

了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直

接计数的技能。

二、实验原理

测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法

和平板计数法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌

或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数

板，一般细菌则采用彼得罗夫霍泽（Petrof Hausr）细菌计数板。

两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜

观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看

清。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3

个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半

边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计

数区分为1无尽的漂泊 6个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成

25个小方面部瑜伽 格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用

双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是

哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组

成。

计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm，每个小方格的面

2

积为1/400mm。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个

2

计数区的体积为0.1mm，每个小方格的体积为1/4000mm。

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使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，

再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

已知：1cm体积=10 mm10 mm10 mm= 1000mm

33

所以：1mm体积应含有小方格数为1000mm/1/4000mm=410

3336

个小方格，即系数K=410 。

6

因此：每ml菌悬液中含有细胞数=每个小格中细胞平均数（N）

系数（K）菌液稀释倍数（d）

三、实验器材

1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。

2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm22mm）、吸水纸、

计数器、滴管、擦镜纸。

四、实验方法

1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10），

-2

以每小格的菌数可数为度。

2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧

的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利

用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟

槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不

要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区

深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，

将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转

换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，

观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、

左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25

个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个

大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计

数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两

个菌体计算。每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，

否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式

计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用

硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机

吹干，放入盒内保存。

五、实验作业：

将实验结果填入下表中：

计数次数 每个大方格菌数 稀 释 试管斜面中平均值

1 2 3 4 5

第一次

第二次

倍 数 的总菌数