抗旱性试验

更新时间:2023-04-22 00:49:17 阅读: 评论:0


2023年4月22日发(作者:保密条款)

利用PEG鉴定烤烟品种抗旱工作评语 性的研究

要:烤烟是需水量相对较大的作物,水分不足会严重影响烟叶的产质量。利

用不同浓度的PEG模拟干旱胁迫对不同的烤烟品种种子进行处理,研究不同品

种在干旱胁迫下种子的萌发和幼苗的生长特性,选出其中抗旱性较优的品种。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 .1 植物材料

待测抗旱性烟种

1.1.2 胁迫试剂

PEG.6000

1.2 方法

1.2.1 高渗溶液的配制

采用PEG-6000作为处理剂,按照08%12%16%20%的浓度梯度

进行配制,形成不同渗透势的干旱胁迫处理。

1..2.2

种子干旱胁迫处理

将不同浓度的PEG溶液做为定根水,施入各个烟种的营养钵内,每个

营养钵里播种20-30颗种子,做两次重复。

1. 3 测定项目

1. 3. 1 种子萌发指标的测定

发芽势= (7 天发芽种子数/ 供试种子数) *100%

发芽率= (14 天发芽种子数/ 供试种子数) 100 %

发芽指数GI =( Gt/ Dt)

发芽均日=( Gt Dt) / 发芽率

Gt 为逐日发芽数,Dt 为相应的天数

1. 3. 2 烟苗的生长指标测定 14 ,测定烟苗

的茎长、根长,3 次重复。

烟苗活力指数= 发芽指数苗长(下胚轴+根长)

株高胁迫指数( PHSI) = (干旱下幼苗的株高/

对照幼苗的株高) 100%

1. 3. 3 烟苗耐脱水力的测定 于发芽试验第25

,选用50 株幼苗,然后断绝幼苗水分供应,自然风

,每隔3h 测一次鲜重,测定4 ,最后烘干称重,

由前2 次计算前期失水率,2 次计算后期失水率。

1.3.4 化学指标的测定

脯氨酸的测定

脯氨酸是植物蛋白质的组分之一, 也是植物体

内重要的渗透调节物质, 在防御植物干旱伤害方面

起重要作用。脯氨酸以游离状态广泛存在于植物体 做梦梦到亲人去世

, 通常含量甚微( 0. 20. 69 mg/ g干重) , 但是在干

旱等胁迫下大量积累, 甚至增加百倍以上。由于脯氨

酸有较好的水合作用, 可以提高原生质的渗防止水分散失,

此外脯氨酸能提高原生质胶体的稳定性

是稳定代谢的决定因素, 因而能够减少失水。

在干旱逆境下, 植物体内脯氨酸的积累决定于干旱

程度、持续期、植物种类和叶片中脯氨酸向其它组织

运输所需的时间。干旱诱发的脯氨酸积累有三条

途径: 失去了脯氨酸合成的反馈抑制作用、脯氨酸氧

化受到抑制和蛋白质合成受到抑制。对于烟草而

, 研究表明吡咯啉- 5- 羧酸( P5C) 合成酶和P5C

原酶参与了L- 谷氨酸向L-脯氨酸的合成, 烟草

植株体内脯氨酸积累是因为其合成被活化和其降解

被钝化所致。在干旱胁迫下脯氨酸大量积累, 而复水

2 d 左右即可恢复到处理前水平, 表明烟叶脯氨

酸含量对干旱胁迫的反应十分敏感, 而且在相同

干旱胁迫下脯氨酸积累程度与抗旱性明确相关,

L-脯氨酸抗旱性品种比野生型就要高几倍。由

此可以看出, 脯氨酸在抗旱性上扮演了一个非常重

要的角色。

脯氨酸的测定

MDA 是膜脂过氧化的最终产物。生物学上MDA 的含量可以反映膜脂的

过氧化程度,含量越高表明植物抗逆和抗衰老能力越弱。

MDA的测定

酶活性通常情况下植物体内产生的活性氧如超氧阴离

(O2H) 、氢过氧自由基(HO2 ) 、过氧化氢(H2O2)巨型水虎鱼 、羟

自由基( OH) 等不足以使植物受到伤害, 因为植物

体内有一套行之有效的抗氧化系统, 但是一旦遭到

严重的干旱胁迫, 活性氧的产生和抗氧化系统之间

的平衡体系就会被破坏, 从而损伤膜的结构和抑制

膜的活性, 最终导致细胞因氧化胁迫而受到伤麻将怎么抓牌顺序图 害。植

物体中主要起作用的是抗氧化酶类, 包括抗坏血酸

过氧化物酶(APX) 、谷胱甘肽还原酶( GR) 氢酶(CAT ) 和超氧化物

歧化酶( SOD) , 可将O2H彻底分解为H2O O2, 从而解除O2H导致

的氧化胁迫。

当不同抗旱性的烟草品种遭受干旱胁迫时, GR 活性都有所升高;

SOD APX 而言, 尽管在所有的品种中其活性都升高了, 但是抗旱

品种比敏感品种升高的幅度大得多; 与此同时, 各个品种的CAT对于

对照只有轻微的上升,这表明CAT 在烟草抗氧化酶类中只起到辅助作

用。复水后CAT GR活性在短期内即恢复到对照水平, SOD APX

活性在较长时期内仍保持较对照高的水平[26] 。硝酸还原酶( NR)

是氧化代谢中的关键酶类, 催化硝酸盐同化途径中的第一步反应,

代谢速率快。烟草中NR 对干旱胁迫十分敏感, 即使在轻度胁迫下

受抑制的程度也明显大于其它酶类。干旱胁迫首先

引起NR 蛋白代谢的增加, 然后促进NR mRNA

代谢, 原有的NR 表达暂时延迟了水分胁迫诱导的

NR 活性的丧失[27]

NR的测定

APX的测定

CAT的测定

SOD的测定

GR的测定

膜透性的测定:

取胁迫的叶子,用蒸馏水清洗3次,然后用滤纸将种子

吸干。取干净的叶并驾齐驱的意思 子0.25 g,放入干燥的50mL锥形瓶中并加15 ml水密封浸泡24 h

以上,用DDS11A型电导率仪测定电导率(E1),然后在80℃下水浴30min,冷却

并振荡30min后测定电导率(E2),细胞膜相对透性(P)=(ElE2)100%。

叶绿素考虑用叶绿素仪测定

根系活力的测定(TTC法)

一、 原理

氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素,溶于水中成

为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯

甲腙,生成的三苯甲腙比较稳定,不教学策略有哪些 会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地

用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC

原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。

所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

二、材料、设备仪器及试剂

(一)材料:水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

(二)仪器设备:1)分光光度计;2)分析天平(感量0.1mg);3)电子顶载天平(感

0.1g);4)温箱;5)研钵;6)三角瓶50ml

7)漏斗;8)量筒100ml9)吸量管10ml10)刻度试管10ml11)试管架;12

容量瓶10ml13)药勺;14)石英砂适量;

15)烧杯10ml1000ml

(三)试剂:1)乙酸乙酯(分大声的英语 析纯);2)次硫酸钠(NaSO),分析纯,粉末;3

224

1%TTC溶液:准确称取TTC1.0g,溶于少量水中,定容

100ml用时稀释至各需要的浓度;4磷酸缓冲液(1/15molLpH751molL

-1-1

硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌

边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml6)0.4molL琥珀酸:

-1

称取琥珀酸4.72g,溶于水中,定容至100ml即成

三、实验步骤

1TTC标准曲线的制作:0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少许NaSO

224

粉摇匀后立即产生红色的甲月替。再用乙酸乙酯定容至

刻度,摇匀。然后分别取此液0.25ml0.50ml1.00ml1.50ml2.00ml10ml

量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲月替25g

50g100g150g200g的标准比色系列,以空白作参比,在485nm波长下

测定吸光度,绘制标准曲线。

2)称取根尖样品0.5g,放入10ml烧杯中,加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的

等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温

13h,此后加入1molL硫酸2ml,以停止反应。(与此同时做一空白实验,先加

-1

硫酸,再加根样品,其他操作同上)。

3把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯34ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎,

以提出甲月替。红色提取液移入试管,并用少量乙酸乙酯

把残渣洗涤二、三次,皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10ml用分光光度计在

波长485nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,

查标准曲线,即可求出四氮唑还原量。

四、结果计算

四氮唑还原强度(mgg根鲜重h=四氮唑还原量mg根重(g时间h

-1-1

2 结果与分析

根据各种理化指标选出抗旱性较优的品种,再继续筛选。


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