利用PEG鉴定烤烟品种抗旱工作评语 性的研究
摘 要:烤烟是需水量相对较大的作物,水分不足会严重影响烟叶的产质量。利
用不同浓度的PEG模拟干旱胁迫对不同的烤烟品种种子进行处理,研究不同品
种在干旱胁迫下种子的萌发和幼苗的生长特性,选出其中抗旱性较优的品种。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1 .1 植物材料
待测抗旱性烟种
1.1.2 胁迫试剂
PEG.6000
1.2 方法
1.2.1 高渗溶液的配制
采用PEG-6000作为处理剂,按照0,8%,12%,16%,20%的浓度梯度
进行配制,形成不同渗透势的干旱胁迫处理。
1..2.2
种子干旱胁迫处理
将不同浓度的PEG溶液做为定根水,施入各个烟种的营养钵内,每个
营养钵里播种20-30颗种子,做两次重复。
1. 3 测定项目
1. 3. 1 种子萌发指标的测定
发芽势= (第7 天发芽种子数/ 供试种子数) *100%
发芽率= (第14 天发芽种子数/ 供试种子数) 100 %
发芽指数GI =( Gt/ Dt)
发芽均日=( Gt Dt) / 发芽率
Gt 为逐日发芽数,Dt 为相应的天数
1. 3. 2 烟苗的生长指标测定 第14 天,测定烟苗
的茎长、根长,3 次重复。
烟苗活力指数= 发芽指数苗长(下胚轴+根长)
株高胁迫指数( PHSI) = (干旱下幼苗的株高/
对照幼苗的株高) 100%
1. 3. 3 烟苗耐脱水力的测定 于发芽试验第25
天,选用50 株幼苗,然后断绝幼苗水分供应,自然风
干,每隔3h 测一次鲜重,测定4 次,最后烘干称重,
由前2 次计算前期失水率,后2 次计算后期失水率。
1.3.4 化学指标的测定
脯氨酸的测定
脯氨酸是植物蛋白质的组分之一, 也是植物体
内重要的渗透调节物质, 在防御植物干旱伤害方面
起重要作用。脯氨酸以游离状态广泛存在于植物体 做梦梦到亲人去世
中, 通常含量甚微( 0. 2~0. 69 mg/ g干重) , 但是在干
旱等胁迫下大量积累, 甚至增加百倍以上。由于脯氨
酸有较好的水合作用, 可以提高原生质的渗防止水分散失,
此外脯氨酸能提高原生质胶体的稳定性,
是稳定代谢的决定因素, 因而能够减少失水。
在干旱逆境下, 植物体内脯氨酸的积累决定于干旱
程度、持续期、植物种类和叶片中脯氨酸向其它组织
运输所需的时间。干旱诱发的脯氨酸积累有三条
途径: 失去了脯氨酸合成的反馈抑制作用、脯氨酸氧
化受到抑制和蛋白质合成受到抑制。对于烟草而
言, 研究表明吡咯啉- 5- 羧酸( P5C) 合成酶和P5C 还
原酶参与了L- 谷氨酸向L-脯氨酸的合成, 烟草
植株体内脯氨酸积累是因为其合成被活化和其降解
被钝化所致。在干旱胁迫下脯氨酸大量积累, 而复水
后2 d 左右即可恢复到处理前水平, 表明烟叶脯氨
酸含量对干旱胁迫的反应十分敏感, 而且在相同
干旱胁迫下脯氨酸积累程度与抗旱性明确相关, 如
L-脯氨酸抗旱性品种比野生型就要高几倍。由
此可以看出, 脯氨酸在抗旱性上扮演了一个非常重
要的角色。
脯氨酸的测定
MDA 是膜脂过氧化的最终产物。生物学上MDA 的含量可以反映膜脂的
过氧化程度,含量越高表明植物抗逆和抗衰老能力越弱。
MDA的测定
酶活性通常情况下植物体内产生的活性氧如超氧阴离
子(O2H) 、氢过氧自由基(HO2 ) 、过氧化氢(H2O2)巨型水虎鱼 、羟
自由基( OH) 等不足以使植物受到伤害, 因为植物
体内有一套行之有效的抗氧化系统, 但是一旦遭到
严重的干旱胁迫, 活性氧的产生和抗氧化系统之间
的平衡体系就会被破坏, 从而损伤膜的结构和抑制
膜的活性, 最终导致细胞因氧化胁迫而受到伤麻将怎么抓牌顺序图 害。植
物体中主要起作用的是抗氧化酶类, 包括抗坏血酸
过氧化物酶(APX) 、谷胱甘肽还原酶( GR) 氢酶(CAT ) 和超氧化物
歧化酶( SOD) 等, 可将O2H彻底分解为H2O 和O2, 从而解除O2H导致
的氧化胁迫。
当不同抗旱性的烟草品种遭受干旱胁迫时, GR 活性都有所升高; 对
SOD 和APX 而言, 尽管在所有的品种中其活性都升高了, 但是抗旱
品种比敏感品种升高的幅度大得多; 与此同时, 各个品种的CAT对于
对照只有轻微的上升,这表明CAT 在烟草抗氧化酶类中只起到辅助作
用。复水后CAT 和GR活性在短期内即恢复到对照水平, 而SOD 和APX
活性在较长时期内仍保持较对照高的水平[26] 。硝酸还原酶( NR)
是氧化代谢中的关键酶类, 催化硝酸盐同化途径中的第一步反应,
代谢速率快。烟草中NR 对干旱胁迫十分敏感, 即使在轻度胁迫下
受抑制的程度也明显大于其它酶类。干旱胁迫首先
引起NR 蛋白代谢的增加, 然后促进NR mRNA 的
代谢, 原有的NR 表达暂时延迟了水分胁迫诱导的
NR 活性的丧失[27] 。
NR的测定
APX的测定
CAT的测定
SOD的测定
GR的测定
膜透性的测定:
取胁迫的叶子,用蒸馏水清洗3次,然后用滤纸将种子
吸干。取干净的叶并驾齐驱的意思 子0.25 g,放入干燥的50mL锥形瓶中并加15 ml水密封浸泡24 h
以上,用DDS一11A型电导率仪测定电导率(E1),然后在80℃下水浴30min,冷却
并振荡30min后测定电导率(E2),细胞膜相对透性(P)=(El/E2)100%。
叶绿素考虑用叶绿素仪测定
根系活力的测定(TTC法)
一、 原理
氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素,溶于水中成
为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯
甲腙,生成的三苯甲腙比较稳定,不教学策略有哪些 会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地
用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC还
原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。
所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。
二、材料、设备仪器及试剂
(一)材料:水培或砂培小麦、玉米等植物根系。
(二)仪器设备:1)分光光度计;2)分析天平(感量0.1mg);3)电子顶载天平(感
量0.1g);4)温箱;5)研钵;6)三角瓶50ml;
7)漏斗;8)量筒100ml;9)吸量管10ml;10)刻度试管10ml;11)试管架;12)
容量瓶10ml;13)药勺;14)石英砂适量;
15)烧杯10ml、1000ml。
(三)试剂:1)乙酸乙酯(分大声的英语 析纯);2)次硫酸钠(NaSO),分析纯,粉末;3)
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1%TTC溶液:准确称取TTC1.0g,溶于少量水中,定容
到100ml,用时稀释至各需要的浓度;4)磷酸缓冲液(1/15molL,pH7)。5)1molL
-1-1
硫酸:用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml,边搅拌
边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml;6)0.4molL琥珀酸:
-1
称取琥珀酸4.72g,溶于水中,定容至100ml即成
三、实验步骤
1)TTC标准曲线的制作:取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少许NaSO
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粉摇匀后立即产生红色的甲月替。再用乙酸乙酯定容至
刻度,摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容
量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲月替25g、
50g、100g、150g、200g的标准比色系列,以空白作参比,在485nm波长下
测定吸光度,绘制标准曲线。
2)称取根尖样品0.5g,放入10ml烧杯中,加入0.4%TTC溶液和磷酸缓冲液的
等量混合液10ml,把根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温
1~3h,此后加入1molL硫酸2ml,以停止反应。(与此同时做一空白实验,先加
-1
硫酸,再加根样品,其他操作同上)。
3)把根取出,吸干水分后与乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎,
以提出甲月替。红色提取液移入试管,并用少量乙酸乙酯
把残渣洗涤二、三次,皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在
波长485nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,
查标准曲线,即可求出四氮唑还原量。
四、结果计算
四氮唑还原强度(mgg根鲜重h)=四氮唑还原量(mg)根重(g)时间(h)
-1-1
2 结果与分析
根据各种理化指标选出抗旱性较优的品种,再继续筛选。
本文发布于:2023-04-22 00:49:17,感谢您对本站的认可!
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