BCA蛋白定量试剂盒使用说明书

更新时间:2023-04-20 06:34:09 阅读: 评论:0


2023年4月20日发(作者:安全警示牌标语)

产品使用说明书

BCA蛋白定量试剂盒

试剂盒简介

以下货号试剂盒可参照此说明书操作:建议同时参考本说明书英文原文(说明书编号TB380)。

BCA Protein Assay Kit500 / 2500 rxn 货号71285-3

BCA蛋白定量方法是基于双缩脲反应,即在碱性溶液中蛋白将Cu还原成Cu,而根据检测到的单价Cu

子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。Bicinchoninic acid是一种显色剂,可以螯合被还原的铜离子,产生

一种在562nm有强吸收的紫色复合物。NovagenBCA试剂盒可以用于测定浓度在20-2,000g/ml范围内的

蛋白的浓度,根据样品量分为标准型和微型两种形式进行测定。试剂盒提供的组分足够用于500次标准型反

应(50l蛋白样品加上1ml反应试剂)或2,500次微型测定(25l蛋白样品加上200l反应试剂,可以在96

板中进行高通量定量)。试剂盒中提供的BSA(牛血清白蛋白,2mg/ml)为用户制作标准浓度曲线提供了便

利。NovagenBCA试剂盒准确度高,兼容性好,能与各种经典绕口令大全 化学试剂和表面活性剂兼容,亲尝汤药 可以方便地配合默

NovagenBugBusterPopCultureCytoBuster™Reportasol™Inct PopCulture抽提蛋白的细胞

裂解试剂一起使用。有些化学成分,例如螯合剂,强酸、强碱、还原剂等,可能会干扰BCA法采用的还原及

螯合定量过程,详细情况请看说明书后附列表。

试剂盒提供的组分

500ml BCA反应液(0.1M NaOH缓冲的bicinchoninic acid,碳酸钠,酒石酸钠,碳酸氢钠,pH11.25

15ml 4% 硫酸铜

31ml BSA标准品(2mg/ml

2+ 1+

储存

室温存放。

相关配套产品

可以与默克Novagen各种蛋白抽提、纯化试剂盒配套使用。

BCA蛋白定量分析

制备BSA浓度标准曲线

下表是制备各稀释梯度的BSA标准液的方法。每个标准液都需要使用一个新的试管。为了尽量保证定量的准

确性,建议采用与蛋白样品一样的缓冲液来稀释、配制BSA标准液。如果缓冲液中有干扰BCA法的成分,建

议用去离子水替代样品的缓冲液,用以配制BSA浓度梯度标准液做标准曲线。

制备浓度梯度BSA标准液

试管编号 BSA的体积 稀释液的体积 BSA的终浓度

1 250ul 1000ug/ml

2mg/ml溶液中取250ul

2 250ul500ug/ml

从管1中取250ul

3 250ul250ug/ml

从管2中取250ul

4 300ul125ug/ml

从管3中取300ul

5 400ul25ug/ml

从管4中取100ul

6 400ul0ug/ml

0

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加强型检测的BSA浓度梯度标准液的制备

试管编号 BSA的体积 稀释液的体积 BSA的终浓度

1 700ul 250ug/ml

2mg/ml溶液中取100ul

2 400ul125ug/ml

从管1中取400ul

3 450ul50ug/ml

从管2中取300ul

4 200ul25ug/ml

从管3中取200ul

5 400ul5ug/ml

从管4中取100ul

6 400ul0ug/ml

0

BCA蛋白定量的工作液的制备

下表给出了BCA工作液的制备建议。工作液是以50份的BCA反应液与14%硫酸铜混合而成。

注意:标准型测定的工作液的体积是每反应;这对于小吸光杯()足够了,如果采用较大的

BCA1ml0.7ml

吸光杯,则需要以上的工作液。

3mlBCA

BCA工作液的制备

每个样品 20

标准型定量

1ml20ml

BCA溶液

20ul400ul

4%硫酸铜

微型定量

4ml200ul

BCA溶液

4ul80ul

4%硫酸铜

定量的操作流程

以下提供了2种定量操作:标准型定量需要的蛋白样品较多(50ul),这种情况下BCA工作液与蛋白样品的

体积比是20:1,干扰定量的物质的影响会较小;微型定量需要的蛋白样品量较少(25ul),非常适合96孔板

式的高通量操作。此种情况下BCA工作液与蛋白样品的体积比是8:1,干扰定量的物质的影响相对会较大。

标准定量操作

1. 吸取50ul标样或样品到标记好的试管中。

2. 加入1ml BCA工作液。轻柔涡旋混描写景物 匀。

注意:如果吸光杯测量时要求的溶液体积较大,反应体系体积可能需要增加到(即工作液加

3.15ml3ml BCA

150l

标样或样品)。

3. 标准检测:加强型检测:37C孵育30min或室温放置2–16h。加强型检测60C孵育15min

标准检测加强型检测

4. 将试管冷却至室温。

注意:虽然在冷却至室温的过程中显示反应仍在继续,如果内进行读数蛋白浓度也不会产生误差。

10min

5. 在一个干净的吸光杯中加入杏仁的功效与作用禁忌 1ml水,在波长562nm调零。

6. 将待测液加入干净的吸光杯。

7. 10min内测定并记茶疗 录所有反应液的吸光值(A)。

562

8. 校正的吸光值是将各标样和试样的读数减去空白样吸光值。

9. 结合已知的BSA标样的量和校正过的吸光值画出标准曲线。

10. 参照标准曲线,根据各蛋白试样的校正吸光值,在标准曲线的线性范围内读出各样品的蛋白浓度。

11. 根据样品体积和稀释度计算原来样品中的蛋白量。

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微型定量操作

微型定量操作

1. 吸取25ul标样或样品分别加入到96孔板的各孔中。

2. 每孔加入200ulBCA工作液。摇晃混匀30s,盖住各样品孔。

3. 标准检测:加强型检测:37C孵育30min或室温放置2–16h。加强型检测60C孵育人生感悟说说 15min

标准检测加强型检测

4. 冷却至室温。

5. 562nm吸光值。

注意:如果光度计没有配备滤波片,波长在范围的都可以使用。

562nm540–590nm

6. 校正的吸光值是将各标样和试样的读数减去空白样吸光值。

7. 比照已知BSA量制作的标准曲线读取蛋白浓度。

注意:如果机器附带提供标准曲线软件可以帮助获得最精确的结果。

8. 参照标准曲线,根据各蛋白试样的校正吸光值,在标准曲线的线性范围内读出各样品的蛋白浓度。

9.

根据样品体积和稀释度计算原来样品中的蛋白量。

常见问题及改善建议

现象 可能的原因 改善建议

所有反应中白血病病因 都没有颜色产生 样品中含有铜螯合剂 增加BCA工作液的铜离子浓度(例如可用

缓冲液中含有硫醇 可对样品做透析或稀释处理

缓冲液中含有还原剂 可对样品做透析或稀释处理

缓冲液中含有生物胺(例

如儿茶酚胺类物质)

波长设定不对

样品处于较强的酸性或碱

性缓冲液中

样品中含有脂类或脂蛋白

蛋白浓度过高 稀释样品

所有反应(包括空白对照)

都呈现深紫色

可对样品做透析、除盐或稀释处理

BCA溶液与4% CuSO50 : 2配制)

4

可对样品做透析或稀释处理

562nm测吸光值;可以在540-590nm

围测,但是灵敏度会降低

可对样品做透析、除盐或稀释处理

样品中加入终浓度为2%SDS以减少脂

质的影响 吸光值高于预期

空白对照正常,但标准样和

试样吸光值都远远低于预期

试剂兼容性

不兼容试剂或物质

以下试剂或物质浓度很低时也会干扰BCA法进行定量,应该在样品中尽量避免出现。如果不能避免这些干

扰成分,应选用Non-Interfering Protein Assay Kit (货号488250)以准确定量。

这个表并不全面,还有

一些试剂和物质可能干扰定量未被列出。

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可兼容试剂

下表中列出了与BCA蛋白定量方法兼容的试剂或物质种类及其不干扰定

量的最大浓度数值。这个表并不全面,还有一些试剂和物质会或不会干

扰定量未被列出。

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