管生

青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长和淋巴管生成的影响(一)

作者：郭燕，王俊，章必成，陈正堂，高建飞，赵勇

【关键词】青蒿素；癌,Lewis肺；淋巴管生成；血管内皮生长因子

EffectofartemisininonmetastatictumorgrowthandlymphangiogenesisinmicebearingLewislungcarci

noma

【Abstract】AIM：

ToexploretheeffectofantimalarialartemisininonLewislungcarcimoma(LLC)growthandtumorlymph军训征文 a

S：

ThemodelsofLLCinC57BL/

micewereorallyadministeredwithartemisininat50mg/kgbodyweight,once2dfor2weeks,tumorswer

resacrificed30dfollowingtumorcellinjection,andLewis

umorsandlungswereprocesdforimmunohist

ochemicalanalysisforlymphangiogenesisusingVEGFR3andLYVE1stainingorformicrometastasisusing

ticmicrovesldensity(LMVD)wavaluatedbyLYVE1positivelymphaticveslcou

rmore,S：

LMVD,wetweightoflungsandnumberoflungmetastasisinartemisinintreatedgroupweresignificantlyl

owerascomparedwithcontrolgroup(P0.05).Howevertherewasnotstatisticallysignificantdifferencein

tumorgrowthbetweenartemisinintreatedmiceandcontrolmice(P>0.05).Inaddition,artemisinintreat

edmicelivedsignificantlylongerthanthecontrolmicedid(P0.01).CONCLUSION：

Antimalarialartemisinineffectivelyinhibitsthelymphangiogenesisandlungmetastasis,andenhancest

hesurvivalofmicebearingLLC.

【Keywords】

artemisinin;carcinoma,Lewislung;lymphangiogenesis;vascularendothelialgrouthfactorc

【摘要】目的：探讨抗疟药青蒿素对Lewis肺癌生长和淋巴管生成的作用.方法：通过接种（sc）

Lewis肺癌细胞建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，灌胃给予50mg/kg的青蒿素，1

次/2d，浪人天涯 连续给药2wk；游标卡尺观察给药后肿瘤体积变化.接种后第30d处死动物，收集肿

瘤组织和双肺组织，并称质量.免疫组化检测瘤内和瘤周VEGFR3和LYVE1表达，计数LYVE1

阳性淋巴管并计算微淋巴管密度，HE染色肺组织计数肺转移结节数，观察荷瘤小鼠的存活

率.结果：与对照组比较，青蒿素组瘤内LMVD，肺湿重，肺转移发生率和肺转移结节数均较

低（P0.05）；青蒿素治疗组与对照组移植瘤生长没有明显差异（P>0.05）；青蒿素治疗组小

鼠存活率与对照组比较明显增加（P0.01）.结论：青蒿素可有效抑制Lewis肺癌淋巴管生成

和肺转移，并提高小鼠存活率.【关键词】青蒿素；癌，Lewis肺；淋巴管生成；血管内皮生

长因子C

0引言

淋巴结转移是多种肿瘤转移的重要途径，也是肿瘤预后的重要指标.近年研究显示，肿瘤可

以诱导淋巴管生成（lymphangiogenesis），并促进肿瘤细胞通过新生的淋巴管向区域淋巴结

转移.目前，多种淋巴管内皮特异性标记物的发现促进了人们对肿瘤淋巴管功能的认识，因

此寻找可以抑制淋巴管生成的药物和方法已经成为抗肿瘤转移研究领域的热点〔1〕.青蒿素

（artemisinin）是1972年由我国科研人员从中药青蒿中分离得到的，具有抗疟作用的单体

成分，现在临床上主要用于治疗耐药的恶性疟疾.多项研究表明，青蒿素及其衍生物对多种

肿瘤的生长具有抑制作用，并显示出较强的抗血管生成活性〔2〕.然而，青蒿素是否可以抑

制淋巴管生成还不清楚.我们探讨了青蒿素对小鼠Lewis肺癌生长、淋巴管生成和肺转移的影

响.1材料和方法

1.1材料健康C57BL/6小鼠50只，雌性，4～6周龄，体质量18.1～20.3g，由第三军医大学

大坪医院动物实验中心提供.小鼠Lewis肺癌细胞株购于美国典型菌株保藏中心（ATCC），使

用DMEM（含10mL/L灭活胎牛血清、100U/mL青、链霉素）培养基，置于37℃，50mL/LCO2

孵箱中培养.DMEM、胎牛血清购于美国Hyclone公司.胰蛋白酶，美国BD公司.青蒿素购自重

庆市酉阳县武陵山制药有限公司，研磨后用5g/L的羧甲基纤维素钠配成悬浮液.兔抗小鼠

VEGFR3,LYVE1多克隆抗体购买自美国SantaCruzBiotechnology公司.免疫组化试剂盒、DAB显

色试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司.收集对数生长期的细胞，胰酶消化后，1000r/min

离心10min，PBS洗涤，无血清的DMEM制成细胞悬液，细胞浓度达到5106.随机选取6

周龄的C57BL/6小鼠，在背部皮肤下接种Lewis肺癌细胞，每只0.1mL.1.2方法将20只小鼠

随机分为对照组和青蒿素治疗组，每组10只，青蒿素治疗组在肿瘤移植后2d即灌胃给予

50mg/kg青蒿素0.4mL，1次/2d，连续给药2wk；对照组灌胃相同体积的羧甲基纤维素钠悬

液.每2～3d用游标卡尺测量肿瘤最大长径（a）和与之垂直的宽径（b），并计算肿瘤体积：

V＝0.52ab2.移植后30d脱臼处死小鼠，剥离肿瘤组织，取出肺组织，称取瘤体和肺质量.肺

组织用4洗碗英文 0g/L甲醛固定24h，石腊包埋，切片，常规HE染色，计算光镜下的平均结节数.另

取30只小鼠随机分为对照组和青蒿化学计算公式 素治疗组，每组15只，观察生存期.

肿瘤组织切片用二甲苯脱腊，梯度酒精水化，30mL/LH2O2室温封闭10min，98℃微波热修

复抗原染色步骤如下：先用20mL/L正常山羊血清封闭30min，甩去不洗，随后

滴加兔抗小鼠VEGFR3及LYVE1（1∶500），4℃过夜，PBS洗涤，滴加生物素化的羊抗兔IgG

（1∶100），37℃孵育30min，PBS洗涤，加入SABC，37℃孵育30min，DAB显色，梯度乙

醇脱水，二甲苯透明，苏木素衬染，中性树胶封片.光镜下观察微淋巴管密度

（lymphaticmicrovesldensity,LMVD）并计数，参考Beasley等的方法〔3〕，即先在低倍数下

（100）观察切片，寻找肿瘤内染成棕褐色单个内皮细胞或内皮细胞簇，作为一个微淋巴管，

含有肌层的细胞不以计数，每个标本在高倍镜下（400）随机计数10个视野，取平均数作

为该LMVD值.

统计学处理：计量资料用xs表示，采用SPSS13.0统计软件包进行分析.两率的比较用Fisher

确切概率法，均数比较用t检验，生存率估计用比赛总结 KaplanMeier法，并用logrank检验，P0.05

表示差异具有统计学意义.2结果

2.1Lewis肺癌移植瘤的生长小鼠接种Lewi学生壁纸 s肺癌细胞后8d，在青蒿素治疗组和对照组小鼠背

侧皮下均有肉眼可见的肿瘤病灶.接种后15d和20d肿瘤生长在两组之间没有统计学差异

（P>0.05，图1）.30d脱臼处死小鼠，称量肿瘤重量，发现治疗组和对照组肿瘤也无显著差

异(P>0.05，表1）.

图1青蒿素治疗肿瘤生长动态变化略

表1青蒿素对自发性Lewis肺癌生长和肺转移的影响(略)