2023年4月18日发(作者：普通心理学pdf)酶标仪是什么？
用来做酶联免疫反应的专用仪器。
本质上是一台光电比色计。
按照用途可以分为光吸收酶标仪和多功能酶标仪。
光吸收酶标仪，只有光吸收模块，所以只能做光吸收实验，核酸蛋白定量，酶学
分析，ELISA，细胞分析。
主要型号：F50，SUNRISE。区别，通道数不同。F50为8通道，SUNRISE为12通
道，包括一个参比通道。光源不同，F50为LED冷光源，SUNRISE为卤素灯热光
源。波长范围不同，F50为400～750，SUNRISE为340～750，并且，可配温控模
块。
另外，SUNRISE12个通道，检测更快。有1个参比通道，可以开机可以自动校准
波长。可配温控模块，温控还是比较好的。不用配电脑，集成有触控面板，内置
Windows ce的系统。
F50体积小巧，检测准确，免费升级，免维护，不用换灯，卤素灯最多2年就需
要更换，不用预热，使用方便。
两款都是经典的光吸收酶标仪。相当的皮实，耐用，而且也够准确。
多功能酶标仪
除了光吸收模块，还有温控，气体模块，进样器，荧光模块，发光模块，震荡模
块。
所以，波长范围200~1000全波长。还会看到一个参数：OD范围：0～4。
在酶标仪上，测量光吸收量用OD表示样品的吸光度。典型应用，核酸定量，因
为核酸在260有特征吸收。蛋白在280有清喉咽合剂
特征吸收，故可以定量蛋白。而，两者
的比值，可以反应样品核酸的纯度。
DNA或RNA的浓度
OD260=1.0相当于
• 50 g/ml双链DNA(dsDNA)
• 40 g/ml单链DNA/RNA
• 20 g/ml寡核苷酸(Oligos)
• DNA或RNA的纯度
• DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8
• RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0
蛋白质定量—最常用的两种方法
y Bradford法—考马斯亮蓝染色法
考马斯亮蓝G-250
和蛋白结合
形成蓝色化合物（在595 nm处有最大吸收峰）
BCA法
蛋白质的酞胺键
在碱性条件下和Cu反应
2+
生成Cu
+
与BCA结合
形成紫色复合物（在562 nm处有最大吸收峰）
因为特征吸收波长的原因，F50，SUNRISE不能做核酸和蛋白定量。，所以老师如
果做核酸和蛋白的话，需要用多功能酶标仪。另外，参数上写230的吸收，和320
的吸收，这是为了去除空白，除了核酸蛋白，其他有机物在230有吸收，而无机
物在320处有吸收。所以为了让老师更直观的看到有没有杂质，吸收图谱就很有
必要，所以在SPARK10M上，就配置有吸收图谱。这个在NANODROPE上也有，它
也有图谱。所以买了这个，就不用热电了。另外酶标仪在测定核酸蛋白的时候，
比热电更高效，热点的有几个型号，最低配的一次测一个，最好的不知道，好像
是48个，因为也是一排8个往上增加的。但是，不知道为什么，热电的一排间
距设计的，刚好和排枪不同，所以，还是要一个样一个样的加。所以也就失去了
意义。因为测量体系也就2ul，几秒钟就蒸发了，严重了样品，最少也会影
响浓度。而酶标仪，配上NANOQUANT检测板，一次可测16个最多。而且板子培
优适配器，就是一个有机玻璃板子。检测板上有四个孔位，刚好和定位板适配，
定位板上的孔和排枪适配，所以加样特产方便快捷。
现在在卖的多功能
M200,F200,F500,M1000
以及新的SPARK系列，10M,20M
下面我以10m作为例子，讲一下多功能酶标仪。
说到帝肯酶标仪，不得不说他们做了第一个四光栅光路，光栅是用来去除杂光的，
原理类似棱镜的分光。样品前2光栅，后2光栅，组成四光栅。命名为：HSM光
吸收高速光栅。这里看一下M1000彩页，里面有4光栅示意图。前面两个弧形的
就是光栅。所以，样品前2个，后面两个。顺利得出，化学发光只能有两光栅。
因为化学发光用不到激发光路。针对10M，由氙灯发光，用氙灯可以保证有足够
的能量，和波长范围。之后通过光栅，之间用光纤传导，导入到样品的上方，检
测器在板子下方。它的光吸收模块有两套光路，一个是垂直光路，用于酶标板检
测，一个是水平光路，用于比色杯测量。单孔扫描：200~1000，可以1NM步进，
全波长扫描5S就可以完成，可以提高实验速度。
针对光栅，波长的准确性，是重要参数。目前TECAN最好的光栅是Infinite系
列酶标仪，可以做到0.5nm，之后是spark系列，0.8nm。而其他的，大多在2nm。
重要性体现在：对于DNA样品，1nm检测波长的漂移将带来10%的读数误差，2nm
带来23%的误差，将导致实验结果的不稳定。
酶标仪现在的光路，只要有两种，一个是滤光片光路，一个是光栅光路，光程是
一样的，区别在于把滤光片换成光栅。光栅光路的有点：波长可以任意选择，全
波长扫描，而滤光片只可以选择特定的波长。故，滤光片的灵敏度高，但是会需
要特定滤光片，比如偏振片，灰度片。位于光源和样品间的光栅或滤光片用于获
得激发用的单色光。位于样品和检测器间的光栅或滤光片是为了滤除激发光和杂
质的非特异性信号。
荧光：
目前国际上研究分子间相互作用广泛应用的方法：
y 荧光偏振 - FP
y 荧光共振能量转移 - FRET
y 时间分辨荧光 - TRF
y TR-FRET
都用于研究分子间相互作用，用于筛选，比如看研发的新药是否会和靶点结合。
后来，tecan结合了两个光路的有点，创造性的开发出了融合光路，也就是说滤
光片和光栅可以根据实验需求自由组合，这样便可以兼顾两者的有点。这里为了
便于理解，对比一下伯腾的酶标仪，他只是简单地硬件堆积，只能2选一，要么
光栅，要么滤光片，而机器也是那么大，就造成它的滤光片数量特别少，只有2
组，所以滤光片光路的可用波长是在有限，限制了设备的应用。另外，说明一下
各个光路的典型应用组合：滤光片（F），光栅（M），
M/M：常规荧光染料、探针实验、细胞实验
M/F： 远红外荧光染料，TR-FRET等，激发波长扫描
F/M： 发射波长扫描
F/F： 高通量筛选，如：FP/TR-FRET
这个可以跟老师讲一下，说明我们这个使用实际用处的，不失为了堆参数，也可
以显示我们的专业。现在的销售，一定要向专业发展和靠拢，慢慢的称谓老师的
实验顾问，帮老师解决问题，这样，老师会觉得你不是为了销售而销售，是为了
帮助他。而是也是，我们找他，是过去帮他的，没有我们，他怎么挑选设备，他
怎么得到业界的最新的实验方法。他们也喜欢了解前沿信息，而我们就是他们的
渠道。所以，针对销售，先做人，后做事。
扯远了。
上面的光路我们提到了垂直光路，和光纤，SPARK系列还针对应用，开发了z轴
聚焦。就是光纤头可以上下移动。用来靠近样品，避免测这个空的时候，旁边孔
的光进去，造成干扰。
我们看参数的时候，会发现有个顶部、底部，这里说一下，顶部测量用于测量光
吸收，荧光，化学发光。底部用于测量细胞，也就是说细胞分析用的是底读功能，
因为细胞会沉淀。
参数里面化学发光里面还有辉光和闪光，先说一下化学发光。生物发光现象很多，
都是由ATP反应发出的。所以会看到参数里面有ATP字样。用于研究报告基因分
析，可以简单地理解为基因表达。这里还涉及两个东西要说明。一个是滤光片。
化学发光因为强度的原因，不能太强，所以这时候会用到灰度滤光片，就是滤光
片的两端，有设定好的OD吸光值得的滤光片，组成OD1-3的灰度滤光片，用于
减弱光的强度。
另一个是进样器。大家先说说什时候酶标仪需要配进样器，为什么。
化学发光分为两种，一种是闪光，一种是辉光。举个极端的例子，一个老师要测
量一个样品，而这个发光是闪光，加入试剂立即发光，2秒就没了，老师都还没
有来得及吧板子放进去，就没了，还怎么测。这个时候就用上了进样器。
另外就是活细胞实验用，比如钙离子通道实验。
还有一个要说的应用，荧光偏振：FP
荧光偏振(FP)
溶液中的荧光分子在受到偏振光照射时，可吸收并释放出相应的偏振荧光，
如果在激发时荧光物质处于静止状态，发射光将保持原有激发光的偏振性，如果
其处于运动状态，发射光电偏振偏振平面将不同于原有激发光的偏振特性，这就
是荧光偏振现象，荧光分子与其它因子的相互作用，例如相互结合或排斥；其所
处环境的性质，例如溶液的粘度、温度等，这些因素都有可能对这个荧光因子受
激发后发出的发射光的发射平面产生影响。因此以荧光偏振为基础发展的技术可
用来研究生命科学中分子之间的相互作用，如受体配体结合分析，DNA－蛋白质
结合分析，SNP分析，酶活性分析。
荧光偏振分析所需的样品量少，灵敏度高，可达亚纳摩尔级范围，重复性好，
操作简便，也更为安全可靠，不会在实验过程中生成有害的放射性废物，此外荧
光偏振是真正均相的，允许实时检测（动力学检测），对于浓度变化不敏感，是
均相检测形式（中间不含洗涤步骤）的最佳解决方案。
神采奕奕造句
目前市场上多款酶标仪都可以用来做荧光偏振检测，Invitrogene公司专门
利用Predictor™ hERG对多款酶标仪进行荧光偏振测试分析。
细胞分析，流程：细胞复苏、细胞计数、培养、收获、计数/活力/汇合度、种细
胞、检测。
目前为止，SPARK系列是唯一可以对悬浮细胞计数的酶标仪。针对细胞实验，有
几点需要说一下，第一个是细胞计数，用的不用标记，但也可以荧光分析，通过
特定试剂的细胞染色，可以把细胞里的一种蛋白染色，发荧光，机器读取，进行
计数。并且可以进行死活分析，因为活细胞染色是一个空心圆，而死细胞是实方可以组什么词
心
的。
Tecan针对细胞还有一次性的细胞计数片和响应的适配器。一个适配器可以配4
块计数片，一个片可以上两个样品，一次最多可以做8个样品。
• 在600nm浊度分析光吸收可用监测微孔板中细菌细胞的数量，也可用于研
究细胞毒素类药物的效果
在600nm光的散射可以和细胞数量联系在一起
细胞计数应用举例：细胞毒理实验，MTT法，MTT-黄色染料。
测试细胞死亡数量于制毒物质浓度和量的关系，这里会用到Promega CellTox试
剂，特异性结合死细胞DNA。这个任何做毒理的实验室都可以问问，比如蔬菜研
究所的毒理室。
Tecan有细胞培养用的气体控制模块，机器后面有两个气孔，分别接氧气还二氧
化碳，可以根据实验需求，程序设定气体浓度，也可以实施设定。这里有一点说
明一下，参数里面写到了一个氧气浓度的可控范围，tecan的是0.1起，其他的
设备都是1%起，0.2% O2能诱导缺氧特异蛋白的表达，1%以上的O2浓度则不能
血管内皮生长因子VEGF。瘤体组织VEGF表达水平与其微血管密度及恶性程度成
正相关，并明显高于非肿瘤组织。这表明VEGF可能通过促进血管生成等方式促
进肿瘤生成，尤其在高度血管化肿瘤中。
HIF-1普遍存在于人和哺乳动物细胞内，常氧下(21%O2)也有表达，但合成的HIF-
1蛋白很快即被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解，只有在缺氧条件下
HIF-1才可稳定表达。这些基因表达后参与，如红细胞生成，血管形成，核苷、
氨基酸、糖的能量代谢，细胞存活、凋亡和活动以及药物抵抗等生物学效应，以
维持组织、细胞在缺氧条件下内环境稳定，以适应缺氧。同时HIF一1及其诱导
表达的基因还在生理性缺氧如干细胞微环境、胎盘发育、胚胎发育过程中组织细
胞分化，以及多种病理情况如肿瘤的发展、转移中发挥着重要作用。
补充：对于哺乳动物细胞，一般需要维持CO2 5%左右，与培养基中的缓冲盐作
用，维持pH值。降低O2浓度可以诱导细胞缺氧反应，对于研究缺血性疾病、实
体肿瘤和细胞代谢有重要意义。
CO2：
• 0.04-10% vol.
• 稳定medium pH
• 模拟体内生理环境
O2：
• 0.1-21% vol.
• 模拟生理环境：血液=16% O2
• 缺血性疾病研究：氧休克（再灌注损伤），心血管疾病（中风、心肌梗塞
等）
• 肿瘤组织研究：肿瘤在缺氧状态下的快速生长、靶向治疗
• 细胞代谢：线粒体损伤
Tecan有一个湿度控制盒，也用于细胞实验。酶标仪做细胞实验，用的是酶标板，
敞口的。二一个细胞实验，流程很长，几个小时很随意，所以，随着时间，细胞
的培养体系会蒸发，更别说仪器内部的发热，会促进液体的蒸发，这回导致测量
的不准确，极端情况下细胞，测不到数据，实验失败。二湿度控制盒，就是
为了解决这个问题发明的。是一个钢性的盒子，盒子边缘有两个凹槽，每个凹槽
可以最多加6ml水，最多共12ml，用来保证细胞生长环境的稳定。既然是盒子，
就一定有盖子，这就引出了tecan酶标仪的另一个功能：自动开盖。
需要测量的时候，机器内部有电磁铁，把盖子吸起来，测过之后，再盖上。在减
少液体挥发的同时，实现了无人值守的长时间动态监测。电脑设定好程序即可完
全自动运行，并且，SPARK配有远程控制软件，任意联网的Windows系统设备都
可以随时访问，查看进展和状态。
参数里面还有震荡形式的参数，也是为了细胞实验，主要作用是摇匀。
总结一下：SPARK 10M，最新的多功能酶标仪，HSM高速光栅，荧光实验可以两全
其美的融合光路，化学发光扫描，细胞计数、汇合度、活性分析、细胞孵育实验
的环境控制，自动开盖，带有涡旋加热功能的加样器。充分满足任何实验的需求。
认证大于参数
在保证检测可靠的基础上，不同仪器的下一个差异就体现在检测的灵奶妈符文
敏度上面，
这时人们关心的就是仪器能够检测到多弱的信号。 灵敏度涉及了整个光路系
统的设计和选料，很难说某一河畔的意思
个部件会起决定性作用。但是有一点，在各种单功
能检测项目中，光吸收检测用非放大型的光电二极管、荧光检测用光电倍增管、
发光检测用专门设计的单光子计数光电倍增管，这三种不同的检测器是各自检测
领域的优先选择。 各单项检测的最优结果都是用相应检测器完成的。当然也有
的仪器出于成本等考虑，用一个检测器兼容多种检测模式，这在一定程度上也能
完成实验需求，但是在性能上也会有所牺牲折中，无法实现各项检测都达到最优
化。
关于灵敏度的定义和检测标准，每个厂家都有各自的描述，都会说自己是怎样怎
样好，很难有一个直观的客观比较。因此，某些试剂厂家就站了出来，对某些仪
器的检测性能提供一个第三方的认证。
比较常见的是发光检测领域里面的Promega公司DLReady认证，荧光检测领域的
Invitrogen公司的LanthaScreen系列认证、Cisbio公司的HTRF认证、BellBrook
实验室的Transcreener认证等等。这些认证主要是针对公司提供的某一类型的
要求较高的试剂盒，涵盖了对检测仪器的各种性能要求，包括：检测方法是否能
用，灵敏度、线性范围、孔间干扰等是否满足要求等等。
如果需要做相关的实验，例如做Lucifera发光检测的就看看仪器是否有
DLReady认证、做TR-FRET的就看看HTRF认证、做FP就看看Transcreener认
证，如果机器拥有相关的认证，就可以说明该机器在一定程度上能够较好地满足
类似检测的各种需求，远比单单比较一个灵敏度参数更能说明问题。因为一个实
验能否做好并不是单单一个灵敏度就能表征的。
需要特别注意的是，LanthaScreen是一个系列的认证，涵盖了FI、FRET、TRF、
FP等多个子项目，不同仪器所通过的子项目是不一样的，需要上Invitrogen网
站仔细查询核对。
光栅型的仪器由于新技术近几年才逐渐兴起，受限于技术研发和仪器成本，同一
个价格范围内的灵敏度等指标会略差于发展成熟的滤光片机器。所以，在中档多
功能酶标仪领域，拿到了各种认证的光栅型仪器并不多见。而作为新一代光栅型
酶标仪的代表作，TECAN M1000已经拿到了全部上述四种认证，而且在灵敏度
等单项性能上也已经超越了不少的中高端滤片型酶标仪。
目前国内许多计生站系统开了酶免检测项目，如：乙肝五项、爱滋病检测、优生
优育浪费的近义词
系列检测、激素检测等
