2023年4月18日发(作者：改革开放以来的成就)大蒜细胞SOD酶的提取分离与活性测定
原理
超氧化物岐化酶(Superoxide dismuta，简称 SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、
Zn、Mn、Fe的金属类酶。它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内
多余的超氧阴伊朗国家队
离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。离子(0)是人体
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氧代谢产物，它在体内过量积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超
氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。由于SOD能专一消除超氧阴
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离子(O)而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，
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并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。
SOD的活力测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化
学法应用最普遍，化学法的原理主要是练声音阶
利用有些化合物在自氧化过程中会产生有
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色中间物和O，利用SOD分解而间接推算酶活力。在化学方法中，最常用的
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有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光
化学扩增法，Cyte还原法等。其中改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。
在一般情况下，SOD酶活性测定只能应用间接活性测定法。本实验采用邻苯三
酚自氧化方法。邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O，生成带色
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的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时
间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在
时，由于它能催化O与H结合生成O和HO，从而阻止了中间产物的积累，因
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此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
酶活力单位定义：在25℃恒温条件下，每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚
自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。
试剂和器材
大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液（3；5v/v)、
邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫
外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL
3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根。
方法
1．SOD提取
称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞，加入15mL的PH7.8 0.05mol/L
的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，
得上清液(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录)。
2．除杂蛋白
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，
得粗酶液。（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
3．SOD酶的沉淀分离
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得
到SOD酶沉淀。将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。6000rpm离
心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL备用，其余量取体积。
4．粗酶液活性测定
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，
加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸
光值。
试剂/（mL） 空白管 对照管OD 提取液OD 粗酶液OD 酶液OD
PH8.3缓冲液 3 3 3 3 3
SOD提取液 0 0 0.1 0.1 0.1
蒸馏水 2 1.8 1.7 1.7 1.7
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室温放置20min
邻苯三酚 0 0.2 0.2 0.2 0.2
5．溶液中可溶性蛋白含量测定
分别从1mL备尽管的英文
用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释，
260nm/280nm测定吸光值，按公式计算蛋白质浓度。
提取液稀释：50
粗酶液稀释：20
酶液稀释：10
实验结果
提取液 粗酶液 酶液
总体积（ml）
提取液 粗酶液 酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式 蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A－ 0.74A) 稀释倍数
蛋白质浓度
（mg/ml）
对照管（OD） 提取液（OD） 粗酶液（OD） 酶液（OD）
420nm大树的英语
吸光值
数据处理
1．酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD-OD）5/0.1
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粗酶液活力单位：=2（OD-OD）5/0.1
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酶液活力单位：=2（OD-OD）5/0.1
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2．总活力
提取液总活力U=活力单位总体积
粗酶液总活力=活力单位总体积
1222
280260
酶液总活力=活力单位总体积
3．比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度
粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度
4．纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力
酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力
5．回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力春天用英语怎么说
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力
实验结果误差分析
1．研磨和离心大概还不够充分。
2．由于测量仪器的精密度引起的误差。
3．在操作的过程中炖羊杂的做法
，加入邻苯三酚后未混合均匀，可能致使化学反应进行得不
很充分，这可能是造成实验数据与预期不符的一个原因；
4．在实验过程中，所需化学试剂加入的量不是很吻别英文版
准确，这可能是实验数据出现
问题的另一个原因；
