基因重排

更新时间:2023-04-16 15:41:39 阅读: 评论:0


2023年4月16日发(作者:各种汽车标志)

应用基因重排技术诊断淋巴瘤

淋巴瘤是发生于淋巴组织的恶性肿瘤。淋巴组织由T、B淋巴细胞,

组织细胞等免疫活性细胞组成。由于其组织学结构特殊,当它受到抗

原刺激时能产生不同程度的反应性增生,淋巴结正常结构紊乱,免疫

母细胞增生,核分裂相增多等假恶性图象。因此仅凭形态学观察有时

很难确责任与担当议论文 定其良、恶性。目前,一般病理科大约有70%左右的淋巴组织

增生性疾病,凭常规切片可以明确诊断,约25%的病例。但对于无表

面标记的早期未成熟细胞,或失去表面标记的异常细胞却无能为力。

对反应性增生细胞成分较多的病例,瘤细胞即使有免疫表型也可能被

掩盖。相反,由于操作等原因造成抗原扩散也可能造成假阳性。近年

发展起来的克隆性基因重排检测技术为疑难、早期或微量标本确定诊

断提供了可能,是对形态学检查和免疫组化方法的重要列文虎克 补充。安徽医

科大学第一附属医院皮肤性病科盛宇俊

淋巴细胞表面具有与抗体或抗原特异性结合能力的一类有多个亚

单位组成的糖蛋白,包括B淋巴细胞产生的IgH与IgL和T细胞产生

的TCR(T细胞受体)。两者的基因编码相似,一般由可变区(V区)、多

变区(D区)、连接区(J区)及恒定区(C区)构成。胚系状态下,这些区域

在染色体上的分部是不连续的。V、D、J、C基因孝顺父母 从5'端到3'端呈线状

排列在DNA单链上,尚有长度不等的插入序列将其分开。当淋巴细胞

发育到一定阶段,在特别的重组酶作用下,有选择地将它们连接起来

(即基因重排),才能构成一个有表达功能的基因。淋巴细胞从母细胞分

化到成熟需要经过多次基因重排。由于V、D、J区均有多个可供选择

的基因片段,使基因重排的自由度可达10

6

~1丹参功效 0

7

之多。从个体上看,

每个淋巴细胞的抗原或受体基因编码均有特定的基因重排形式,即独

有的基因编码结构。如果T或B淋巴细胞在重排的某一阶段产生单克

隆性增生即成为淋巴瘤。也就是说淋巴瘤细胞克隆性增生的结果,会

使其特殊的基因重排形式占一定的数量优势。从而成为细胞克隆性的

检测指标。这就是淋巴瘤基因诊断的理论基础。

目前,用于淋巴瘤基因重排分析的方法主要有两种。

一、多聚酶链反应扩增技术(站姿礼仪 PCR)

此方法首先由美国Mullis等设计成功(1985年)。在1989年即有

用于淋巴瘤基因疹断的报告。其原理是:选取IgH与TCR的V、D、

J、C区基因编码中20个左右的保守核苷酸序列,人工合成一对或多对

(家族基因)引物,与待测的模板DNA单链碱基互补,扩坦克英语 增目的DNA

序列片段。如果是淋巴瘤则扩增产物电泳出现单克隆性单带。而良性

增生性淋巴组织则出现弥漫涂片状,不行成单带。文献报告PCR基因

诊断淋巴瘤,具有特异、敏感、快速等优点,且可用于新鲜组织和石

蜡包埋组织。但目前用PC一个人搬两个土 R方法检测基因重排较成功的仅是IgH基因。

并且IgH基因重排的PCR检测方法也同样存在着两个明显的问题:1、

影响因素多,稳定性欠佳。2、仍有10%以上的假阴性,灵敏度有待

提高。

二、Southern印迹杂交法

该方法首先由苏格兰爱丁堡大学Southern报告(1975年)。其原

理是两条单链DNA碱基可春节的诗词 与人工合成的互补单链DNA探针相结合(一

般用同位素标记)。SouthernBlot方法应用于基因重排检测是1981年

Korsmeyer等首先进行的。将细胞DNA抽提出来,用限制性内切酶

进行酶切,胚系DNA就会产生特征性片段。但发生过基因重排的细胞

DNA的酶切位点有所面部排毒怎么做 改变,会产生有别于胚系的DNA酶切片段。转

膜后,与标记的DNA探针杂交,如有一定数量的克隆性增殖的淋巴细

胞存在(>1~5%),克隆性的基因重排条带就可显示出来。对于正常或

多克隆性的淋巴细胞增生,由于重排片段大小各异而显弥散带。

Southern分析已被应用于IgH、Igk、Ig1及各种TCR克隆性重

排的检测,并以其令人满意的灵敏度和可靠性视为基因重排检测的'金

标准'。但由于需要较大薰衣草的花语是什么 量(10mg)新鲜或冰冻组织,操作复杂、时间过

长(约两周),且需使用过射性同位素标记、易污染等缺点,仅适用于科

研而不适用于临床诊断。

DAKO公司推出的荧光素标记IgH、Igk、Ig1及各种TCR探针化

学发光试剂盒克服了上述缺点,以荧光素取代了同位素作为标记;缩

短了曝光时间(5~10分钟),但敏感性并不降低,非常有利于在临床诊

断中推广、应用。


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