实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
一、实验目的
1 学会常用器皿包扎方法
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2 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤
3 学会实验室灭菌锅的使用方法
二、常用器具和仪器
试管(test tube),德汉氏小管(Durham tube),玻璃吸管(glass pipette),吸器,微量加样器(micropipette),吸嘴(tip),培养皿(petri dish),三角瓶(erlenmeyer flask),接种铲(inoculating shovel),玻璃涂布器(glass spreader),接种环(inoculating loop),接种钩(inoculating hook),接种针(inoculating needle),小塑料离心管(Eppendorf tube),滴瓶(dropper bottle),双层瓶(double bottle),酒精灯(alcohol burner),煤气喷头(coal gas sprinkler head),试剂瓶,量筒,烧杯,温度计,石棉网,漏斗,烘箱,卧式灭菌锅,手提式灭菌锅,无菌操作台/室,过滤除菌设备,厌氧操作设备,小型发酵罐,离心机,培养箱/摇床,冷冻干燥机,蒸馏水器,超声波清洗仪,磁力搅拌器。
三、玻璃器皿的包装
饮食卫生常识1、培养皿的包装
方法一:用旧报纸密密包紧,一般以5-8套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。
方法二:将培养皿放入金属(不锈钢)筒内,干热灭菌。金属筒配有盖子,内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出,以便装取培养皿。
脏的英文
包好的培养皿
枫叶金属筒和内部的框架
塑料培养皿架
2、吸管的包装
准备好干燥的吸管,在粗头端塞入一小段棉花,以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。
将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端,与报纸成45°角,左端多余的一段覆折在尖头上,再将整根吸管卷入报纸,右端多余的报纸打个小结。
包好的吸管再用一张大报纸包好,干热灭菌。或一起装入专用吸管筒进行灭菌。
如果一次可以用完,也可以将吸管直接装入筒内。尖端向内,使用时将筒平放在桌面上,手持粗端抽出。
3、试管和三角瓶的包装
加油励志的句子试管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞,然后在外面用两层报纸包好,并用细线扎紧。若用铝箔更好,可以不用线扎。进行干热或湿热灭菌。 凤凰怎么折
4、棉塞的制作:
棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好,所以好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全适合。
微信如何添加表情包加塞时,棉塞长度的1/3在管口(瓶口)外,2/3在内。
一般用纤维长的棉花做塞子,不用脱脂棉,因为脱脂棉易吸水变湿,造成污染。
此外,液体培养中还经常用到通气塞,即8层纱布重叠而成,或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。
四、玻璃器皿的清洗
新玻璃器皿:用2 %盐酸浸泡数小时后用自来水冲洗干净;
使用过的玻璃器皿:试管、培养皿、三角瓶等:用瓶刷沾去污粉等洗涤剂刷洗,再用自来水冲洗干净;装有固体培养基的器皿应先将其刮去,然后洗涤;
玻璃吸管:使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内,以免干燥后不易清洗,再集中用自来水冲洗。
载玻片和盖玻片:滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾二甲苯擦去油,在肥皂水中煮沸5-10 min,用软布或脱脂棉擦拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡2 h,再用自来水和蒸馏水冲洗晾干后浸于95 %乙醇中备用。
注意:带菌的器皿在洗涤前用 2 %煤酚皂溶液或0.25 %新洁尔灭溶液等消毒液内浸泡24 h 或煮沸30 min,再洗涤;
带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌,然后倒去培养物,再洗涤。
五、培养基的配制与灭菌
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下:
牛肉膏3g,蛋白胨10g.NaCl 5g,琼脂15-20g,水1000 mL,pH 7.4-7.6。
1 称药品:按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放人热水中,牛肉膏便与称量纸分离,立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
2 加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入已溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
3 调PH:检测培养基的PH,若pH偏酸,可滴加1滴1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。若偏碱,则用1mol/L HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂前。应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4 过滤:液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利结果的观察。
5 分装:按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/4为宜,灭菌后垂直待凝。
6 加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通汽的作用。要使棉塞总长约3/5塞人试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。
年轻的嫂子迅雷7 包扎:加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中,则应先把试管扎成捆后,再于棉塞外包一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8 灭菌:将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放人冰箱内暂存。
9 摆斜面:灭菌后,如制斜面,则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度,使斜度的长度不超过试管总长度的1/2。
10 无菌检查:将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24-48h,无菌生长即可使用。或储存于冰箱清洁的橱内,备用。
