低危骨髓增生异常综合征免疫表型分析
孙富英;金洁萍;毛淑丹
三峡教学设计【摘 要】目的 探讨低危骨髓增生异常综合征(MDS)分型诊断及鉴别诊断的临床意义.方法 选用多种单克隆抗体,应用直接免疫荧光流式细胞术CD45/SSC设门提取骨髓的原始细胞对27例低危MDS患者进行免疫表型检测,并与对照组及再生障碍性贫血(AA)组进行比较分析.结果 与对照组、AA组比较,低危MDS患者CD34+表达明显增高(P均＜0.05),各系免疫表型多重表达异常发生率增高.结论 MDS骨髓原始细胞免疫异常表型检测有利于MDS的诊断和鉴别诊断；流式细胞术可检测到MDS免疫表型的微小变化,比细胞遗传学检测更敏感.%Objective To investigate the clinical significance of the classification, diagnosis and differential diagnosis of myelodysplastic syndromes ( MDS). Methods A panel of monoclonal antibodies and the flow cytometry using CD45/ SCC gating strategies were employed for the immunophenotyping on the bone marrow nucleated cells from 27 patients with low-risk MDS, control group and patients with AA as comparisons. Results The CD34+ expressions of low-risk MDS patients were incread. Immunophenotype of multiple protocell, matured
granulocyte, monocyte expresd abnormally and were multiple reprentation. Conclusions Detecting abnormal bone marrow myeloblasts immunophenotype of MDS patients, is conducive to MDS diagnosis, differential diagnosis; flow cytometry is able to detect small changes, more nsitive than cytogenetics.
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【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2011(051)033
【总页数】3页(P4-6)
【关键词】骨髓增生异常综合征;免疫表型分型;流式细胞术
【作 者】孙富英;金洁萍;毛淑丹
【作者单位】辽宁医学院第一附属医院,辽宁锦州121001;辽宁医学院第一附属医院,辽宁锦州121001;辽宁医学院第一附属医院,辽宁锦州121001蛇的成语
【正文语种】中 文
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数学题一年级
【中图分类】R551.3
骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干/祖细胞(CD34+)的恶性克隆性疾病，表现为骨髓原始细胞形态和数目异常、无效造血及不同程度的外周血细胞数目减少，并高风险地向急性白血病转化［1］。国内外研究证实，免疫表型分析有助于MDS的诊断及预后评估，但低危MDS患者免疫表型分析报道较少。本研究对低危MDS患者骨髓免疫表型分型诊断及鉴别诊断的临床意义进行了探讨。
1 资料与方法
1.1 临床资料 2008年3月～2010年12月我院MDS住院患者27例(MDS组)，均依据2008年WHO标准分型确诊［2］。男17例、女10例，年龄32～86岁、中位年龄58岁;其中RA型4例，RAS型4例，RCMD型16例，RAEB-1型3例。27例均为低危(IPSS评分0～1.0分)MDS患者，其中骨髓增生低下6例。另选择再生障碍性贫血(AA)患者12例(AA组)，男7例、女5例，年龄25～76岁、中位年龄41岁;对照组18例，男8例、女10例，年龄26～79岁、中位年龄47岁;其中，外周血单纯红细胞减少轻度贫血的缺铁性贫血11例，外伤截肢7例。三组性别、年龄差异无统计学意义。
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1.2 方法 检测标本均经过对方知情同意后采集，然后行骨髓涂片、流式细胞术分析及常规染色体核型分析(染色体核型分析对照组除外)。流式细胞仪为美国Beckman Coulter公司FC500MPI型，发射荧光采用488 nm激光激发。采取研究对象的骨髓液2～3 ml EDTA抗凝，对经溶血素裂解红细胞骨髓中所有有核细胞进行分析。调整细胞数至(0.5～1.0)×106/ml，分别加入抗体 HLA-DR-FITC/CD33-PE/CD34-ECD/CD117-PC5/CD45-PC7、CD10-FITC/CD56-PE/CD34-ECD/CD19-PC5/CD45-PC7、CD5-FITC/CD7-PE/CD34-ECD/CD2-PC5/CD45-PC7、HLADR-FITC/CD11b-PE/CD34-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7、CD11b-FITC/CD13-PE/CD16-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7及阴性对照，取某一抗原表达≥20%为阳性。单克隆抗体为Beckman Coulter产品。
1.3 统计学方法采用SPSS16.0软件，数据以表示，组间比较采用方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结果刘溢
2.1 MDS及各亚型、对照组、AA组之间CD34+测定结果 见表1。
表1 MDS组及各亚型、对照组、AA组CD34+测定结果(%，)注:与对照组、AA 组比较，*P ＜0.05组别 n CD34+MDS 组 27 3.50 ±0.50*RA/RAS 8 2.40 ±0.12 RCMD 16 4.50 ±0.30*RAEB-1 3 5.90 ±0.70*对照组 18 2.10 ±0.17 AA组12 0.13 ±0.02
2.2 低危MDS免疫表型分析 27例MDS患者原始细胞、成熟粒细胞、单核细胞经检测可见各系细胞免疫表型异常表达，也有多重异常表达表现。①原始细胞免疫表型异常表现为:CD34+表达比例相对或绝对增加，表达 CD11b或 CD15、CD13、CD33，或HLA-DR表达缺失;异常表达淋巴系抗原 CD7、CD56。②成熟粒细胞免疫表型异常表现为:SSC减低(细胞内颗粒减少)，粒系抗原之间表达关系异常以 CD13/CD16、CD11b/CD15 明显，CD10、CD11b、CD13、CD15、CD16抗原不同步表达，CD13或 CD33表达的缺失，出现异常CD56的表达，CD45表达减低。③单核细胞系表达异常表现为:单核细胞比例减少，CD11b、CD13、CD33、HLA-DR 表达关系异常，CD16、CD33表达缺失，异常表达CD56。27例MDS患者免疫表型特征见表2。
表227 例MDS患者免疫表型特征(例)类型 n CD34+成熟粒细胞系异常单核细胞系异常一系多重异常两系及以上异常RA/RAS 8 4 6 5 1 6 RCMD 16 13 13 12 10 15 RAEB-1 3 3 2 2 3 3
3 讨论
目前，细胞形态和细胞遗传学改变仍是MDS诊断的重要依据。但是MDS病态造血类型繁多，且缺乏特异性。染色体核型异常在MDS患者的检出率为40% ～70%［3］，在幼稚细胞数不增高的 MDS患者中伴有异常核型尚不足32%［4］，造成低危MDS患者诊断困难。为此，2006年维也纳国际工作会议将流式细胞术作为MDS的辅助诊断标准［5］。
本研究对27例低危MDS患者免疫表型分析结果显示，几乎所有MDS患者存在髓细胞分化抗原的异常表达;单一细胞群的多重表达在RCMD、RAEB-1较RA/RAS更明显;粒细胞系或单核细胞系表达异常患者占92.5%，结果与 van de Loosdrecht等［6］报道的92%病例存在粒细胞或单核细胞表达异常一致。MDS患者出现单一细胞免疫表型异常不具有特征性，因为单一细胞免疫表型异常也可见于营养不良性贫血等非MDS患者［7］。近年来，研究较多的流式积分对MDS预后的影响资料［6，8］显示，一系的多个异常表达或多系表达异常均确定为主要免疫表型异常，不同抗体组合对MDS诊断更具意义。27例低危MDS患者单一细胞群多重表达率为51.8%，而≥2个细胞亚群的表达率为88.9%。此显示流式细胞术比MDS遗传学检测阳性率33.3%(27例MDS患者9例染色体核型异常)更敏感。
随着MDS进展，CD34+细胞表达呈现增高趋势，流式细胞术检测MDS患者CD34+表达与骨髓细胞形态原始细胞数呈正相关［9］。低危组MDS患者CD34+表达在各亚型(RA/RAS、RCMD、RAEB-1)逐渐增高，此与文献［10］报道一致。尽管RA/RAS类型CD34+细胞与对照组差异无统计学意义，但低危MDS各类型与AA患者CD34+细胞表达不同仍具有鉴别诊断意义。本文24例RA/RAS、RCMD中，13例CD34+表达百分率高于正常对照组，但形态学原始细胞分类均在正常范围，提示低危组MDS早期已有MDS恶性克隆的存在。成熟粒细胞免疫表型表达的减少揭示了细胞分化障碍、凋亡增加导致外周血细胞一系或多系减少，反馈刺激骨髓异常造血干细胞增加，形成骨髓过度增生伴病态造血的低危组MDS发病机制。本结果还表明，MDS患者CD34+异常表达较形态改变更早。同时在低危MDS患者CD34+细胞有少部分表达CD7，其临床意义有待进一步探讨。
本研究发现，RA/RAS亚型见到粒细胞SSC的明显下降，但是根据 WHO分型标准 RA/RAS型MDS病态造血细胞小于粒细胞系细胞的10%，因此流式细胞术可检测到较形态学改变更早的微小变化。Lorand-Metze等［11］探讨MDS与外周血细胞减少的非克隆性疾病粒细胞SSC改变，结果发现MDS患者早幼粒细胞的SSC是减低的，并与外周血白细胞计数相关。通过CD34+细胞、早幼粒细胞和晚幼粒细胞的SSC分析能够鉴别87%的病例是否为克隆性。
季羡林的资料简介总之，应用流式细胞术进行MDS的免疫表型检测，较染色体核型分析有高度的敏感性，亦较细胞形态学检测有独特的优势。
参考文献:
【相关文献】
［1］肖冰，李建勇.骨髓增生异常综合症免疫表型特征及其临床意义［J］.白血病·淋巴瘤，2006，15(2):154-155.
［2］Swerdlow SH，Campo E，Harris NL，et al.WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues［M］.Lyon:IARC Press，2008:87-103.
［3］Steter-Strvenson M，Arthur DC，Jabbour N，et al.Diagnostic utility of flow cytometric immunopheno typing in myelodysplastic syndromes［J］.Blood，2001，98(4):979-987.
［4］Mohamedali A，Gaken J，Twine NA，et al.Prevalence and prognostic significance
of allelic imbalance by single-nucleotide polymorphism analysis in low-risk myelodysplastic syndromes［J］.Blood，2007，110(9):3365-3373.
