•研究报告•
益母草注射液对大鼠子宫缺血再灌注损伤的
保护作@ !
蔡红霞1殷红岩1朱袁君1邢宇1丁妍1丁演鹂2"
(1.湖北省十堰市太和医院，湖北十堰442000;2.湖北医药学院，湖北十堰442000)
中图分类号：8285.5文献标志码：A文章编号：1004-745X(2019)03-0410-05
d〇i：10.3969/j.issn.1004-745X.2019.03.009
【摘要】目的研究益母草注射液对子宫缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法Wictar雌性大鼠30只，取
其中20只采用线栓法结扎大鼠腹腔动脉30m in后再灌注60m in的方法建立子宫缺血再灌注损伤模型并均
分为模型组和益母草组，另10只设为对照组作为正常对照。益母草组按6mg/(kg*d)剂量腹腔注射给予
益母
草注射液，模型组和对照组腹腔注射给予生理盐水对照。治疗7d 取大鼠子组，采用
试剂盒（法）检测子宫组织高能磷酸化合物中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、磷酸腺苷(AMP)和
总腺酸(TAN) ；采用子法酸（LDH)水平；采用化法1
子宫组织中超氧化物化酶(SOD)；采用硫代巴比妥酸法检测子宫组中（MDA)水平。用垂体后叶素3组大鼠子，后分益母草注射液，3组大鼠离体子的、
频率并计算子宫活动力。结果与模型组比较，益母草组子组织中ATP、ADP、AMP、TAN和SOD明显升高，
LDH和MDA明显降低（！<0.05)；垂体后3组大鼠子，其中对照组对垂体后叶素最为
感，其次为益母草组，模型组；益母草注射液后的子宫收缩，益母草组子
、和子动高模型组(！<0.05)。结论益母草注射液组织供能并组
能、高缺血再灌注子宫对后的性并抑制子缺血再注后的化，对大
鼠子缺血-再注损伤保护作用。
【关键词】子宫缺血再灌注损伤化应激反应子宫活动力益母草注射液
Protective Effects of Motherwort on Uterine Ischemia-reperfusion Injury in Rats Cai H〇ngxia，Yin
Hongyan，Zhu Yuanjun，et al. Taihe Hospital，Hubei University of M edicine，Hubei，Shiyan 442000，China.
【Abstract】Objective: To study the protective mechanism of Leonurus Heterophyllus Injection on uterine is
chemia reperfusion injury，and to provide theoretical basis for preventing postpartum injury. Methods：30 Wistar
female rats were divided into the model group and Leonurus heterophyllus group. 20 of them were subjected to
celiac artery occlusion for 30 minutes and reperfusion for 60 minutes. The other 10 rats were ud as the control
group. Leonurus heterophyllus group was given Leonurus Heterophyllus Injection by intraperitoneal injection at a
do of 6 mg/(kg*d). The content of ATP，ADP，AMP and TAN in uterine tissues were detected by Coomassie
brilliant blue staining kit (routine method) after 7 days of treatment. The level of LDH，SOD and MDA in uterus
were detected by ion exchange chromatography，xanthine oxida and thiobarbituric acid respectively. The isolated
uterus of rats in three groups was perfud with pituitrin and then perfud with Leonurus Heterophyllus Injection.
The contraction intensity and frequency of isolated uterine smooth muscle of rats in three groups were compared
and uterine activity was calculated. Results：Compared with the model group，ATP，ADP，AMP，TAN and SOD in
the uterus of Leonurus heterophyllus group were significantly incread;LDH and MDA were significantly de
cread (P< 0.05) ；pituitrin could induce uterine contraction in the three groups，of which the control group was
the most nsitive to pituitrin，followed by Leonurus heterophyllus group and the model group. The uterine con
traction intensity， contraction frequency and uterine motility in Leonurus heterophyllus group were significantly
higher than tho in model group (P< 0.05). Conclusion：Leonurus Heterophyllus Injection can enhance tissue
energy supply and promote tissue energy metabolism， increa the nsitivity of isolated uterus to pituitrin after is-
!基金项目：湖北省科技厅自然科学基金项目（2016CFB411)
A通信作者（电子邮箱：)
chemia-reperfusion, and inhibit the oxidative stress reaction after uterine ischemia-reperfusion. It has a protective effect on uterine ischemia-reperfusion injury in rats.
【Key words】Uterus;Ischemia-reperfusion injury;Oxidative stress reaction；Uterine motility；Leonurus Hetero-phyllus Injection
机体任何组织器官在经历缺血再灌注后均会出现 不同程度的氧化应激反应并由此造成再灌注损伤，而 目前针对缺血再灌注损伤的研究大多集中在心、肝、脑、肾等重要器官[1-2]。
研究表明，在卵巢肿瘤、子宫肿瘤、引产、正常分娩 及产后等治疗过程中可能发生生殖系统缺血再灌注损 伤，且可能造成重的组织器官损伤#354]。对子
宫的 子宫 造 子宫缺血再灌注损伤的重要 ，中又以剖宫产、胎盘早期剥、流产引产、子宫 等 引的缺血再灌注损伤
重[5]。由此可见，子宫缺血再灌注损伤目前生
及生殖 中不 的，应
注 等 治，目前针对生殖系统组织器官的 缺血再灌注损伤 缺 系统的研究。研究
的的。，目前已有的 生殖 由子宫 、子宫 、子宫 缺等生造的，而子宫 可能 不生的可能，子宫在的子宫缺血再灌注损伤 能、由过、 及 等的多
[M]。本研究试图应 在心、脑、肾等重要器官缺血再灌注损伤过程中 的母草注干预治疗子宫缺血再灌注损伤模型大鼠，分析益母草注 对子宫缺血再灌注损伤的
机制，以便 述问题的方案或药物。
1材料与方法
1.1实验动物 W is ta r雌性大鼠30只，鼠龄8周，体 质（160±10)g，购广东省医学验动物中心，在十 堰市太医院生科学研究所饲养并验。大鼠质合格证为S C X K(鄂)2016-0008，实验室设施合格 为S Y X K(鄂)2016-0031。实验前适应饲养1周，在验中遵循3R，给予动物人道关怀并 动物的福利。验饲养期间由饮水，饲以标准颗粒饲 料，动物房 采光，相对湿度在50%~75%之间，温度
为22"24 #之间。
1.2试药与仪器1)仪器:BL420F生物电信号采集 系统（都泰盟）、F T-1000生物张力传感器（泰盟科 )、721型分光光度计(赛智科杭州限公司）、LC- 10T高 相色谱仪(赛智科杭州限公司）。2)药 物：母草注（制 限公司，号Z51021448)；(学试剂公司，批号060222)；肝 注 （生物学制限公司，
号H12020505)。3) ：三磷酸腺苷（A T P)、二磷酸腺苷（A D P)、磷酸腺苷（A M P)总腺嘌核苷酸(T A N)由生物
限公司提供（号：s18047，s18044，s18049)；乳酸脱氢 酶(L D H)、氧化物 （S O D)二（M D A)试购 生物 限公司（号:H0233, H0237，H0239)。
1.3造模与分组大鼠子宫缺血再灌注损伤模型建
：大鼠验前适应饲养14，前6h
水，中20只，3D注 后
大鼠 器 。，，正中（合上2 cm)
，心 ，科
大鼠 ，分 子宫。然后从大 注500 U的肝 注 0.1 m L，5 m i n后 分针 分大鼠动，总动，在分：方 0.5 cm动 ，子宫血 30 m in，后 再灌注，60 m in后关 [8]。机抽
20 只大鼠造模，后 机均分为模型组 母
组。10只 ，为 对并设为对组。
1.4干预方法 验人在预验中，按人动物
体表面积换算公式计出大鼠益母注的？
为6g/(k g-d)，预验中发现益母注
子宫 宫 、产 、体后 等相 的，验设计的 体后 灌流3组大鼠体子宫，为 察母注对子宫的，避免实验中设组过多造相互干扰，验未设 对组，只用对照组进行空白对照，以模型组为物 后的阴对。后1h始治疗：母组
6 g/(k g-d)注射益母 ，模型组对
照组 注生理盐水对，2次/d，间 8h给药1次，共给 7d。
1.5标本采集与检测1)于治疗7 d后颈椎脱臼法
死大鼠，正中剖，科轻轻将脂
肪及大网拨两侧，在 直之间“V”形
子宫，其颜色粉红，在两侧子宫顶端与卵巢相连，“V”
我不再粗心
子宫两侧汇合为阴道。确子宫后，子宫汇合
，注 要 阴道，将两侧子宫角游并即置于
装 制的4#的乐氏培养皿中。先左侧子宫组织
约20 m g，用滤纸擦拭，放入 45 m L 4 #的H E P E S
冲洗液中冲洗，后制组织匀浆，组织匀浆在高速离心机上3 000 r/m in离心15 m in后分装备检。采用
考马斯亮蓝染色试剂盒（常规法）检测子宫组织高能磷 酸化合物中ATP、ADP、AMP和TAN含量；采用黄嘌呤 氧化酶法检测子宫组织中SOD水S，采用离子交换柱 层析法检测LDH R S，采用硫代巴比妥酸法检测子宫 组织中MDA水S& 2)离体子宫S滑肌灌流：按以上方 法，取右侧子宫组织，放人自制的4 !
的乐氏液中，分离组织上的子宫圆韧带和附着的脂肪组织，剪成长 约3 =>的子宫肌&的上，
力换能器传感孔上，置 10 >L
乐氏液（pH值 7.3~7.5) ，(30±1)!，乐氏液中 入95C 〇2和5C C〇2的混
体（1~2 )，子宫处于比 i 的 ，1g，S30 min(■换液2~3)，BL420F物 采
离体子S滑肌 力和 子
力。用0.2U体 （入100!L)灌流3组 离体子宫，子 ，人100 !L(0.1%)比较3组 离体子S滑
肌的 、子宫力。4
力：以的&：以
的高（g)。：以分
的（次/min)。子宫活动力：以和频的。
1.6统计学处理应用SPSS19.0统计软件。计量资 料以（！!"），组 比较采用#检，
分的组比较采用 LSD-$检。％< 0.05 意义。
2结果
2.1 益母草注射液对子宫缺血再灌注后氧化应激反应的影响见1。模型组子宫组织中SOD降，LDH 和MDA明显升高，与照组比意义(%< 0.05)。组子宫组织中SOD明显升高，LDH 和MDA明显降，与模型组比 意义(% < 0.05)。
表1 各组子宫组织中SOD、LDH和MDA含量比较(*±")
组&LDH(U/L)SOD(!mol/L)MDA(!mol/L)对照组10181.99±29.57157.52±24.73 2.57±0.32
模型组10274.46±37.24!87.25±11.30!14.92±2.17!
组10176.25±26.85O160.72±21.89P 2.63±0.47P 与模型组比较，"％<0.05；与对照组比较，△%<0.05。下同
2.2 益母草注射液对子宫缺血再灌注后能量代谢的影响见表2。模型组子宫组织中ATP、ADP、AMP和TAN均降，与对照组比 意义(%<0.05 )。组子宫组织中ATP、ADP、AMP和TAN均明显升高，与模型组比意义
表2各组子宫组织中ATP、ADP、AMP和TAN含量比较
(nmol/L $!±")
组&ATP ADP AMP TAN
对照组1023.07±3.9411.84±2.3327.35±2.0161.72±7.05
模型组1017.25±2.53!7.95±0.87!21.29±2.46!46.25±5.49!
组1022.14±2.86P12.59±1.64P26.82±3.25P59.97±6.84P
(%< 0.05)。
2.3 益母草注射液对子宫缺血再灌注后离体子宫平
滑肌活动力的影响见表3。垂体 可引起3组 子宫 ，中照组体 敏感，
组，模型组之；模型组 体 敏感
性 ，子宫 、和子宫 力明显降，与照组比意义(％<0.05)。3
可明显增 体 引起的子宫 ，3
度、和子宫 力均明显高于模型组（％< 0.05)，与模型组比 意义(％<0.05)。
表3各组离体子宫收缩强度、收缩频率和子宫活动力比较(!±s)组&(g)(/min)子宫力(g, /min)对照组10 5.27±0.6416.32±2.7185.52±7.29
模型组10 3.86±0.32!12.07±1.85!46.75±4.71!
组10 5.03±0.48P15.13±2.42P83.65±9.24P
3讨论
唇形科植物，又名九重楼、茺蔚、云 、坤等，富含二萜类、脂肪酸类、黄酮类及 等
有效成分，临床生用或熬膏用新鲜或干燥上茎或[9-10+。因具 子宫、促进产子宫复原、抗凝、抗炎、免疫调节等作用及清热凉血、利尿消肿、血 调经之功效，临床常用治疗月经调、经闭、痛经、恶 露不尽、产止血、性炎水肿[11-12+。略备薄酒
子宫血的与 、、免疫 常、自由基过剩 关，这是 多机制作用和多因 与的复的过[13+。子宫 、期离、流产引产、宫产、子宫 检子宫 均 能 血 ，子宫造成严重 子宫的 功能。目
和 产科 引起 的重 。MDA 作 体 的脂过氧化产物，检水S的；能 体 血 脂质过氧化 ，
体组织器 [14+。LDH
组织中，以、肌和 含量多，子
宫组织和血清中也可检，子宫
的 意义[15+。SOD作 性氧自由清剂能
体 血 清自由基的能力[16]。子宫血，子宫组织中M D A R S 上
升、S O D水-下降，证实子宫缺血再灌注损伤与机体氧自由基过剩导致的氧化应激反应的参与有关[17]。有 观点认为，子宫缺血再灌注后中性粒细胞呼吸爆发和 黄嘌呤氧化酶激活等可促进氧自由基大量生成，但此 时细胞内源性自由基清除酶类如S O D活性降低，机体 清除氧自由基的能力降低，氧自由基攻击细胞膜中的 不饱和脂肪酸会 的自由基 氧化应激反应，生成 M D A为的脂过氧化，
致细胞结构及功能的破坏和损伤[18;19]。研 &与 ，子宫 中SO D升 ，L D H和M D A降低(！<0.05)，可清除氧自由基、子宫缺血再灌注后的氧化应激反应 大 子宫缺血；再灌注损伤的 。
子宫缺血再灌注损伤的过 中，除 氧化应 激反应 ，与能量 有 的关，但子宫缺血再灌注损伤过 中关 能量
的研 缺 。能量 成子宫缺血再灌注损伤的子，A T P、A M P和A D P为高
能酸化。能酸时，大量的能量会 ：，为机体 能量。中A T P是
结构和功能的 性的 ，机体能量
的重要辅酶。机体在有氧氧化 下，A T P水成
A D P和A M P时可 自由能，参与体内 、脂
、、酸及酸的，为机能活 能量。但 机体 缺血缺血再灌注后，1
和脂肪酸的有氧氧化 ，会 致A T P•成降低 低，造成能量应减少甚至中，机体的
能量仅靠的无氧酵解来，此时无氧 激活，机体将依次降解A D P、A M P、腺、次黄嘌呤等
所-能量，经过 化学反应，最终体
内生成乳酸，同时 能量供肌肉收缩。无氧
往往造成体内A T P、A D P、A M P及T A N水：的降低，并 由此 细胞 紊乱、功能 及 结构的破
坏[20]。此，改善和证能磷酸化合物A T P、A M P和 A D P的正 ，正功能、纠正缺血再灌注损伤 的能量 的。实验观
察到 子宫组织中A T P、A D P、A M P、T A N较模升，注射液可增强 能并促能量 的，改善和纠正子宫缺血再灌 注损伤 的能量 具有 意义。为
研改善和纠正子宫缺血再灌注损伤后能量
与子宫活力的关系，研 观察了 注射液对灌流垂体后叶素的离体子宫：滑肌生理特性的影响，结果现垂体后叶素可 3 大子宫收缩，
中照垂体后叶素最为敏感，其次为 ，次之；注射液可 增强垂体后叶素引
起的子宫收缩，子宫收缩强度、收缩频和子宫活动力均 ，证实 注
射液可增强 能并促 能量 、缺血
再灌注离体子宫垂体后叶素的敏感性并子宫缺
炸藕盒怎么做
血再灌注后的氧化应激反应，对大鼠子宫缺血-再灌注
损伤具有 。
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(下转第417页）
有程的。
，脊髓中P2X4R的表达，降低NF-k B、IL-1P和T N F-a水平，从而缓解大鼠
，药用 的
的。
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