文章编号：1001-8689(2021)03-0251-05
莫匹罗星软膏体外透皮吸收率的测定及质量评价
梁亚伟 王小亮 张秉华 张鹏
(陕西省食品药品监督检验研究院，西安 710065)
买房新政摘要：目的 评价莫匹罗星软膏原研制剂和5家仿制企业市售制剂体外透皮吸收及皮内滞留情况。方法 采用单室Franz 池，以KM 种小鼠背部皮作为体外透皮吸收皮肤，分别以0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)和30%乙醇0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)缓冲溶液作为亲水性和亲脂性释放液，采用HPLC 法测定不同时间点释放液中莫匹罗星的浓度，计算累积透皮量，并测定取样末点皮内滞留的莫匹罗星量。结果 不同企业生产的莫匹罗星软膏在亲水性释放液中8h 的透皮吸收百分比范围为0.01%~0.05%，皮内滞留百分比范围为0.51%~1.79%；在亲脂性释放液中8h 透皮吸收和皮内滞留百分比范围分别为0.01%~1.04%和0.69%~2.59%。结论 莫匹罗星软膏原研制剂与5家仿制制剂在体外透皮的释药趋势一致，仿制药与原研药在亲脂性释放液中透皮吸收及在两种释放液种的皮内滞留量差异较大。本研究可为莫匹罗星软膏仿制药的一致性评价提供参考依据。
关键词：莫匹罗星软膏；体外透皮吸收；皮内滞留；HPLC 法中图分类号：R978.1 文献标志码：A
Determination of percutaneous absorption rate in vitro
and quality evaluation of mupirocin ointment
Liang Ya-wei, Wang Xiao-liang, Zhang Bing-hua, and Zhang-Peng
(Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Xi'an 710065)
Abstract Objective To evaluate percutaneous absorption in vitro and intradermal retention of original mupirocin ointment and generic mupirocin ointment. Methods Franz type diffusion cells were ud for permeation studies in vitro . Excid and dorsal skins of KM mice were ud as the transdermal barrier with the 0.1mol/L sodium dihydrogen phosphate solution (pH6.3) as the hydrophilic relea solution and the mixed solution with 30% ethanol and 0.1mol/L sodium dihydrogen phosphate solution (pH6.3) as the lipophilic relea solution. The concentrations of the relea solution were determined by HPLC to investigate the cumulative permeation quantities at different times, and intradermal retention quantities were determined at the sampling end point. Results The percutaneous absorption percentage of mupirocin ointment produced by different enterpris in the hydrophilic relea solution for 8h ranged from 0.01% to 0.05%, and the intradermal retention percentage ranged from 0.51% to 1.79%. The
收稿日期：2020-12-02
作者简介：梁亚伟，女，生于1990年，硕士，研究方向：抗生素的质量分析与研究，E-mail ：
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第一作者：梁亚伟，硕士，2018年毕业于西北大学，现就职于陕西省食品药品监督检验研究院抗生素室。主要从事
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药品分析和药品检验工作；曾多次参加国家药品抽验工作和进口化学药品标准复核工作。
药物质量分析方法
莫匹罗星软膏属于已有国家标准的OTC外用制剂，主要用于革兰阳性球菌导致的疖肿、毛囊炎、脓疱病及浅表性创伤、湿疹合并感染的继发性皮肤感染[1-3]。该药物在治疗皮肤局部感染上显示了良好的效果，已作为临床首选的抗局部感染特效药。国家不良反应监测中心统计了莫匹罗星软膏近5年来的不良反应累及器官分别为：皮肤及其附件、免疫系统、全身性、泌尿系统、内分泌系统、神经系统、用药部位、血管系统及呼吸系统。对于局部外用药而言，皮肤的渗透吸收可能引起全身性或部分器官的不良反应。可见，皮肤的渗透吸收可作为外用药品安全性和疗效评价的重要指标[4]。目前，已有7家国内企业和1家香港企业在生产莫匹罗星软膏，该品种仅有1种制剂规格(2%)。本研究采用单室Franz扩散池进行体外透皮释放实验，以HPLC法进行定量分析来评价不同市售莫匹罗星软膏的透皮吸收情况[5-7]，为莫匹罗星软膏仿制药的一致性评价提供参考依据[8]。
1 仪器与试药
1.1仪器
YB-P6智能透皮试验仪(天津天光光学仪器有限公司)；LC-2030C 3D高效液相色谱仪(日本岛津)；XPE
205电子天平(Mettler)；KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；高纯水机(美国Millipore公司)。
1.2试药
莫匹罗星软膏原研制剂和5家仿制企业市售制剂为国家评价性抽验样品，莫匹罗星对照品(中国食品药品检定院，批号：130568-200501，94.2%)试剂：乙腈为色谱纯，购于Sigma-Aldrich；乙醇、氢氧化钠、磷酸二氢钠均为分析纯，购于国药集团化学试剂有限公司。
2 测定方法
2.1体外透皮渗透试验
2.1.1离体皮肤选择
KM种小鼠采购于成都达硕实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(川)2015-030，实验动物使用许可证：SYXK(陕)2018-002。
选用KM种小鼠背部皮作为离体透皮试验皮肤。使用前剥取无破损的背部皮浸于生理氯化钠溶液中约30min，取出用滤纸吸干。
2.1.2亲水性释放液的选择
以0.1mol/L磷酸二氢钠(pH6.3)的缓冲液作为释放溶液；液相色谱法测定莫匹罗星在0.1mol/L磷酸二氢钠(pH6.3)中的饱和浓度为7.39mg/mL，接收室体积为16mL时，释放溶液可溶解118.24mg的药物；当莫匹罗星软膏的给药量为0.25g时，样品中含莫匹罗星仅为5mg，用16mL释放液进行透皮吸收试验能满足漏槽条件。
2.1.3亲脂性释放液的选择
乙醇对莫匹罗星有较好的溶解性，在不损害皮肤组织结构的条件下，确定其释放液为30%乙醇0.1mol/L磷酸二氢钠(pH6.3)缓冲溶液。
2.1.4体外透皮吸收的测定
采用单室Franz扩散池进行体外透皮释放试验，装置示意图见图1。将离体透皮试验皮肤固定于扩散池一端，表皮层朝向给体室，精密称定0.25g莫匹罗星软膏，在释药面积为0.785cm2的表皮层上涂沫均匀，接收池释放液总体积为16mL，在400r/min和37±1.0℃下恒速恒温搅拌，并于2、4、6、7和8h在接受池中取样2.0mL(每次取样完成后立即补加2.0mL 释放介质)，过滤，用HPLC法进行定量分析。
2.1.5皮内滞留量的测定
percentage range of 8h percutaneous absorption and intradermal retention in the lipophilic relea solution was 0.01%~1.04% and 0.69%~2.59%, respectively. Conclusion The in vitro percutaneous relea trend of the original preparation of mupirocin ointment was consistent with that of the generic preparation of mupirocin ointment. The percutaneous absorption and intradermal retention of the original medicine and the generic medicine in the lipophilic relea solution were significantly different. This study can provide a reference for the consistency evaluation of the generic medicine of mupirocin ointment.
Key words Mupirocin ointment; Percutaneous absorption; Intradermal retention; HPLC
给体室
取样口莫匹罗星软膏均匀涂抹
离体皮肤模型
接受池
磁力搅拌子
图1单室 Franz扩散示意图
Fig. 1 schematic diagram of Franz type diffusion cells
在透皮吸收试验结束时，将离体皮肤完整取下，温生理盐水将皮肤冲洗干净，常温下晾干，再将其捣碎后加甲醇4mL ，超声提取，每次10min ，重复3次，合并提取液，经0.45μm 的微孔滤膜过滤，采用HPLC 法测定皮肤滞留量。2.2 高效液相色谱法分析
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采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1mol/L 磷酸二氢钠缓冲液(用1mol/L 氢氧化钠溶液调节pH 值至6.3)-乙腈(75:25)为流动相；检测波长为230nm ，进样量为20µL 。以标准曲计算含量。
精密称定莫匹罗星对照品10.61mg ，用0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)溶解并稀释制成每1mL 中含100µg 的溶液作为线性贮备液，再分别用0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)稀释制成0.05~20µg/mL 的线性溶液，分别精密量取上述各线性溶液20μL ，注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标绘制线性方程，得到标准曲线为Y =2.71e +004X +2.64e +002，r =0.9999，在0.05~20µg/mL 范围内线性关系良好，定量下限为50ng/mL ，检测限为25ng/mL 。2.3 结果
2.3.1 透皮吸收测定
分别取来自6个企业的莫匹罗星软膏，照
“2.1.4”项下的体外渗透试验方法，分别用亲水性释放液[0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)的缓冲溶液]和亲
脂性释放液[30%乙醇0.1mol/L 磷酸二氢钠(pH6.3)的缓冲溶液]试验，分别在2、4、6、7和8h 取释放液2.0mL ，经0.45µm 的微孔滤膜过滤后，精密吸取续滤液20µL 注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法测定含量，并计算各点的累积透皮量Q (µg/cm 2)、透皮百分比P (%，累积透皮量/上药量)，结果见表1~2。
累积透皮量计算公式：
Q 累积=
C C n i ×16+×2
逢凶化吉的意思
0.785
∑i n =−11
式中：C n 为第n 个取样点测得的药物浓度(µg/mL)，C i 为第i (i ＝n -1)个取样点测得的药物浓度，16为释放液的总体积(mL)，2为取样量(mL)，0.785为释药面积(cm 2)。
以时间t 为横坐标，累积透皮量Q 为纵坐标，分别绘制不同厂家样品在亲水性与亲脂性释放液中的累积透皮量Q 1–t 和Q 2–t 曲线图，见图2~3。
图2显示了不同厂家莫匹罗星软膏在亲水性释放介质中透皮吸收百分比P 1(%)的范围为0.01%～0.05%，差异不是很大。原研厂家中美天津史克制药有限公司透皮吸收百分比相对较大，其他仿制企业的样品均较小。表明各仿制样品与原研样
表2 不同厂家样品在亲脂性释放液中透皮释放量测定结果
Tab. 2 Results of cumulative permeation amount of samples in lipophilic medium from different enterpris
厂家累积透皮量Q 2/(µg/cm 2)
透皮百分比P 2/%
0h 2h 4h 6h 7h 8h A 00.9967 1.6675 1.9969 2.1722 2.28000.036B 0 1.1638 1.3338 1.6780 1.6084 1.60430.025C 00.6930 1.3116 2.3371 2.7704 3.11920.049D 00.26700.47770.54960.60310.58880.009E
00.4816 1.3526 1.220642.446466.2917 1.041中美天津史克(原研)
公主绘画1.4166
1.4795
1.7544
1.6601
1.8275
0.029
表1 不同厂家样品在亲水性释放液中的透皮释放量测定结果
Tab. 1 Results of cumulative permeation amount of samples in hydrophilic medium from different enterpris
厂家累积透皮量Q 1/(µg/cm 2)
透皮百分比P 1/%
0h 2h 4h 6h 7h 8h A 00.04690.25250.34650.64410.83130.013B 00.21200.50140.70550.79920.88690.014C 00.67460.78340.7404 1.0173 1.38520.022D 00.16710.
22880.89890.60180.64360.010E
00.41990.58650.43720.36690.57020.009中美天津史克(原研)
3.2122
3.5261
2.9383
3.2311
3.3414
0.052
品在处方、工艺方面存在一定差异。图3显示了不同厂家莫匹罗星软膏在亲脂性释放介质中透皮吸收百分比P 2(%)的范围为0.01%～1.04%，差异较明显。厂家E 样品6h 后P 2值急剧增大，透皮量明显大于其他厂家样品。各厂家样品P 2值由小到大依次为：厂家D ＜厂家B ＜中美天津史克制药(原研)＜厂家A ＜厂家C ＜厂家E 。对于皮肤外用制剂，透皮吸收量过大容易引起全身的不良反应。
43210
0 2 4 6 7 8
透皮吸收取样时间/h
含量/(µg /c m 2)
中美(原研)厂家B 厂家D
厂家A 厂家C 厂家E
图2 累积透皮量(亲水性释放液)Q 1-t 图
Fig. 2 Q 1-t curve of accumulative permeation amount in
hydrophilic medium
543210韩信教学
一个执一个虫0 2 4 6 7 8
透皮吸收取样时间/h
含量/(µg /c m 2)
中美(原研)厂家C 厂家A 厂家D
厂家B 厂家E
图3 累积透皮量(亲脂性释放液)Q 2-t 图
Fig. 3 Q 2-t curve of accumulative permeation amount from in
lipophilic medium
2.3.2 皮内滞留量测定
上述透皮试验结束后，取下鼠皮，按“2.1.5”项下皮内滞留量方法，测定皮内滞留量X (µg/cm 2)，滞留百分比W (%，滞留量/上药量)，结果见表3~4。
由表3可知，不同厂家莫匹罗星软膏在亲水性释放液中，8h 后的皮内滞留百分比W 1(%)范围为0.51%～1.79%，存在一定差异，W 1值由大到小依次为：厂家C ＞中美天津史克制药(原研)＞厂家E ＞厂家
D ＞厂家A ＞厂家B 。由表4可知，不同厂家莫匹罗星软膏在亲脂性释放液中，8h 后的皮内滞留百分比W 2(%)范围为0.69%～2.59%，也存在一定差异，由大
到小依次为：中美天津史克制药＞厂家C ＞厂家D ＞厂家B ＞厂家E ＞厂家A 。作为皮肤外用药，皮内滞留量越大，表明药物有效性越好。
表3 不同厂家样品在亲水性释放液中皮内滞留量测定结果Tab. 3 Results of intradermal retention amount of samples in
hydrophilic medium from different enterpris
厂家皮内滞留量X 1/(µg/cm 2)
吸收百分比W 1/%
A 34.64870.54
B 32.69500.51
C 114.0856 1.79
D 42.42500.67E
47.36410.74中美天津史克(原研)
79.4538
1.25
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表4 不同厂家样品在亲脂性释放液中皮内滞留量测定结果Tab. 4 Results of intradermal retention amount of samples in
lipophilic medium from different enterpris
厂家皮内滞留量X 2/(µg/cm 2)
吸收百分比W 2/%
A 46.32990.69
B 94.7044 1.46
C 107.5146 1.64
D 98.9445 1.54E
139.7210 1.15中美天津史克(原研)
166.9460
2.59
3 讨论
目前在进行仿制药研究及变更研究中，均需要考察仿制药与原研制剂的一致性。基于单室Franz 扩散池进行体外透皮释放试验已广泛应用于半固体外用制剂的工艺与处方研究[9-12]。本次国评抽取的莫匹罗星软膏包含了各仿制药与原研制剂，通过本次试验，可在一定程度上反映不同厂家生产的莫匹罗星软膏的体外透皮吸收情况，可作为其进行一致性评价的基础。4 小结
本研究采用KM 种小鼠背部皮与单室Franz 池进行体外透皮吸收试验，利用HPLC 法来分析莫匹罗星软膏在体外透皮吸收及皮内滞留情况。莫匹罗星软膏原研制剂与5家仿制企业市售制剂在体外透皮的释药趋势一致，仿制药与原研药在亲水性释放液中的透皮吸收差异较小；皮内滞留量测定，原研与1家仿制产品结果基本一致，较其他4家仿制药企业产品较大。在亲脂性释放液中，1家仿制药企业产品较其他企业产品的透皮吸收值均较高；皮内滞留量测定，原研产品均较5家仿制药大。
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