家鸡通过大肠杆菌扩增质粒
1. 配2.5L LB培养液。组分（1L培养液中）：Tryptone 10g，Yeast extract 5g，NaCl10g。
2. 临门一脚溶解三种按比例称好的组分于800ml去离子水中，用1M NaOH调节PH7.0，定容到1L。高压灭菌。
3. 配制卡那霉素工作液30mg/ml，使用时以1:1000的比例加入培养基中，即工作液浓度为30ug/ml。
孟加拉眼镜蛇4. 从-70℃冰箱中取出带有pEGFP质粒的DH5α大肠杆菌，取适量接种于含有30ug/ml卡那霉素的5-10ml LB培养基，在37℃剧烈震摇（300rpm）8h。
5. 将小摇的菌液以1/500-1/1000转接到2.5L含30ug/ml LB培养液中，在37℃剧烈震摇（300rpm）12-16h。
3.1.2质粒的大提
1. 6,000g，4℃，离心15min，倒掉上清，收集细菌细胞沉淀。
2. 用125ml buffer P1重新混悬细胞。涡旋或上下颠倒至细胞无细胞沉淀。
明智光秀3. 加125ml buffer P2，温和混合，颠倒4-6次（不可涡旋），指示剂颜色变为蓝色，然后在室温下静置5min。用后迅速盖上buffer P2盖子，防止buffer P2被空气中的CO2酸化。
4. 加125ml冷冻后的buffer P3，立刻颠倒温和混匀4-6次，至液体颜色由蓝转白，并在冰上孵育30min。
5. 20,000g，4℃，离心30min。迅速转移含有质粒DNA的上清。将得到的上清同样的条件再次离心15min，取上清待用。
少年中国说朗诵稿全版6. 用75ml buffer QBT平衡QIAGEN-tip 10000，使其在重力作用下流完。
7. 取步骤5得到的上清，上样。让样品在重力作用下进入树脂。
8. 用600ml buffer QC清洗QIAGEN-tip。重力作用下过柱。
9. 用100ml buffer QF洗脱柱子，并收集待用。
3.1.3质粒的纯化和浓度测定
顺治出家之谜1. 室温下加入70ml异丙醇，沉淀出DNA。大于15,000g，4℃，离心30min。弃上清。
2. 用10ml室温70%乙醇清洗DNA沉淀，15,000g，离心10min。弃上清。
3. 沉淀自然干燥10-20min，用10ml微机继电保护超纯水重新溶解DNA。分装于10根1.5ml eppendorf管中。取一管用超纯水稀释100倍后使用UV-2101PC型紫外分光光度计测定DNA的浓度，其余置-20海苔卷℃冰箱冷藏备用。
