中国兽医科学 2021，51(05):646-655
Chine Veterinary Science网络首发时间：2021-02-02 D01：10.16656/j.issn.l673-4696.2021.0072 中图分类号：S859.796 文献标志码：A文章编号：1673-4696(2021 )05-0646_10注射用头孢噻呋钠对靶动物牛的安全性试验
陈晨1，董朕\邱燕华\孙继超u，程富胜\周绪正”，张继瑜”清新的空气
(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业农村部兽用药物创制重点实验室，甘肃省新兽药工程重点
实验室，甘肃兰州730050;2.东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)
摘要：头孢噻吱钠是一种专门用于动物的第三代头孢菌素类抗生素，目前国内暂无对头孢噻呋钠在靶 动物牛的安全性相关研究。为了评价该制剂对把动物牛的安全性和剂量相关的毒性反应，确定合理的安全 范围。本试验遴选32头健康牛，随机分为4组，每组8头，设0倍剂量组（空白组）、1倍剂量组、3倍剂量组、5倍剂量组。牛颈部肌肉注射给药，连续9 d，每日1次。试验期间，每日观察牛临床表现及不良反应，记录并 分析试验前后牛的体重变化，对试验前后采集所有实验牛的血液和尿液进行检测分析，对5倍剂量组和空 白组部分牛实施安乐死进行组织病理学检查。结果显示，各剂量组牛的采食、饮水、呼吸
频率、心率以及精神 状态正常，均未观察到与头孢噻呋钠相关的临床变化，粪尿排泄均正常，未有异常表现。与空白组相比，注射 用头孢噻呋钠各剂量组牛给药前后体重差异均不显著；血液学检查和血清生化学指标以及尿液指标差异均 不显著；大体剖检未有显著的病理变化；与空白组相比，5倍剂量组牛的组织病理学检查也未发现显著的病 理变化。每日1次，连续9d使用5倍推荐剂量的注射用头孢噻呋钠，靶动物牛仍耐受，故注射用头孢噻呋钠 在临床使用中具有良好的安全性。
关键词：注射用头孢噻呋钠；靶动物；牛；安全性
Target animal safety test of ceftiofur sodium injection in bovine
C H E N Chen1,
D ON G Zhen',QIU Yan-hua^SUN J i-chao1'2,C H
E N G Fu-sheng1,Z H0U Xu-zheng1*,Z H A N G J i-yu1*
(1. Institute of H usbandry and Pharmaceutical Sciences,Chine A cademy of A gricultural Sciences ,Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development ’Ministry of A griculture and Rural Affair,Key Laboratory of N e w A nimal Drug Project of Gansu Province, Lanzhou 730050,China ；2. College of A nimal Medicine , Northeastern Agricultural University, Harbin 1500^0 .China)
Abstract：Ceftiofur sodium is a third-generation cephalosporin a n tib io tic sp e cific a lly for u in animals and there are no relevant studies on c e ftio fu r sodium in targ et animals safety in bovine in China. To evaluate the safety and do-related toxic effects of th is formulation in targ et animal bovine and to determine a reasonable safety range. The t r i a l was conducted by lecting 32 healthy bovine and randomly dividing them into 4 groups of 8 bovine each,with OX do group(control group), 1 X do group, 3 X do group and 5 X do group. The bovine were administered by intramuscular injection into the neck for 9 days,once daily. During the t r i a l,c a ttle were obrved daily for c lin ic a l signs and adver reactions,weight changes were recorded and analyd before and a fte r the tria l,a n d blood and urine were collected from a ll te s t c a ttle before and a fte r the t r i a l for testin g and analysis,and some c a ttle in the 5 Xdo group and the control group were euthanid for histopathological examination. The re s u lts
收稿日期：2020-12-29；修回日期：2021-01-27
基金项目：国家重点研发计划一优质肉牛高效安全养殖技术应用与示范（2018YFD0501800)；国家肉牛牦牛产业技术体系 (CARS-37)；甘肃省科技计划资助一基础研究创新群体（18JR3RA397)
作者简介：陈晨（1996-)，女，甘肃天水人，硕士生，主要从事兽医药理学与毒理学研究，E-mail:***
**************。*通讯作者：周绪正（1971-)，研究员，主要从事兽医药理学与毒理学研究，E-mail :*****************；张继瑜
(1967-)，甘肃庆阳人，研究员，博士，主要从事兽医药理学与毒理学研究，E-mail:***************。
第5期陈晨等：注射用头孢噻呋钠对靶动物牛的安全性试验647
showed that no clinical changes associated with ceftiofur sodium were obrved in the food intaking, drinking,respiratory rate,heart rate and mental status of the bovine in each do group,and faecal and urinary excretion were normal without abnormalities. Compared with the control group,there was no significant difference in body weight before and after administration of ceftiofur sodium for injection in all do groups,no significant difference in haematological examination,rum biochemical indexes and urinary indexes,no significant pathological changes in gross autopsy,and no significant pathological changes in histopathological examination of bovine in the 5 times do group compared with the control group. Ceftiofur sodium for injection was administered once daily for 9 concutive days at 5 times the recommended do,and was still tolerated by the target animals,so ceftiofur sodium for injection has good safety in clinical u.
Key words：ceftiofur sodium injection；target animal；bovine；safety
* Corresponding authors：ZHOUXu-zheng,E-mail :zhxuzheng@163. com;ZHANGJi-yu，E_mai 1:infzjy@sina. com
头孢噻呋(Ceftiofljr)是第三代广谱p-内酰胺类 头孢菌素12。头孢菌素的杀菌机制类似于所有P_ 内酰胺类抗生素，它们破坏细菌细胞壁的合成，靶向 位于细菌细胞壁内部的青霉素结合蛋白（p e n i c i l l i n binding proteins,PBPs)。P B P s是参与细胞壁合成不 同阶段的酶，它们包括转肽酶、内肽酶、羧肽酶和转 糖苷酶'Bycroft等[〜证明，头孢噻呋及其代谢物 (D F C和D F C二聚体）至少与3种不同的大肠杆菌 青霉素结合蛋白（PBPs)结合，这三种P B P s对大肠 杆菌的存活至关重要。头孢噻呋因其在氮杂环上具 有羰基，噻唑上具有氨基，故可与盐酸和氢氧化钠反 应生成盐酸盐以及钠盐，因此在临床上通常以盐酸 头孢噻呋或头孢噻呋钠的形式存在[5]。头孢噻呋是 兽医专用抗生素，2015版《中国兽药典》收载的注射 用头孢噻呋钠主要用于雏鸡与猪此后，中华人 民共和闰农业农村部批准增加了注射用头孢噻呋钠 用于牛的细菌性感染疾病的治疗。目前国内尚未有 注射用头孢噻呋钠对牛的安全性报道。为了满足药 物的必要安全性要求，扩大靶动物的范围，本试验按 照农业农村部《兽药临床试验质量管理规范》、《兽药 研究技术指导原则汇编》(2006—2011年）及《VICH 药物靶动物安全性试验指导原则》的要求，选用健 康西门塔尔牛按推荐治疗剂量（2.2 mg/kg*b w)的0 (空白组）、1、3、5倍开展靶动物安全性试验，以期 为注射用头孢噻呋钠在牛的临床安全用药提供科学 依据。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
ErbaXL-640全自动生化分析仪购自德国Erba Mannbcim有限公司。ProCyteDX全自动五分类血细胞分析仪购自爱德士緬因生物制品贸易（上海)有 限公司。Sorvall Lagend X T/X F低温高速离心机购自 赛默飞世尔科技中国有限公司。LeicaRM2265全自 动旋转式组织切片机、Leica HI1210水浴缸、Leica 丨111220烤片台均购自徕卡显微系统（上海）贸易有 限公司。Olympus B X43光学电子成像显微镜购自奥 林巴斯（中国）有限公司。0.9%氯化钠注射液购自辰 欣药业股份有限公司。生化试剂盒购自美康生物科 技股份有限公司。苏木精染色液和伊红染色液均购 自赛默飞世尔科技中国有限公司。尿液分析试条购 自广州市花都高尔宝生物技术有限公司。10%中性 福尔马林间定液购自北京索莱宝科技有限公司。1.2受试药物
注射用头孢噻呋钠粉针，批号：D A Q 190302，规 格：按C,9H l7N507S3计算1.0 g，由河北远征药业有限 公司生产。0.9%氯化钠注射液，批号：N19031604-2, 规格：250 m L，按NaCl计算2.25g，产自辰欣药业股 份有限公司。
1.3实验动物
青山一道同风雨试验选用32头健康青年西门塔尔牛（公母各 半），体重244〜325 kg，试验开始前适应环境7 d。实 验动物在试验前6个月内未接受头孢噻呋或相似药 物治疗。每日定时喂养2次不含抗生素和抗寄生虫
药物的全价T M R饲料，自由饮水。实验牛由甘肃省 张掖市万禾草畜产业科技开发有限公司提供。
1.4分组与给药
将实验牛随机分为4组，即0倍剂量组（0X)、1倍剂量组（1X)、3倍剂量组（3X)、5倍剂量组 (5X)，每组8头，每头牛都采用耳标标记。实验牛 分组后栓在栏杆上，每头牛都留有适当的活动范围 (2.5米）。每组之间的间隔为5米。在每组牛的颈部
648中国兽医科学第51卷
肌肉处按剂量无菌注射用水溶解的头孢噻呋钠，每 隔一天在对侧同一位置选择注射部位，药品现用现 配。0倍剂量组给予与2.2 mg/kg*b w组等量的生理 盐水。连续用药9 d，每日1次。给药方案见表1。给 药后每日测量并记录各组实验牛的体温、状态及不 良反应等，给药前后对所有实验牛称重并记录。
表1注射用头孢噻呋钠给药方案
Table 1Dosing regimen for ceftiofur sodium for injection
分组数量给药途径剂量/ (mg.kg—1) Group Number Administration route Dosage
O X肌内注射
Intramuscular injection
I X8肌内注射
融合的反义词
Intramuscular injection
3X8肌内注射
Intramuscular injection
6.6
5X8肌内注射
Intramuscular injection
11.0
对照组给予生理盐水，故无剂量。
-
：Saline was given to the control group, so no do.
1.5血液学检查
在试验前(第0天）和试验后（第10天）采集所 有未退出试验的牛的血液于E D T A K2抗凝采血 管。试验期间若有实验牛退出试验，在退出当日采 集退出试验的牛的血液。采集的抗凝血进行血液学 检查，检查的项目包括白细胞计数(W B C)、淋巴细 胞（L Y M)、单核粒细胞（M O N)、中性粒细胞（N E U)、嗜酸性粒细胞（E O S)、嗜碱性粒细胞（B A S)、红细 胞计数（R B C)、血红蛋白含量（H G B)、红细胞比容 (H C T)、红细胞平均体积（M C V)、平均红细胞血红 蛋白含量(M C H)、平均红细胞血红蛋白浓度(M C H C)、血小板计数（P L T)、平均血小板体积（M P V)、血小 板压积（P C T)。
1.6血清生化检查
在试验前（第0天）和试验后（第10天）采集所 有未退出试验的牛的血液于无添加剂空白采血管。试验期间若有实验牛退出试验，在退出当日采集退 出试验牛的血液。采集的血液离心分离血清进行血清生化检查。检查的项目包括总胆红素（T B I L)、总 蛋白（T P)、白蛋白（A L B)、球蛋白（G L O)、谷丙转氨 酶(A L T)、谷草转氨酶(A S T)、碱性磷酸酶(A L P)、乳 酸脱氢酶(L D H)、肌酸激酶(C K)、尿素氮（B U N)、肌 酐(C R)、尿酸（U A)、葡萄糖(G L U)、甘油三酯(T G)、总胆固醇(T C H)。
1.7尿液分析
在试验前（第0天）和试验后（第10天）采集所 有未退出试验的牛的尿液，进行尿液分析，检查的项 目包括p H和比重。
1.8大体剖检与组织病理学检查
试验结束后，在5倍剂量组和0倍剂量组中各 随机挑选2头牛（雌雄各半）实施安乐死，对实验牛 进行剖检，观察并记录主要脏器的眼观病理变化，采 集心、肝、脾、肺、肾等组织样品，固定于10%中性福 尔马林固定液中，固定好的组织进行常规石蜡切片，
H E染色，镜检。
1.9数据统计分析
数据用Microsoft Excel软件记录，用SPSS 26.0 软件进行分析，体温、体重、血液学与血清生化检查 结果用Mean土S D表示，采用单因素方差分析和/ 或非参数检验进行统计分析，比较各组间指标差异，所有假设检验均在0.05显著水平进行。
2结果
2.1临床观察
在试验过程中，所有组实验牛均未死亡。采食、饮水、呼吸频率、心率以及精神状态均未观察到与头 孢噻呋钠相关的临床变化。所有组均未观察到腹泻 或/和便秘等异常排泄情况。
2.2注射用头孢噻呋钠对牛体重的影响
连续9 d给药后，所有实验牛均未出现体重下 降的情况。5X组中的母牛体重出现了显著性的增 加（P C0.05)，其余各组的母牛与公牛体重变化无显 著性差异（P>〇.〇5)。说明注射用头孢噻呋钠对牛体 重无不良影响，详见表2和表3。
表2各组公牛试验期间体重变化统计
Table 2 Weight change statistics for each group of male cattle during the trial
组别Group
试验前体重/kg
Pre-test weight
试验后体重/kg
Post-test weight
试验期间增重/kg
Weight gain during the trial
试验期间日增重/kg
Daily weight gain during the trial
O X292. 8 士15. 8302. 8 土22. 913. 3 土 3. 3 1.3±0. 3 I X294. 5 ±22. 8295. 5 士38. 818. 5 土3.7 2.0±0. 3 3X283. 3土27. 2313. 0±8. 919.8±3. 12.0±0. 3 5X269. 5 士25. 9294. 5±21.818. 5 土7.2 1.9±0. 7
第5期陈晨等：注射用头孢噻呋钠对靶动物牛的安全性试验649
表3各组母牛试验期间体重变化统计
Table 3 Weight change statistics for each group of female cattle during the trial
组别Group
试验前体重/kg
Pre-test weight
试验后体重/kg
Post-test weight
试验期间增重/kg
Weight gain during the trial
试验期间口增重/kg
Daily weight gain during the trial
0X287. 0±13. 6299. 0±17. 313. 5±4. 0 1.4±0. 4 I X292. 5 ±24. 6292.0±22. 515. 8±4. 3 1.6士 0.4 3X280. 3±25. 5305. 0±13. 67.8±4.60.8±0_5 5X300. 5 土 19. 3305. 0 土 22. 2 6. 3 士 .2. 2*0.6 土 0.2* *代表与〇x组相比差异显著。
* reprents significant difference compared to O X group.
2.3注射用头孢噻呋钠对牛体温的影响
第1天给药后，各组牛的体温略有升高，但变
化不显著(P>〇.〇5)。第2天给药后体温降低，之后
基本保持平稳。不同性别的牛的体温变化详情见表
4、表 5〇
2.4尿液分析
试验前（第0天）和试验后（第10天）采集部分
实验牛的尿液进行多联试纸条检测分析。尿液分析
结果显示，给药前后各项检测指标变化无显著性差
异（P>0.05)，结果见表6。
2.5血液学和血清生化学分析
从表7和表8结果可见，5 X组公牛在试验前
表4各试验组公牛体温变化统计
我的年
Table 4 Statistics on the change in body temperature of male
cattle in each test group
时间体温 /°C Body temperature
Time O X I X3X5X
试验前
Before the test
38. 2±0. 338. 6±0. 138.4±0. 138. 3±0. 2
第1天
Day 1
39. 5 土 0.539. 4 土 0.339. 0 土0• 139. 0士0.2
第2天
Day 2
38.7±0.238. 9±0. 238. 7±0.238. 9±0. 1
第3天
Day 3
38.6±0. 338.8±0.238.8±0.238. 7±0.2
第4天
Day 4
38. 8±0. 139. 0 士 0.239. 0±0.339. 1±0. 5
成都小吃排行榜前十名
第5天
Day 5
38. 9 土 0• 138. 9±0.339. 2 士 0. 339. 1±0.4
第6天
Day 6
38.8±0. 238.8±0. 138. 9 土 0.339. 2 土 0.2
第7天
Day 7
38. 8 士 0.338. 8±0. 138.9±0. 138. 8 土 0.2
第8天
Day 8
38. 7±0.238. 8±0. 138.9±0. 339.0±0.4
第9天
Day 9
2010年世界杯冠军38. 7±0. 138. 8 土 0. 138. 8±0. 138. 8±0. 2
第10天 Day 1038. 8 土 0.339. 2 土 0.339. 1 ±0.339. 0±0. 1
表5各试验组母牛体温变化统计
Table 5 Statistics on the change in body temperature of fe
male cows in each test group
时间体温 /°C Body temperature
Time O X I X3X5X
给药前
Before the test
38.0 土 0.738. 7±0. 538. 8 土0.638. 5±0.3
第1天
Day 1
39.1±0. 139.2±0.239. 1士 0.239.0±0. 1
第2天
Day 2
38. 6±0. 139.0 士 0.339. 0±0. 239.0 土 0.2
第3天
Day 3
38.8±0. 439. 0±0. 138. 9 土 0. 138.9土0.1
第4天
Day 4
38.9±0. 139.0 土 0.239. 1 土 0.238_9±0_ 1
第5天
Day 5
38.8±0_539.0 士 0.239.0±0. 238.9±0. 1
第6天
Day 6
38. 8 土 0.238. 9±0.338. 9 土 0.238.9±0. 1
第7天
Day 7
38. 8 士 0.538. 9±0. 538. 9 土 0. 238.9±0.2
第8天
Day 8
38. 8 土0.238.9±0. 339. 1±0.239.0 士 0.2
第9天
Day 9
39.0±0.239.0±0. 338. 8 士 0. 139.0±0. 3
第10天
Day 10
38.9±0. 138. 9±0. 139. 0 士 0. 138. 9 士 0. 1
(第0天）的总蛋白（T P)、白蛋白（A L B)、球蛋白
(G L O)、谷丙转氨酶（A L T)、谷草转氨酶（A S T)、乳
酸脱氢酶(L D H)、尿酸(U A)和总胆固醇(T C H)，1X
组公牛的谷丙转氨酶（A L T)与谷草转氨酶（A S T),
3X组母牛的尿素氮（B U N)与空白组（0X组）相比差
导线连接方法
异显著（P<〇.〇5)，但均仍在参考范围内，不影响试
验结果。其他参数指标均无显著性差异（P>〇.〇5)。
从表9和表10结果可见，试验后（第10天）各
试验组母牛与公牛的各项参数指标与空白组（0X)
相比差异均不显著。说明每日1次，连续9d给予牛
推荐剂量的1、3、5倍剂量的注射用头孢噻呋钠对牛
血液学和临床化学参数无显著性的影响。
650中国兽医科学第51卷
表6注射用头孢噻呋钠对实验牛尿液参数的影响
Table 6 Effect of ceftiofur sodium injection on urine pa
rameters in test cattle
参数Parameters
性别
Genders
pH
比重
Specific gravity 公 Male7. 0(7. 0 — 7.0) 1.030(1.030-1.030)
O X
^ Female7. 0(7. 0—7. 0) 1.030(1.030-1.030) I X
公 Male7. 0(7. 0 — 7.0) 1.030(1.030—1.030)
母 Female7. 0(7. 0-7. 0) 1.030(1.030-1.030)
公 Male7. 0(7.0 —7.0) 1.030(1.030-1.030) 3X
母 Female7. 0(7. 0-7. 0) 1.030(1.030-1.030) 5X
公 Male7. 0(7. 0 — 7.0) 1.030(1.030-1.030)
母 Female7. 0(7. 0 — 7.0) 1.030(1.030-1.030)2.6组织病理学检查
试验后（第10天）随机挑选5倍剂量组中1头公牛和1头母牛，0倍剂量组中1头公牛和1头母 牛进行安乐死和剖检，大体剖检观察及组织切片H E 染色显微观察，均未观察到与头孢噻呋钠相关的变 化。5倍剂量组偶尔出现肾透明管型，此外，在0倍 剂量组中观察到几例肝细胞水肿和肺泡壁出血。组 织病理学观察结果见图1。
3讨论
大鼠摄入尚剂量的头抱唾咲后出现的副作用是 胃肠道紊乱、红细胞计数下降、电解质失衡，出现营
表7试验前各组实验牛血液学分析结果统计
Table 7 Results of haematological analysis of test cattle in pre-test groups
参数
P a r a m e t e r s
0X I X
母 Female公 Male母 Female公 Male
WBC9. 71 土 1.707. 89 土 1. 198. 44 土 1.298. 27 士 0.95 LYM 5. 77 ±0.58 4.74±1.08 5. 61 ±0.90 4. 89 土 0.24 MON0.57 土 0. 130. 39±0. 130. 44±0. 120.44 土 0.24 NEU 3.28±1.06 2. 68 土 0.57 2. 31 士 0.68 2. 87 士 2. 00 EOS0.08 ±0.040.07 土 0.030.07 土 0.030. 05±0. 02 BAS0.03 土 0.020.06 士 0.090.02 士 0.010.02 士 0.01 RBC9. 15±0.46241. 91 土 465. 399. 72±0. 7010. 15±0.20 HGB9. 80 土 0.559. 70 土 0.5610. 40±0.5810. 45±0.62 HCT35, 78 ±0.9636. 18 土 2. 7038. 58 土 1.8237. 30±2. 77 MCV39. 50+1.3039. 00 ±0.8239. 75 士 2. 6336. 75±3. 10 MCH10. 73 土 0.6610. 5
0 土 0.2910. 73 士 0.5110. 33土0.66 CHC27. 40 土1.0126. 80 士 0. 3827. 00±0. 8028. 10 士 0.88 PLT227. 75 ±45. 99219.75土38.77219. 25 土 37. 21294. 25±20. 45 MPV 5.90±0.27 5. 65 士 0.31 5. 78±0. 22 5. 85 士 0.39 PCT0• 14±0. 030. 13 土 0.030. 13 士 0.030. 17 士0.01
参数3X5X
细雨朦胧P a r a m e t e r s母 Female公 Male母 Female公 Male WBC8. 24 土 1.888. 99 士 1.918.94±1.299. 07±0. 59 LYM 5. 94 土 2. 00 5. 34±0.95 5.驄士0.75 5. 06 土 1.31 MON0.37±0. 170• 27±0. 140.35 士 0. 140. 29 土 0. 18 NEU 2. 45 土 0.81 3. 22±2.65 2. 79土0.88 2. 51 ±0. 76 EOS0• 18 土 0. 150.04±0.010. 10±0.080• 08±0. 02 BAS0.06 土 0.050. 02±0. 010.03 ±0.030. 03 士 0.01 RBC9. 34±0.988. 81 ±1.048. 79 ±0.569. 75 土0.97 HGB9. 80 土0.429. 38 土0.499. 80±0. 619. 35±0. 70 HCT36. 64 土 1.3534. 77±2. 1936. 15 土 1.9032. 78±1_42 MCV39. 50 土2. 6539. 75 土 5. 6841. 00 土 2. 0033. 75 土 3. 40 MCH10. 58±0. 6810. 73士 1.0611.20±0.619. 60 ±0.50 CHC26. 80 士 0.1627. 03±1.0227. 18 士0.3636. 00 ±16. 44 PLT260. 75±17.42288. 25土55. 22247. 50+15.59291.25±56.96 MPV 5. 78±0. 31 5.98±0. 17 6.00±0. 14 5.68±0.13 PCT0. 15 土 0.010. 18±0.040• 15 士0.010. 17 土 0.03
