中国农业大学学报 2020,25(11):82-
89Journal of China Agricultural Universityhttp:∥zgnydxxb.ij
ournals.cnDOI:10.11841/j
.issn.1007-4333.2020.11.09佛手和甜橙果汁及挥发油对油酸致兔耳痤疮的预防作用
邱稼飞1 王璇1 张南海1 赵亮1,2
张列兵1 吴薇3 籍保平1 周峰1*
唯心辩证法(1.
中国农业大学食品科学与营养工程学院/植物源功能食品北京市重点实验室,北京100083;2.
北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心,北京100048;3.
中国农业大学工学院,北京100083)摘 要 为研究佛手和甜橙的果汁及挥发油对兔耳痤疮的预防作用,
采用兔耳内侧涂抹油酸形成痤疮模型,将新西兰兔分为空白组、模型组、阳性对照组(灌胃复方珍珠暗疮胶囊)、佛手汁和挥发油高低剂量组、甜橙汁和挥发油高低剂量组,
分别灌胃对应成分,观察兔耳组织病理学及检测兔耳组织皮脂分泌量、氧化应激指标和炎症因子的变化。结果表明:1)经过油酸诱导的新西兰兔耳,皮肤粗糙增厚且毛囊口扩张并隆起,并出现一定量的红色丘疹和脓包,兔耳组织中甘油三酯、丙二醛含量增加、炎症因子表达水平增加、抗氧化能力显著下降(P<0.05);2)与模型组相比,各干预组均可降低兔耳组织甘油三酯、丙二醛、炎症因子表达水平,提高抗氧化物含量,改善兔耳的痤疮程度;3)在成分干预组中,甜橙挥发油对痤疮的抑制效果最佳,其次是佛手挥发油,果汁效果较差。因此,佛手和甜橙挥发油都具有良好的改善油酸致兔耳痤疮的效果,并且甜橙挥发油的效果最佳。关键词 佛手;甜橙;果汁;挥发油;兔耳痤疮模型;油酸
中图分类号 TS255.4 文章编号 1007-4333(2020)11-0082-
08 文献标志码 A收稿日期:2020-02-
11基金项目:中国博士后科学基金特别资助(站前)(2019TQ0011)第一作者:邱稼飞,硕士研究生,E-mail:aerophy
@163.com通讯作者:周峰,副教授,博士生导师,主要从事果蔬加工与功能食品研究,E-mail:zf@c
au.edu.cnPreventive effects of juice and volatile oil from bergamot andsweet orange on rabbit ear acne induced by
oleic acidQIU Jiafei 1,WANG Xuan1,ZHANG Nanhai 1,ZHAO Liang1,2,ZHANG Liebing1
,WU Wei 3,JI Baoping1,ZHOU Feng
1*
(1.College of Food Science and Nutritional Engineering/Beijing Key Laboratory
吃饭出汗
of Functional Food from Plant Resources,China Agricultural University,Beijing
100083,China;2.Beijing Advanced Innovation Center for Food Nutrition and Human Health,Beijing Technology
澄的意思and Business University,Beijing
100048,China;3.College of Engineering,China Agricultural University,Beijing
100083,China)Abstract To study the preventive effect of juice and volatile oil from bergamot and sweet orange on rabbit ear acne,oleic acid was applied in rabbit ears to form an acne model.New Zealand rabbits were divided into blank group,modelgroup,positive control group(gastric compound pearl acne capsule)
,bergamot juice and volatile oil high and low dosegroup,sweet orange juice and volatile oil high and low dose group and respectively were gavaged the correspondingcomponents.The rabbit ear histopathology was then observed and the changes in sebum secretion,oxidative stressindicators and inflammatory factors in rabbit ear tissue were detected.The results showed that:1)Rabbit ears acneinduced by oleic acid had rough skin,thickened hair follicles and swollen mouths,and a certain amount of red pimplesand pustules appeared.Triglyceride and malondialdehyde contents in rabbit ear tissues increased,inflammation factor
第11期邱稼飞等:佛手和甜橙果汁及挥发油对油酸致兔耳痤疮的预防作用
expression levels increased while the antiox
idant capacity decreased significantly(P<0.05);2)Compared with themodel group,each intervention group reduced the expression levels of triglyceride,malondialdehyde and inflammatoryfactors in rabbit ear tissues.The content of antioxidant are increased,so the conditions of rabbit ear acne wasimproved;3)In the component intervention group,sweet orange essential oil showed the best effect on acne,followedby bergamot essential oil,and the fruit juice was less effective.Therefore,both bergamot and sweet orange volatile oilshowed a good effect of improving rabbit ear acne caused by oleic acid,and the sweet orange volatile oil had the besteffect.
Keywords bergamot;sweet orange;juice;volatile oil;rabbit ear acne model;oleic acid
痤疮是一种慢性毛囊皮脂腺疾病,主要由于毛囊皮脂腺角化速度加快,诱发粉刺形成,造成毛囊内的无氧环境,引起痤疮丙酸杆菌增殖,从而诱导或加重痤疮病变,其中亚油酸含量不足、皮脂中脂质过氧化、雄激素分泌过多、外部油脂类产品刺激等都会引起皮肤毛囊皮脂腺角化[1]。目前痤疮的治疗方法一般为药物治疗和物理治疗,我国中医还采取内服、外治、针灸法预防及治疗痤疮[2]。由于长期服用药物会产生一定副作用,因此,研究并挖掘具有改善痤疮作用的物质,特别是天然产物成为研究热点。
佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)为芸香科柑橘属植物,是一种药食同源的植物,富含维生素C、佛手多糖、香豆素、橙皮苷、柠檬素油等化合物。甜橙(Citrus sinensis(L.)Osbeck)为芸香科柑橘属植物,含有丰富的β-胡萝卜素、维生素C、多酚类、黄酮类、生物碱等物质,具有较高的营养价值和较强的抗氧化作用。果汁和挥发油是它们最常见的两种产品形式,国外报道佛手精油具有抗菌活性[3],佛手汁具有降血脂、抗氧化、抗炎症等作用[4],还有报道称柑橘精油有抗菌、抗氧化作用[5]。因此,目前研究佛手、甜橙的果汁和挥发油对食物改善痤疮具有重要意义。
本研究拟采用兔耳内侧涂抹油酸建立痤疮模型[6],研究佛手和甜橙的果汁及挥发油对兔耳痤疮模型中兔耳组织病理学、皮脂分泌量、氧化应激指标和炎症因子的影响,以期为开发无毒副作用且能改善痤疮的佛手、甜橙产品提供理论依据,促进2种植物原料向精深加工发展,提高其产物利用。
1 材料与方法
1.1 动物、材料及试剂
米和厘米换算SPF级雄性健康新西兰兔66只,2.5±0.1kg,购买并饲养于北京芳元缘实验动物中心,SCXK(京)2014-0012。
佛手购于浙江金华,甜橙购于广东江门;复方珍珠暗疮胶囊,陕西东泰制药有限公司。
甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、维生素E(VE)、丙二醛(MDA)试剂盒,南京建成生物工程研究所;白三烯B4(LTB4)、白介素-1α(IL-1α)、白介素-6(IL-6)试剂盒,北京科盈美科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯。1.2 仪器及设备
AY220精密分析天平(0.000 1g),日本岛津公司;SpectraMax M2e酶标仪,美国Molecular公司;HV-200型压榨机,东兴仪器有限公司;超低温冰箱,中科美菱低温科技有限责任公司;超声波细胞破碎机,宁波新芝生物科技股份有限公司;TGL-20M高速台式冷冻离心机,湘仪离心机仪器有限公司;RE-2000旋转蒸发仪、SHZ-III循环水真空泵,上海亚荣生化仪器厂。
1.3 方法
1.3.1 佛手汁制备
将佛手鲜果切成1cm×1cm×1cm的小块,压榨取汁后置于冰箱中冷藏过夜,过滤得到佛手汁。1.3.2 佛手挥发油制备
参照《中华人民共和国药典》挥发油测定方法[7]。将佛手果皮切成8mm×8mm×1mm小块,取一定量于圆底烧瓶中,加入4倍体积蒸馏水,采用水蒸气蒸馏法提取2h,收集挥发油并加无水硫酸钠脱水,最后过滤去掉硫酸钠即得到佛手挥发油。
1.3.3 甜橙汁制备
将甜橙切成4cm×4cm×4cm的小块,压榨取汁后置于冰箱中冷藏过夜,过滤得到甜橙汁。1.3.4 甜橙挥发油制备
将甜橙果皮切成8mm×8mm×8mm小块,取一定量于圆底烧瓶中,加入6倍体积蒸馏水,采用水蒸气蒸馏法提取6h,收集挥发油并加入无水硫酸钠脱水,最后过滤去掉硫酸钠即得到甜橙挥发油。
3
300字美文摘抄大全8
中国农业大学学报2020年第25卷
1.3.5 动物分组及处理
新西兰兔适应性饲养1周,饲喂正常维持饲料,自由采食、饮水。66只雄性新西兰兔适应性饲养结束后随机分为11组,分别为空白组、模型组、阳性药物组、甜橙汁低剂量组、甜橙汁高剂量组、甜橙挥发油低剂量组、甜橙挥发油高剂量组、佛手汁低剂量组、佛手汁高剂量组、佛手挥发油低剂量组、佛手挥发油高剂量组。采用每天固定时间灌胃给药,空白组、模型组灌胃10mL/kg生理盐水,阳性药物组按照人每日服用换算,新西兰兔每日需服阳性药物1.65粒,按照体积比1∶6加入蒸馏水中配制成水溶液,灌胃4mL/kg复方珍珠暗疮胶囊,佛手汁低高剂量组分别灌胃8.4、10.5mL/kg,佛手挥发油低高剂量组分别灌胃0.125、0.2mL/kg,甜橙汁低高剂量组分别灌胃8.4、10.5mL/kg,甜橙挥发油低高剂量组分别灌胃0.125、0.2mL/kg,试验周期为3周,除空白组,其余组第2周开始用体积分数为50%的油酸石蜡溶液涂抹于兔耳内侧耳管开口处,每天1次,每次0.5mL,直至试验结束。
试验结束前禁食12h(自由饮水),用乙醚使新西兰兔深度昏迷,兔耳静脉注射空气处死。剪取兔耳痤疮受损处,一部分用于组织学观察,另一部分经液氮速冻后储存于-80℃冰箱中备用。1.3
.6 兔耳组织病理学指标测定
肉眼及光镜下观察兔耳痤疮模型兔耳受损部位组织学变化,根据毛囊扩张和炎细胞浸润程度对兔耳组织病理学进行分级。(-):毛囊扩张、炎细胞浸润程度与正常组织相同;(+):毛囊轻度扩张、局灶性炎细胞浸润;(++):毛囊中度扩张、局灶性炎细胞浸润并出现多个浸润灶;(+++):毛囊高度扩张、炎细胞弥漫性浸润。
1.3.7 兔耳组织生化指标检测
称取兔耳组织0.5g,破碎成小块,按质量体积比(m(兔耳组织)∶V(盐水))=1∶9g/mL的比例加入生理盐水制成匀浆,置于冷冻离心机中3 000r/min离心10min取上清液,按试剂盒要求检测兔耳组织中TG、FFA、LTB4、IL-1α、IL-6、T-AOC、GSH、SOD、VE、MDA含量。
1.4 统计学处理
试验结果以均值±标准偏差(Mean±SD)表示,采用SPSS 18.0软件单因素方差分析ANOVA(one-way analysis of variance)和多重比较检验分析Duncan’s分析不同组数据间显著性,P<0.05
表示数据间具有显著差异,采用GraphPad Prism 8.0软件绘图。
2 结果与分析
2.1 兔耳组织病理学观察
与空白组相比,油酸可使兔耳厚度增加,皮肤粗糙,毛囊口扩张并隆起,并出现一定量的丘疹和脓包,且出现弥漫性炎细胞浸润(图1),表明痤疮模型构建成功。各干预组兔耳痤疮较模型组症状有较明显的改善,脓包较少出现,毛囊隆起较少,炎细胞浸润减少,说明阳性药物、甜橙汁、甜橙挥发油、佛手汁、佛手挥发油对痤疮均有一定的改善作用,其中甜橙挥发油剂量组对痤疮的改善作用最好,其次是佛手挥发油组,佛手汁和甜橙汁的效果较差,可能由于挥发油中改善痤疮症状的有效成分含量较高[8](表1)。
2.2 不同处理下兔耳组织皮脂含量变化
毛囊皮脂中甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)含量增加,可引发角质形成细胞过度增殖,毛囊皮脂腺导管过度角化,导致微粉刺的形成,进而产生痤疮[9-10]。由图2可知,模型组兔耳组织TG、FFA含量较空白组显著增加(P<0.05),而与模型组相比,各干预组能显著降低TG和FFA含量(P<0.05),同时挥发油组效果优于果汁组,且随着剂量的增加TG和FF
A含量降低。对于TG含量,甜橙和佛手挥发油高剂量组可使其基本恢复至正常水平,与阳性药物组一致,对于FFA含量,甜橙挥发油高剂量组、佛手挥发油低高剂量组效果最优,且佛手挥发油低高剂量组优于阳性药物组。表明各干预组可通过降低TG和FFA对毛囊皮脂腺的刺激,达到改善油酸诱导痤疮的效果。
2.3 不同处理下兔耳组织LTB4含量变化
脂肪氧合酶的作用产物白三烯B4(LTB4)也能诱导角质形成细胞过度增殖,还能在没有痤疮丙酸杆菌的情况下诱导并加强炎症反应[11],痤疮丙酸杆菌的作用是使角鲨烯分解或转化为过氧化角鲨烯[12]。张保恒[13]研究发现LTB4可能在寻常痤疮发病中起重要作用,参与痤疮的炎症过程。由图3可知,模型组LTB4含量是空白组的3倍左右(P<0.05),各干预组较模型组能显著降低LTB4含量(P<0.05),甜橙挥发油高剂量组对LTB
4
含量的降低作用最显著,且优于阳性药物组。这说明干预组能通过降低LTB4含量减轻痤疮的炎症反应。
48
第1
1期邱稼飞等:
佛手和甜橙果汁及挥发油对油酸致兔耳痤疮的预防作用 (a)空白组;(b)模型组;(c)阳性药物组;(d)甜橙汁低剂量组;(e)甜橙汁高剂量组;(f)甜橙挥发油低剂量组;(g
)甜橙挥发油高剂量组;(h)佛手汁低剂量组;(i)佛手汁高剂量组;(j)佛手挥发油低剂量组;(k)佛手挥发油高剂量组。(a)Control group;(b)Model group;(c)Positive drug
group;(d)Low dose sweet orange juice group;(e)Highdose sweet orange juice group;(f)Low dose sweet orange volatile oil group;(g)H
igh dose sweet orange volatile oilgroup;(h)Low dose bergamot juice group;(i)High dose bergamot juice group;(j)Low dose bergamot volatile oilgroup;(k)High dose bergamot volatile oil group
.图1 不同处理组兔耳外观形态
Fig.1 Appearance and morphological of rabbit ear in different treatment group
s表1 不同处理组兔耳组织病理学形态变化结果
Table 1 Changes in pathological morphology
of rabbit ear tissue in different treatment groups只分组Group
组织病理学变化Histopathological chang
e-
++++++空白组Control group6—
——模型组Model group
——2 4阳性药物组Positive drug group 1 2 3—甜橙汁低剂量组
Low dose sweet orange juice group—
嘉靖帝
—
3
2
甜橙汁高剂量组
High dose sweet orange juice group—
2 2 1
甜橙挥发油低剂量组
Low dose sweet orange volatile oil group
—
4 2
—
58
中国农业大学学报2
020年第25卷 表1(续)
只
分组Group
组织病理学变化
Histopathological chang
e-
++++++甜橙挥发油高剂量组宾馆英文
High dose sweet orange volatile oil group2
3
1
—
佛手汁低剂量组
Low dose bergamot juice group
——
3 3
佛手汁高剂量组
High dose bergamot juice group—
2 2 2
佛手挥发油低剂量组
Low dose bergamot volatile oil group—
2 3
—
佛手挥发油高剂量组
High dose bergamot volatile oil group
1 3 2
—
注:
-,毛囊扩张、炎细胞浸润程度与正常组织相同;+,毛囊轻度扩张、局灶性炎细胞浸润;++,毛囊中度扩张、局灶性炎细胞浸润并出现多个浸润灶;+++,毛囊高度扩张、炎细胞弥漫性浸润。甜橙汁低剂量组、甜橙汁高剂量组、佛手挥发油低剂量组分别于实验过程中死亡1只。
Note:-,Hair follicles dilate and inflammatory
高职英语
cells infiltrate to the same degree as normal tissues;+,Milddilation of hair follicles and focal inflammatory cell infiltration;++,Moderate expansion of hairfolliclesand focal inflammatory cell infiltration with multiple infiltrates;+++,Highly dilated hair folliclesand diffuse infiltration of inflammatory cells.One rabit died in low dose sweet orange juice group,high dosesweet orange juice group and low dose bergamot volatile oil group during
the experiment
. A,
空白组;B,模型组;C,阳性药物组;D,甜橙汁低剂量组;E,甜橙汁高剂量组;F,甜橙挥发油低剂量组;G,甜橙挥发油高剂量组;H,佛手汁低剂量组;I,佛手汁高剂量组;J,佛手挥发油低剂量组;K,佛手挥发油高剂量组。柱上不同字母表示组间差异显著(P<0.
05)。下图同。A,control group;B,model group;C,positive drug
group;D,low dose sweet orange juice group;E,highdose sweet orange juice group;F,low dose sweet orange volatile oil group;G,high dose sweet orang
e volatile oilgroup;H,low dose bergamot juice group;I,high dose bergamot juice group;J,low dose bergamot volatile oilgroup;K,high dose bergamot volatile oil group.Columns marked with different letters represent significa
ntly
different(P<0.05)within group
s.The same below.图2 不同处理组兔耳组织甘油三酯质量分数(a)和游离脂肪酸质量摩尔浓度(b
)的变化Fig.2 Changes of triglyceride mass fraction(a)and free fatty
acid molality(b)of rabbit ear tissue in different treatment group
s68