无缝克隆后菌落PCR体系
菌落PCR（colony PCR）, 是一种快速、高通量筛选目的片段是否存在的方法，操作起来十分简单。筛选目的是为了得到含有目的片段的菌株进行测序， 提高效率。以大肠杆菌为例，一般来说，在转化了携带外源基因的质粒后，需要检查并确保所设计的质粒确实已经存在于细胞中了。
按照一般的步骤，可以把每个菌落挑出来进行培养提取质粒，然后质粒进行测序或者酶切验证目的片段。但是从培养细菌到最后送测序，花费太多时间。如果说只有一个菌落去验证，那工作量倒不是很大；万一有100个菌落，怎么办呢？那么，我们就可以进行菌落PCR筛选。
土参基本步骤
1. 单菌落挑取
把LB培养基倒入排枪槽中，然后用排枪加400μL LB培养基到48孔深孔板，用镊子拿已灭菌的小白枪头挑取平板上的单菌落并放到48孔深孔板中，同时在48孔深孔板和相应的表单上做
好记录，注意对于蓝白斑筛选的板子要挑的是白斑。挑好的48孔深孔板用封口膜盖好并做好相应标记（日期、板号等），用针头在封口膜打孔，把它放在37℃摇床上摇一个小时。
2. 菌落PCR反应元旦
配置好PCR反应的反应体系，把配好的反应液加到 96孔反应板中，用排枪加2.5μL的菌液到其中，注意在96孔反应板上做好标记。把96孔反应板放在PCR仪器上盖好橡胶垫，按照PCR反应条件设置反应程序，注意一定要把PCR仪器的盖子盖紧。
害马3. 琼脂糖凝胶电泳
一般先配置1.0%-1.2%琼脂糖凝胶（即称1.2g的琼脂糖加100ml的TAE），在96孔反应板每个管中加0.5μL的溴酚蓝，震荡均匀，然后点样，电泳好的琼脂糖凝胶拍照，命名保存。社保退休年龄
4. 判断阳性克隆并测序
根据琼脂糖凝胶电泳图条带来判断阳性克隆，把阳性克隆的菌液进行扩大培养，进行测序验证，看看是否有完全正确的序列。屁滚尿流>成都怎么去九寨沟
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