胚胎发育动力学参数对囊胚移植周期妊娠结局的
影响及预测模型建立
史艳彬张婉妮邵小光银
大连市妇女儿童医疗中心生殖与遗传医学中心，辽宁大连116000
［摘要］目的研究胚胎发育动力学参数对囊胚移植周期妊娠结局的影响，建立妊娠结局预测模型。方法选择2017年7月~2019年7月于大连市妇女儿童医疗中心生殖与遗传医学中心使用Time-lap培养箱培养并囊胚移植的704个周期，排除合并影响妊娠结局要素和移植两枚囊胚仅单胎妊娠的453个周期，余下251个周期的371个胚胎作为研究对象，进行回顾性队列研究。根据妊娠结局，分为未妊娠组(A组,N=115个周期,n=169个胚胎)和临床妊娠组(B组,N=136个周期n=202个胚胎)。分析患者胚胎的动力学指标t2、t3、t4、t5、t8、cc2、cc3、s2、s3、tM、tSB、tB与妊娠结局的关系，通过二元Logistic回归分析的方法，探索影响囊胚移植周期临床妊娠结局的胚胎发育动力学指标，建立临床妊娠结局预测模型，并对其进行验证。结果Logistic回归结果显示,t5、t8、s3、tM、tSB、tB对妊娠结局有预测价值。通过预测模型的建立，得到囊胚移植周期妊娠率预测方程为:P=1/(1+y),y=exp{(-3.803+0.007伊t5-0.004xt8-0.042xs3+0.023xtM+0.005xtSB+0.043xtB)j遥根据研究数据计算的预测结局概率与实际结局数据绘制ROC曲线，求得曲线下面积为0.702(95%CI：0.679~0.791,P=0.047)遥结论影响囊胚移植周
期临床妊娠结局的胚胎动力学指标风险因素包括t5、t8、S3、tM、tSB、tB°ROC曲线检验显示，根据上述风险因素建立的临床妊娠结局预测模型具有一定的预测价值。
［关键词］囊胚移植；临床妊娠；胚胎动力学；Logistic回归分析；预测模型
［中图分类号］R715［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2021)3(a)-0008-04
Influence of embryo development dynamics parameters on pregnancy outcome in blastocyst transfer cycle and establishment of prediction model
SHI Yan-bin ZHANG Wan-ni SHA O Xiao-guang银
Reproductive and Genetic Medicine Center,Dalian Municipal Women and Children's Medical Center,Liaoning Province,Dalian116000,China
［Abstract］Objective To study the influence of embryo development dynamics parameters on pregnancy outcome in blastocyst transfer cycle,and to establish a prediction model of pregnancy outcome.Methods A total of704cycles of blastocyst transfer cultured in Time-lap incubator from July2017to July2019in the Reproductive and Genetic Medicine Center of Dalian Municipal Women and Children's Medical Center were collected,among of them453cycles for the factors affecting preg
nancy outcome and the transfer of two blastocysts with singleton pregnancy were excluded, and the remaining371embryos of251cycles were lected as the rearch objects.According to the outcome of pregnancy,the patients were divided into two groups:non pregnancy group(group A,N=115cycles,n=169embryos)and clinical pregnancy group(group B,N=136cycles,n=202embryos).The relationship between the embryo dynamics indexes of t2,t3,t4,t5,cc2,cc3,s2,s3,tM,tSB,tB and pregnancy outcome was analyzed.Logistic regression analysis was ud to explore the embryo development dynamics parameters that affected the clinical pregnancy outcome of the blastocyst transfer cycle,and the clinical pregnancy outcome prediction model was established and verified.Results The results of Logistic regression showed that t5,t8,s3,tM,tSB and tB had predictive value for pregnancy outcome.
The prediction equation of pregnancy rate in blastocyst transfer cycle was:P=1/(1+y),y=exp{(-3.803+0.007xt5-0.004x t8-0.042xs3+0.023xtM+0.005xtSB+0.043xtB)}.The ROC curve was drawn bad on the predicted outcome probability calculated by the rearch data and the actual outcome data,and the area under the curve was0.702(95%CI:0.679-
0.791,P=0.047).Conclusion The risk factors of embryo dynamics in blastocyst transfer cycle include t5,t8,s3,tM,
tSB and tB.ROC curve test shows that the clinical pregnancy outcome prediction model bad on the above risk factors has certain predictive value.
___________________________________________________________［Key words］Blastocyst transfer;Clinical pregnancy;［基金项目］辽宁省自然科学基金项目(20180550568)__________Embryo dynamics;Logistic regression analysis;Predictive
▲通讯作者model
一年级班主任工作总结8CHINA MODERN MEDICINE Vol.28No.7March2021
尽管辅助生殖技术取得了重大进展，但体外受精-胚胎移植（in vitro fertility-embryo transfer,IVF-ET）面临的主要挑战仍然是选择最佳的单胚移植技术［1］遥增强胚胎选择过程将使体外受精成功率最大化罠大量文献报道，在侵入性技术PGT-A局限性的背景下, Time-lap技术作为以选择具有最高发展潜力的胚胎为目标来优化非侵入性技术方面展示了极大的优势［3-5］。本研究通过回顾性分析胚胎发育动力学指标与妊娠结局的关系，建立胚胎动力学指标预测囊胚移植后妊娠结局的模型，为临床工作提供理论基础，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
收集2017年7月~2019年7月于大连市妇女儿童医疗中心生殖与遗传医学中心使用Time-lap囊胚培养并行囊胚移植的704个周期的资料，排除合并影响妊娠结局要素和移植两枚囊胚仅单胎妊娠的453个周期，共纳入251个周期的371个胚胎。根据妊娠结局，将其分为未妊娠组（A组,N=115个周期，n=169个胚胎）和临床妊娠组（B组,N=136个周期，n=202个胚胎）。本研究经过大连市妇女儿童医疗中心医学伦理委员会审核批准。
纳入标准:①年龄臆40岁；②不孕原因为女方输卵管因素、排卵障碍和男性精液因素;③夫妻未见染色体异常。排除标准:①补救显微受精;②移植日子宫内膜<7mm；③移植2枚囊胚单胎妊娠;④宫腔因素（如息肉、粘连或黏膜下肌瘤）;⑤患有肥胖、生殖器畸形、高泌乳素血症、子宫内膜异位症、卵巢早衰、免疫性疾病;⑥患有高血压、糖尿病、肾病等内科合并症者遥1.2方法
控制性超促排卵按大连市妇女儿童医疗中心常规进行（长方案或拮抗剂方案）。行体外受精-短时受精未补救患者的受精卵置于37益、6%CO2、5%O2的Time-lap培养箱中（ESCO,Miri-TL），用一步培养液（Globle®total®LP，美国）进行全程培养；分别于取卵后第5、6天观察囊胚并评价（评价标准采取Gardner 评分系统）。依据形态学指标选择三级或四级囊胚移植（CC囊胚不用于移植）。
新鲜周期或冻融周期（HRT方案）囊胚移植，移植时内膜厚度逸7mm o囊胚移植12d后检测血人绒毛
膜促性腺激素（茁-HCG冤判断妊娠。如妊娠，胚胎移植后28~35d B超检查，确定临床妊娠及妊娠胎数。妊娠后继续使用雌孕激素维持妊娠，孕8~9周可开始逐渐减量，孕12~14周停药。
1.3观察指标
观察胚胎发育动力学指标对妊娠结局的影响，探索影响囊胚移植周期临床妊娠结局的胚胎发育动力学指标，建立临床妊娠结局预测模型，并对其进行验证。
以雌雄原核消失的时间点为t0；t2、t3、t4、t5、t8：合子分裂为2细胞、3细胞、4细胞、5细胞、8细胞的时间点；cc2：t3~t2；cc3：t5~t3；s2：t4~t3；s3：t8~t5；tM：桑椹胚形成的时间;tSB：囊胚开始形成的时间点；tB：囊胚完全形成的时间点o由一名胚胎师评估胚胎发育动力学指标。
长屿洞天
1.4统计学方法
采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数士标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。二元Logistic回归分析把对妊娠结局有显著影响的胚胎动力学指标作为自变量，妊娠情况作为因变量，使用逐步回归法统计，以P臆0.05为选入变量的标准,PN0.10为剔除变量的标准。采用Enter法，建立体外受精囊胚移植临床妊娠率预测方程式，并通过接受者操作特征（ROC冤曲线检验方程的有效性。
2结果
2.1两组胚胎发育动力学指标的比较
两组的t2、t3、t4、cc2、cc3、s2比较，差异无统计学意义渊P>0.05）；两组的t5、t8、s3、tM、tSB、tB比较，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）遥
表1两组胚胎发育动力学指标的比较（h,x±s）
组别周期数t2t3t4t5t8cc2
A组115 2.76±1.3614.43±2.9815.70±4.3028.61±4.3233.80±5.3311.89±1.95 B组136 2.15±0.3912.61±0.6713.05±0.6523.86±1.4627.89±5.0110.45±0.94 t值0.1810.1740.197 3.076 4.2130.179
P值0.1580.2380.1530.0440.0270.224
组别周期数cc3s2s3tM tSB tB
A组11514.37±1.93 1.25±2.96 5.05±3.2978.84±5.3287.48±5.99105.21±5.50 B组13611.58±1.380.39
±0.24 1.41±0.5566.48±6.5674.16±5.8286.39±6.16 t值 2.1670.119 5.93510.179 6.3738.154
P值0.0800.5000.0100.0000.0000.000
CHINA MODERN MEDICINE Vol.28No.7March2021|9
2.2建立临床妊娠结局相关动力学指标影响因素的预 测模型
以妊娠结局为因变量(未妊娠=1，持续妊娠=2),
以两组比较后差异有统计学意义的胚胎发育动力学
指标(t5、t8、s3、tM 、tSB 、tB )为自变量，建立妊娠结局
相关胚胎发育动力学指标的预测模型，根据表2中 数据可得体外受精囊胚移植后妊娠结局相关胚胎发
育动力学指标的预测模型:P=1/(1+y),y =-3.803 + 0.007 xt5 -0.004 xt8 -0.042 xs3 +0.023 xtM +0.005 xtSB +
虎耳兰0.043xtB 。
表2临床妊娠结局相关动力学指标影响因素的回归模型因素茁SE Waldx 2 值
OR 值95%CI P 值t50.0070.00324.619 1.007 1.001~1.0130.000t8-0.0040.02925.1240.9960.941~1.054
0.012s3
-0.042
0.079 5.551
0.9590.821〜1.120
0.000tM 0.0230.00977.467 1.023 1.005~1.0410.009tSB 0.0050.002
5.215
1.005
1.001~1.009
0.000tB
0.0430.02113.861 1.044 1.002~1.088
0.000常量-3.803
0.786
0.457
0.022
0.005~0.104
0.483
2.3预测模型的敏感度和特异性
小孩肚脐眼周围疼是怎么回事根据所得临床妊娠结局回归模型，计算临床妊娠
率预测概率，并与实际妊娠结局数据绘制ROC 曲线 (图1)，结果显示，曲线下面积为0.702 (95% CI ： 0.679~0.791 ,P=0.047)，对应的敏感度为84.8%，特异
出国旅游需要什么手续性为88.9%，总正确率为86.70%。提示妊娠结局相关 胚胎发育动力学指标的预测模型 一y =-3.803 +
0.007 xt5 -0.004 xt8 -0.042 xs3 +0.023 xtM +0.005 xtSB + 0.043xtB 有临床应用价值。
3讨论
人类胚胎学中的延时成像技术显示了胚胎独特
的发育特征，通过胚胎发育事件的确切时间能够获得 细胞周期长度和裂解模式［6］遥已有文献证明，胚胎发育
网名设计的速度与着床率有关叫移植特定发育速度的胚胎，最 终患者的妊娠结局不尽相同［8-9］。这可能是由于胚胎的
发育时间影响细胞周期的合成期(S 期)持续时间；此 外，染色体异常可能会延迟DNA 复制㈣，因此改变了 细胞周期和分裂的长度。对预测胚胎发育和体外受精 治疗结局预后因素的研究引起了学术界广泛的关注。
俄耳甫斯
目前，已有基于形态动力学参数的多种胚胎选择算法 和妊娠结局的预测算法，但大多数关于动力学发育的
人类胚胎研究都是基于在不同实验条件下产生的少
量样本胚胎的生存能力与一系列严格调控的细胞事
件有关，使用来自单个中心的数据很难被其他中心利 用。此外，对于体外受精周期，卵子成熟度的不同会影
响精子入卵的时间有差异，进而影响原核出现的时
间遥为了克服这些局限，本研究使用原核消失的时间
点作为t0，利用胚胎发育的相对速度作为因变量，基
于数据挖掘的模型具有较高的预测能力，可以有效地
用于区分植入潜能增加的胚胎遥
本研究的Logistic 回归分析显示,t5(OR=1.007,95%
CI ：1.001~1.013,P=0.000)、t8(OR =0.996,95%CI ：0.941~
1.054,P=0.012)、s3(OR =0.959,95% CI ：0.821~1.120, P=
0.000)是影响体外受精囊胚移植后妊娠结局的重要影
响因素。这与Meguer 等［11］(提出5细胞期分裂及后
期事件的发生时间是着床潜能的良好指标)以及Cruz 等［12］(通过胚胎镜观察胚胎，提出5细胞形成的时间
和桑葚胚形成的时间是预测胚胎发展潜能更可靠的
指标)的结论相一致。这些现象可能与人的胚胎从4~ 8细胞阶段是人胚胎基因组激活的关键时期有关问。
本研究中的 tM(OR = 1.023,95%CI ： 1.005~ 1.041 ,P=
0.009)、tSB (OR =1.005,95%CI ：1.001~1.009 ,P=0.000)、tB
(OR =1.044,95%CI ：1.002~1.088,P=0.000)也是妊娠 结局的重要影响因素。最近的延时显微镜观察表明， 致密化可能是人类胚胎活力的一个重要检查点，通过
其，胚胎可以感觉到并消除染色体异常的卵裂球［14］遥 2013年，Campbell 等［15］提出tSB 和tB 是具有显著预
测妊娠结局能力的指标。
综上所述，笔者利用着床前胚胎发育动力学指标 与妊娠结局的关系，提出一个回归模型以通过胚胎发
育动力学指标预测囊胚移植后是否有更高的妊娠可 能:P=1/(1+y),y =-3.803 +0.007 xt5 -0.004xt8 -0.042x
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s3+0.023xtM+0.005xtSB+0.043xtB，并检验其有效性。从心理上增加医患双方信心，减少焦虑情绪。然而，本模型的回顾设计和模型本身所固有的偏差将使其临床应用有待进一步开发和挖掘。
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(收稿日期：2020-07-07) CHINA MODERN MEDICINE Vol.28No.7March2021|11
