第43卷第1期2020年1月
河北农业大学学报
JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL UNIVERSITY
Vol.43 No.1爸爸讲故事
Jan. 2020reverd
非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达
及底物特异性分析
刘 欣，魏小雅，于宏伟，郭润芳
（河北农业大学 食品科技学院，河北 保定 071000）
摘要：侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）S62-9产生的抗菌肽（Brevibacillin，BBL）是一种非核糖
体多肽，由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌（B. laterosporus）S62-9质粒基
因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域（Nonribosomal peptide syntheta adenylation, NRPS-A）
基因，根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体。
将以上重组表达载体分别转化E. coli BL21、E. coli Rotta（DE3）和E. coli Origami B（DE3）受体细胞，
并用1 mmol/L异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷（IPTG）在16°C 200 r/min下进行诱导，将诱导产物用
房屋出售范文SDS-PAGE检测分析。结果显示，4种重组载体在E. coli BL21中均无表达，在E. coli Rotta（DE3）大量表
达但均以包涵体形式存在，在E. coli Origami B（DE3）均表达，但只有pET22b-N3这一重组表达载体出现了
可溶性融合蛋白。可溶性融合蛋白对赖氨酸有较高的腺苷化活性，表明该A结构域负责抗菌肽BBL中的赖氨
酸的识别和上载。该研究结果不仅为其它NRPS-A域的可溶性表达提供了方法，同时为研究抗菌肽BBL的生
物合成机制提供依据。
关 键 词：侧孢短芽孢杆菌；抗菌肽；非核糖体肽合成酶；腺苷化结构域；底物特异性
中图分类号：Q78开放科学（资源服务）标志码（OSID）：
一级护理文献标志码：A
Expression of adenylation domain of non-ribosomal peptide syntheta
in E. coli and analysis of substrate specificity
LIU Xin , WEI Xiaoya , YU Hongwei , GUO Runfang
(College of Food Science and Technology, Hebei Agricultural University, Baoding71000, China) Abstr
act: The antibacterial peptide produced by Brevibacillus laterosporus S62-9 is a non-ribosomal polypeptide,什么叫互质数
which are synthesized by non-ribosomal peptide syntheta. In this study, a nonribosomal peptide syntheta
adenylation (NRPS-A) gene was isolated from the putative gene cluster, and inrted into the prokaryotic expression
vector pET21b-N1, pET21b-B2, pET22b-N1, and pET22b-N3. The above recombinant expression vectors were
宇宙遨游transformed into recipient cells of E. coli BL21, E. coli Rotta (DE3), and E. coli Origami B (DE3), respectively.
Then, the cells were induced with 1 mmol/L isopropyl β-d-thiogalactopyranoside (IPTG) and were further incubated
at 16 °C and 200 r/min, followed by SDS-PAGE detection and analysis. The results show that all of the four
recombinant vectors were not expresd in E. coli BL21, but expresd in E. coli Rotta (DE3) with a large quantities
of inclusion bodies. Meanwhile, all of them were expresd in E. coli Origami B (DE3), but only the transformants
收稿日期：2019-12-11
基金项目：河北省自然科学基金（C2018204043）.
第一作者：刘欣（1993-），女，河北沧州人，硕士研究生，从事微生物抗菌肽方面的研究.
通信作者：郭润芳（1969-），女，河北怀安人，教授，主要从事食品微生物、食品生物科技方面研究.E-mail: 本刊网址：http: // hauxb. hebau. edu. cn: 8080 /CN/ volumn / home. shtml
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文章编号：1000-1573(2020)01-0110-06DOI：10.13320/jki.jauh.2020.0016
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