Axygenmini-prepare质粒提取试剂盒说明书
AxyPrep质粒DNA⼩量试剂盒
本试剂盒采⽤改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的⽅法达到快速纯化质粒
DNA的⽬的。适合于从1-4 ml细菌培养物中提取多⾄20 µg⾼纯的质粒DNA，⽤于测序、体外转录与翻
译、限制性内切酶消化、细菌转化等分⼦⽣物学实验。
⼀、试剂盒组成、贮存、稳定性
Cat. No. AP-MN-P-4 AP-MN-P-50 AP-MN-P-250
制备次数 4 preps 50 preps 250 preps
250 制备管 4 50
250
2 ml离⼼管 4 50
250
1.5 ml离⼼管 4 50
RNa A 10µl30µl150µl
Buffer S1 2 ml 15 ml 75 ml
Buffer S2 2 ml 15 ml 75 ml
Buffer S3 2.5 ml 21 ml 105 ml
熔化和凝固教案Buffer W1 2.8 ml 28 ml 135 ml
Buffer W2 concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 ml
Eluent 1 ml 5 ml 25 ml
说明书 1 1 1 RNa A：50 mg/ml，室温可贮存6个⽉，长期贮存于-20°C。
Buffer S1：细菌悬浮液。加⼊RNa A后，混合均匀，4°C贮存。
《在人间》
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。使⽤前，按试剂瓶上指定的体积加⼊⽆⽔⼄醇（可⽤100%⼄醇或95%⼄醇）。混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
⼆、注意事项
Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶⼿套和眼镜，避免沾染⽪肤、眼睛和⾐服，谨防吸⼊⼝⿐。若沾染⽪肤、眼睛时，要⽴即⽤⼤量清⽔或⽣理盐⽔冲洗，必要时寻求
医疗咨询。
爱思进⽣物技术（杭州）有限公司电话：0571-******** 传真：0571-******** E-mail:
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三、实验准备
西红柿鸡蛋盖浇面1. 第⼀次使⽤前，RNa A全部加⼊Buffer S1中，4°C贮存。
2. 准备⽆核酸和核酸酶污染的Tip头、离⼼管。
3. 第⼀次使⽤前，Buffer W2 concentrate中加⼊指定体积的⽆⽔⼄醇。
4. 使⽤前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37°C温浴加热溶解并冷却⾄室温后再使⽤。
四、操作步骤
催促第⼀次使⽤时，将试剂盒携带的RNa A全部加⼊到Buffer S1 中，混合均匀，4°C贮存。
1. 取1-4 ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使⽤丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g
离⼼1 min，弃尽上清。
2. 加250 µl Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有⼩的菌块。
* 确认Buffer S1中已加⼊RNa A。
3. 加250 µl Buffer S2，温和并充分地上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直⾄形成透亮的溶
液。此步骤不宜超过5 min。
失落的一角
* Buffer S2使⽤后⽴即盖紧瓶盖，以免空⽓中的CO2中和Buffer S2中的NaOH，降低溶菌效率。
* 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA的污染。
* 此步骤不宜超过5 min。
4. 加350 µl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8次，12,000×g离⼼10 min。
* 避免剧烈摇晃，否则将导致基因组DNA的污染。
步骤5～7可以选择负压法或离⼼法纯化质粒DNA。
A. 负压法
5A. 将质粒DNA制备管插到负压装置的接⼝上。吸取步骤4中的离⼼上清并转移到制备管中，开启并调节负压⾄-20-30英⼨汞柱，缓慢吸⾛管中溶液。
6A. 加500 µl Buffer W1，吸尽管中溶液。
7A. 加700 µl Buffer W2，吸尽管中溶液；以同样的⽅法再⽤700 µl Buffer W2 洗涤⼀次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上的指定体积加⼊⽆⽔⼄醇。
* 两次使⽤Buffer W2冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。
8A. 将制备管置于2 ml离⼼管（试剂盒内提供）中，12,000×g离⼼1 min。
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B. 离⼼法
5B. 吸取步骤4中的离⼼上清并转移到制备管（置于2 ml 离⼼管（试剂盒内提供）中）
，12,000×g 离⼼1 min ，弃滤液。
6B. 将制备管置回离⼼管，加500 µl Buffer W1，12,000×g 离⼼1 min ，弃滤液。
7B. 将制备管置回离⼼管，加700 µl Buffer W2，12,000×g 离⼼1 min ，弃滤液；以同样的⽅法
再⽤700 µl Buffer W2洗涤⼀次。弃滤液。
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加⼊⽆⽔⼄醇。 * 两次使⽤
Buffer W2冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。
8B. 将制备管置回2 ml 离⼼管中，12,000×g 离⼼1 min 。
9. 将制备管移⼊新的1.5 ml 离⼼管（试剂盒内提供）中，在制备管膜中央加60-80 µl Eluent 或去离⼦⽔，室温静置1 min 。12,000×g 离⼼1 min 。
沈阳北陵公园* 将Eluent 或去离⼦⽔加热⾄65℃将提⾼洗脱效率。
五、流程图
加250 µl Buffer S1
六个三>瘦身有氧运动加250 µl Buffer S2 加350 µl Buffer S3
加500 µl Buffer W1 加700 µl Buffer W2 加700 µl Buffer W2
加60-80 µl Eluent 或去离⼦⽔
裂解中和结合洗涤
洗脱
