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收稿日期：2022-05-13基金项目：国家重点研发计划项目（2017YFD0201106-08）；湖北省烟草公司科技项目（027Y2020-006）通讯作者：孙正祥（1980-），orcid/0000-0001-5009-5384，副教授，主要从事植物病害生物防治研究工作，E-mail ：sun-**********************；李锡宏（1964-），orcid/0000-0003-3974-5774，研究员，主要从事烟草绿色防控技
术研究与推广工作，E-mail ：**************
第一作者：孟祥佳（1995-），orcid/0000-0003-0992-9564，研究方向为植物病害生物防治，E-mail ：*****************
烟草—荞麦轮作对烟草黑胫病防治及土壤
微生态的调控作用
孟祥佳1，刘
洋1，黎妍妍2，许汝冰2，李传仁1，周
燚1，孙正祥1*，李锡宏2*
（1长江大学农学院，湖北荆州
434025；2湖北省烟草科学研究院，湖北武汉
430030）
摘要：【目的】明确烟草—荞麦轮作对烟草黑胫病防治及根际土壤微生物群落结构的调控作用，为利用烟荞轮作缓解烟草连作障碍及烟草黑胫病害提供科学依据。【方法】选择湖北省恩施市宣恩县烟草黑胫病发生较重的连作烟田为试验地点，设烟草—烟草—烟草（连作）和烟草—荞麦—荞麦—烟草（轮作）2个处理，通过计算田间病情指数评价烟荞轮作对黑胫病发生的影响；运用实时荧光定量PCR （qRT-PCR ）检测烟荞轮作下烟草根际黑胫病菌数量的变化；运用Illumina 高通量测序分析烟荞轮作对烟草根际微生物丰富度、多样性及群落结构的影响。【结果】烟草移栽后45、60、75和90d ，轮作田烟草黑胫病病情指数分别为2.57、18.03、24.93和75.88，与连作田相比分别下降35.59%、36.22%、46.53%和11.52%；轮作田烟草根际黑胫病菌孢子数量分别为1.05×104、2.19×104、5.25×105和1.32×105个/g ，与连作田相比分别降低43.55%、86.81%、95.73%和-43.86%。与连作相比，轮作提高了烟草根际土壤微生物群落的丰富度和多样性，轮作田细菌的Sobs 、Shannon 和Chao1指数分别上升23.70%、6.38%和24.32%，真菌的Sobs 、Shannon 和Chao1指数分别上升24.51%、16.57%、41.17%。在门水平上，轮作田中有益细菌门放线菌门（Actinobacteriota ）、绿
弯菌门（Chloro-flexi ）、酸杆菌门（Acidobacteriota ）的相对丰度分别较连作田提高6.58%、17.79%和38.22%，有益真菌门子囊菌门（As-comycota ）、壶菌门（Chytridiomycota ）的相对丰度分别较连作田提高20.47%和420.22%；在属水平上，烟荞轮作显著增加了芽孢杆菌属（Bacillus ）、慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium ）、念珠菌固体杆菌属（Candidatus_Solibacter ）、鞘氨醇单孢菌属（Sphingomonas ）、芽单胞菌属（Gemmatimonas ）和沙壤土杆菌属（Ramlibacter ）等有益细菌的丰度，显著减少了致病菌劳尔氏菌属（Ralstonia ）的丰度。【结论】烟荞轮作可有效降低田间烟草黑胫病病情指数和根际黑胫病菌数量，提高烟草根际真菌和细菌的群落丰富度和多样性，增加烟草根际多种有益菌的丰度，对改善土壤微生态环境、缓解连作障碍具有积极作用，具有较广的推广应用前景。
关键词：烟草黑胫病；烟草；荞麦；轮作；实时荧光定量PCR ；微生物群落中图分类号：S154.3；S567.236
文献标志码：A
文章编号：2095-1191（2022）06-1525-11
Effects of tobacco-buckwheat rotation on regulation of tobacco black shank prevention and control and soil microenvironment
MENG Xiang-jia 1，LIU Yang 1，LI Yan-yan 2，XU Ru-bing 2，LI Chuan-ren 1，
ZHOU Yi 1，SUN Zheng-xiang 1*，LI Xi-hong 2*
（1College of Agriculture ，Yangtze University ，Jingzhou ，Hubei 434025，China ；2
Tobacco Rearch Institute
of Hubei Province ，Wuhan ，Hubei 430030，China ）
Abstract ：【Objective 】To investigate the effects of tobacco-buckwheat rotation on regulation of tobacco black shank
occurrence and rhizosphere soil microbial community ，so as to provide a basis for alleviating continuous cropping obstacle of tobacco by tobacco-buckwheat rotation.【Method 】A continuous cropped tobacco field with vere tobacco black shank dia in Xuan ’en County ，Enshi City ，Hubei Province was lected as the experimental site ，and 2treatments were t ：tobacco -tobacco-tobacco （continuous cropping ）and tobacco-buckwheat-buckwheat-tobacco （buckwheat-tobacco rota-tion ）.The dia index of the field was calculated to evaluate the effect of tobacco-buckwheat rotation on black shank岱山旅游景点攻略
53卷
南方农业学报
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0引言
【研究意义】由烟草寄生疫霉（Phytophthora para-sitic var.nicotianae）侵染引起的烟草黑胫病（To-bacco black shank）是烟草上的一种毁灭性土传病害，几乎危害所有类型的烟草，对烟草行业造成巨大的经济损失（Guo et al.，2020；Ma et al.，2020）。烟草疫霉在没有寄主植物的土壤中也能存活数年，即使高抗品种也会受到病原菌侵染（孙计平等，2011）。化学药剂防治会使病原菌产生抗药性，在杀死病原菌的同时也会破坏土壤微生态结构（庄红娟等，2021）。多年烟草连作会降低土壤的理化性质，使土壤中有益微生物种群数量下降而病原菌数量呈上升趋势（杨宇虹等，2012）。轮作可提高土壤肥力和团聚体稳定性，调控土壤微生物群落结构，抑制根际病原菌的生长，减缓病原菌对寄主植物的侵染（李锐等，2015；韩芳等，2021）。因此，开展烟草轮作调控的研究，对缓解烟田连作障碍和田间黑胫病的防治具有重要意义。【前人研究进展】目前已有轮作防治烟草土传病害和改善土壤微生物群落的相关报道。钏有聪等（2016）通过平板试验证明大蒜根系分泌的苯并噻唑、二烯丙基二硫醚和烯丙基甲基二硫醚等抑菌物质可有效抑制烟草黑胫病菌菌丝生长，大蒜与烤烟轮作可降低烟
草黑胫病的发病率，增加烟叶产量；Fang等（2016）使用毛细管根模型证明油菜根系具有很强的吸引游动孢子的能力，并通过气相色谱—质谱联用仪（GC-MS）和平板试验证明油菜根
分泌的2-丁烯酸、戊酸、4-甲氧基吲哚、环己基异氰酸酯、苯并噻唑、2-（甲基噻唑）苯并噻唑和1-（4-乙基苯基）-乙烷对烟草黑胫病菌菌丝生长具有显著的抗菌活性，油菜与烟草轮作可显著降低烟草黑胫病的发病率，使烟叶产量提高128.8%；Niu等（2017）进行烟草分别与玉米、百合和萝卜轮作田间试验，结果显示，烟草—玉米轮作对烟草青枯病的防效最明显，与连作田相比发病率下降59.26%，并且烟草—玉米轮作土壤细菌群落多样性显著高于其他处理，确定细菌群落多样性与烟草青枯病率呈负相关；黎妍妍等（2021）通过Illumina Hiq扩增子测序技术证明，烟草移栽后100d，万寿菊与烟草轮作田中Sobs、Shannon 和Chao1等多样性和丰富度指数较连作田上升5.41%、4.00%和13.02%，轮作田提升土壤中酸杆菌门（Acidobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes）的相对丰度，显著增加了多种生防菌、降解菌和根际促生菌的菌属丰度，有利于缓解连作障碍；伍晓丽等（2022）发现烟草与玄参轮作对土壤真菌和细菌的多样性均无显著影响，但对土壤酶活性和pH有不良影响。结合前人研究发现，不同的作物与烟草轮作主要通过改善土壤微生态环境和分泌抑菌化合物两种机制减少烟草土传病害的发生和危害，但并非所有轮作方式都能获得理想效果，并且与当地气候及土壤环境有密切关系。烟草长期连作不仅影响作物的产量和品质，也会对土壤生态环境造成危害，如何有效解决连作障碍成为国内外学者的研究热点之一。荞麦
dia occurrence.The change of the number of tobacco black shank bacteria in rhizosphere under rotation was detected by quantitative real-time PCR（qRT-PCR）.Effects of tobacco-buckwheat rotation on richness，diversity and microbial community structure were analyzed through Illumina high-throughput quencing.【Result】Seem from45，60，75and90d after tobacco transplantation，tobacco black shank dia indexes of rotation cropping field were2.57，18.03，24.93and 75.88，decread by35.59%，36.22%，46.53%and11.52%compared with tho of continuous cropping field，respectively；the rhizosphere black shank spore of tobacco in the rotation cropping field were1.05×104，2.19×104，5.25×105and1.32×105conidia/g，respectively，43.55%，86.81%，95.73%and-43.86%lower than tho of continuous cropping field，respec-tively.Compared with continuous cropping，rotation cropping incread the richness and diversity of the tobacco rhizos-phere soil microbial community.Sobs，Shannon and Chao1indexes of bacteria in the rotation cropping field were in-cread by23.70%，6.38%and24.32%respectively.Sobs，Shannon and Chao1indexes of fungi incread by24.51%，16.57%and41.17%，respectively.At the phylum level，the relative abundance of beneficial bacteria Actinobacteriota，Chloroflexi and Acidobacteriota in the rotation field incread by6.58%，17.79%and38.22%respectively，while relative abundance of beneficial fungi Ascomycota and Chytridiomycota incread by20.47%and420.22%，respectively.At the genus level，the proportions of beneficial bacteria of Ba
cillus，Bradyrhizobium，Candidatus_Solibacter，Sphingomonas，Gemmatimonas and Ramlibacter were significantly incread in rotation field and the proportion of pathogenic bacteria of Ralstonia was significantly reduced.【Conclusion】Tobacco-buckwheat rotation can lower the tobacco black shank dia index and reduce the number of rhizosphere black shank pathogenic bacterium，increa the abundance，diversity of to-bacco rhizosphere fungi and bacteria community and rai abundance of tobacco rhizosphere beneficial bacteria，thereby improving soil microenvironment and alleviating continuous cropping obstacles，bringing a great popularization and appli-cation prospect.
Key words：tobacco black shank dia；tobacco；buckwheat；rotation cropping；quantitative real-time PCR；mi-crobial community
Foundation items：National Key Rearch and Development Program of China（2017YFD0201106-08）；Science and Technology Project of Hubei Tobacco Company（027Y2020-006）
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（Fagopyrum esculentum Moench）是一种生育期短、抗逆性强，适合种植于贫瘠、寒冷和高海拔环境的蓼科植物，具有很高的营养价值和药用价值（高扬等，2014；张晓娜等，2019；方齐国等，202
2）。已有研究表明荞麦与马铃薯轮作提高了土壤速效磷、全氮、有机质含量及酶活性，改变了微生物群落结构（刘亚军等，2018）；荞麦与油菜、玉米、马铃薯、燕麦4种作物轮作均提高了土壤大团聚体数量、稳定性及土壤的固碳能力（范倩玉等，2021）；荞麦与咖啡间作试验中荞麦通过吸引咖啡潜叶蛾对其自身的取食和寄生从而减少对咖啡的为害（da Consolação Rosado et al.，2021）。【本研究切入点】目前，国内外关于烟草—荞麦轮作（简称烟荞轮作）防治烟草黑胫病，调控土壤微生物群落结构的研究尚未见报道。【拟解决的关键问题】选择湖北省恩施市宣恩县烟草黑胫病发病严重的烟田进行烟荞轮作，调查田间烟草黑胫病发病情况，运用实时荧光定量PCR检测烟荞轮作下烟草根际黑胫病菌数量的变化，运用Illumina高通量测序分析烟荞轮作对烟草根际微生物丰富度、多样性及群落结构的影响，明确烟荞轮作对烟草黑胫病的防治作用，为缓解烟草连作障碍及烟草黑胫病害提供科学依据。
1材料与方法
1.1试验区及试验材料
1.1.1试验材料供试烟草：云烟87，由湖北省烟草科学研究院提供；供试荞麦：甜荞，由长江大学农学院提供。
1.1.2供试病原菌菌株烟草黑胫病菌（P.para-sitic var.nicotianae）、水稻纹枯病菌（Rhizoctonia so-la
ni）、玉米茎基腐病菌（Fusarium moniliforme）、西瓜枯萎病菌（F.oxysporum f.sp.niveum）和小麦赤霉病菌（F.graminearum），均由长江大学农学院植物与微生物互作研究室提供。
1.1.3主要试剂土壤微生物DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶检测回收试剂盒和细菌质粒DNA提取试剂盒（Omega Engineering）；pMD18-T载体（宝生物工程有限公司）；大肠杆菌DH5α（上海唯地生物技术有限公司）；qPCR SYBR Green Master Mix试剂盒（翌圣生物科技股份有限公司）。
1.1.4主要仪器T100PCR仪、BIO-CFX96荧光定量PCR仪、Universal Hood II凝胶成像仪（伯乐生命医学产品有限公司）；NanoDrop2000超微量分光光度计（广州硕谱生物科技有限公司）；Mupid®-2plus 电泳仪（宝生物工程有限公司）。
1.1.5试验地点及烟草和荞麦种植试验地点位于海拔800m的湖北省恩施市宣恩县椒园镇（北纬30°01′，东经109°4′），常年种植烟草，黑胫病逐年加重，发病率接近100%。试验设2个处理，处理1：连作，烟草—烟草—烟草，连续种植烟草（C）；处理2：烟荞轮作，烟草—荞麦—荞麦—烟草（R），即第1年4月在烟草移栽前20d整地，按烟草生产技术要求在烟田施底肥、起垄、定距移栽烟苗，在烟草行间种植荞麦，9月底烟叶和荞麦收获后，清除田间烟杆、荞麦桩及杂草，并及时对烟田进行深翻，然后按荞麦生产技术要求整地、施肥和种植荞麦；第2年4月继续整地、起垄，种植烟草和荞麦，要求轮换种植烟草和荞麦的位置，如此反复进行烟草—荞麦—荞麦—烟草轮作种植。每处理3次重复，共6个小区，每小区种植50株烟草。
1.2试验方法
1.2.1烟荞轮作下烟草黑胫病发病情况调查分别在烟草移栽后45、60、75和90d，每小区定点10株烟草，调查烟草—烟草—烟草（C）和烟草—荞麦—荞麦—烟草（R）模式下的烟草黑胫病发生情况。黑胫病病情分级参照GB/T23222—2008《烟草病虫害分级及调查方法》，调查轮作田与连作田烟株的黑胫病发生情况，并根据公式计算病情指数。
病情指数=∑（各级病株数×该病级值）/调查总
株数×最高级值）×100
1.2.2烟荞轮作对烟草根际黑胫病菌数量的影响
参照Cui等（2015）的方法收集烟草根际土壤。分别在烟草移栽后45、60、75和90d，每小区定点取样10株烟草根际土壤，烟草—烟草—烟草（C）和烟草—荞麦—荞麦—烟草（R）2组处理依据取样时间分别记作C（C_45、C_60、C_75、C_90）、R（R_45、R_60、R_ 75、R_90），立即装入冷却箱送实验室。按照土壤微生物DNA试剂盒说明书提取烟草根际土壤总DNA，经1%琼脂糖凝胶电泳检测，通过超微量分光光度计检测土壤总DNA浓度和纯度，-20℃保存备用。
根据NCBI数据库中烟草黑胫病的parA1基因，并利用NCBI中的Primer-BLAST设计特异性引物Tb166F
（5'-CCACGGCAAAACCTACA-3'）/Tb166R （5'-CGGAAGTTCATTTCGGAT-3'）（由武汉华大基因有限公司合成）用于烟草黑胫病菌DNA的常规和实时荧光定量PCR检测，其扩增长度为166bp。采用CTAB法提取供试病原菌DNA，分别用水稻纹枯病菌、玉米茎基腐病菌、西瓜枯萎病菌和小麦赤霉病菌DNA检测该引物的特异性。以烟草黑胫病菌DNA为模板，用特异性引物进行常规PCR扩增。反
孟祥佳等：烟草—荞麦轮作对烟草黑胫病防治及土壤微生态的调控作用
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南方农业学报
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应体系25.00μL：2×Taq Master Mix12.5μL，DNA 模板1.0μL，正、反向引物各1.0μL，加ddH2O至25.0μL。扩增程序：95℃预变性2min；95℃30s，55℃30s，72℃60s，进行35个循环；72℃延伸8min，16℃保存。反应结束后，PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测及回收，将回收产物克隆至pMD18-T 载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，经蓝白斑筛选后提取质粒DNA并送至武汉华大基因有限公司进行核酸测序。
参照申永铭等（2017）的方法计算得出质粒DNA初始浓度为3.46×1010copies/μL，-20℃保存待用。
采用10倍稀释法对初始质粒进行稀释，制成3.46×100~3.46×108copies/μL9个浓度梯度的质粒标准品，每个梯度进行常规PCR和实时荧光定量PCR 扩增，5次重复。实时荧光定量PCR使用qPCR SYBR Green Master Mix试剂盒进行扩增。反应体系20.0μL：上、下游引物各1.0μL，qPCR SYBR Green Master Mix10.0μL，DNA模板1.0μL，加ddH2O至20.0μL。扩增程序：96℃预变性1min；95℃15s，55℃35s，72℃30s，进行35个循环；72℃延伸10min，4℃保存。通过凝胶电泳成像及扩增曲线检测引物Tb166F/Tb166R的灵敏度，通过扩增曲线对应的C t 值绘制标准曲线。以上述定点取样的土壤总DNA 为模板，用特异性引物Tb166F/Tb166R进行实时荧光定量PCR扩增，每个样品5次重复，根据C t值计算土壤中黑胫病菌的含量。
1.2.3烟荞轮作对烟草根际微生态的影响烟草移栽后75d采集根际土壤，送至上海美吉生物公司进行高通量测序分析。具体方法：取0.5g土壤样品，用DNeasy ProwerSoil Pro Kit试剂盒提取土壤总DNA，以此为模板，用细菌引物338F（5'-ACTCCTAC GGGAGGCAGCAG-3'）/806R（5'-GGACTACHVGG GTWTCTAAT-3'）和真菌引物ITS1F（5'-CTTGGTC ATTTAGAGGAAGTAA-3'）/ITS2R（5'-GCTGCGTT CTTCATCGATGC-3'）进行PCR扩增。在美吉生物云平台（https：//）进行数据分析，使用Mothur计算Alpha多样性中的Sobs、Chao1、Shannon和Coverage等指数，使用Upar进行聚类分析，并根据聚类分析结果对分类单元进行排序生成
微生物群落分布组成Heatmap热图，使用Student’s T 检验进行Alpha多样性的组间差异分析；使用基于Bray-Curtis距离算法的主坐标分析（PCoA分析）检验样本间微生物群落结构的相似性。
1.3统计分析
使用Excel2019和SPSS13.0进行试验数据统计分析，对各组数据均采用Duncan’s新复极差法进行多重比较分析。
2结果与分析
2.1烟荞轮作对烟草黑胫病的防治作用
由表1可看出，烟草移栽后45、60、75和90d，轮作田的烟草黑胫病病情指数均显著低于连作田（P<0.05，下同），分别较连作田低35.59%、36.22%、46.53%和11.52%。
2.2烟荞轮作对烟草根际黑胫病菌数量的影响
2.2.1引物特异性验证结果常规PCR检测烟草黑胫病菌DNA能扩增出约160bp大小的特异性条带，而其他供试菌株和ddH2O均未扩增出条带（图1-A）；实时荧光定量PCR检测5种供试病原菌DNA 中只有烟草黑胫病菌DNA有C t值，其他病原菌和ddH2O均无C t值（图1-B），表明扩增所用引物具有较强的特异性，可用于后续烟草黑胫病菌的检测。
2.2.2标准曲线建立质粒DNA经10倍系列稀释后，制成
3.46×100~3.46×108copies/μL共9个浓度梯度的质粒标准品，进行常规PCR和实时荧光定量PCR 扩增。由图2-A可知，在常规PCR中，条带亮度随模板拷贝数浓度降低而逐渐变暗，当拷贝数浓度为3.46×103copies/μL时条带模糊不清，因此常规PCR的模板稀释下限为3.46×104copies/μL。由图2-B可知，实时荧光定量PCR中C t值随模板浓度降低而增加，可检测到质粒DNA浓度下限为3.46×101copies/μL，因此实时荧光定量PCR的模板稀释下限为3.46×101 copies/μL。实时荧光定量PCR灵敏度是常规PCR 的1000倍，且熔解曲线均为单峰（图2-C），证明各浓度不存在特异性扩增。根据扩增曲线建立烟草黑胫病菌和C t值间的标准曲线，黑胫病菌（x）与对应的C t值（y）间具有良好的线性关系，回归方程为y= -3.1571x+41.953，相关系数R2为0.9992。
处理Treatment
轮作Rotation cropping 连作Continuous cropping
45d
2.57±0.39b
3.99±0.97a
60d
18.03±0.14b
28.27±2.78a
75d
24.93±0.17b
46.62±0.81a
90d
75.88±4.85b
85.76±1.66a
表1不同处理的烟田烟草黑胫病病情指数
Table1Dia index of tobacco black shank dia of different treatments
同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著（P<0.05）
Different lowerca letters in the same column of data indicated significant difference between different treatments（P<0.05）
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2.2.3烟草根际黑胫病菌的实时荧光定量PCR 检测提取烟草—烟草—烟草（C ）和烟草—荞麦—荞麦—烟草（R ）的土壤总DNA ，根据实时荧光定量PCR 标准曲线进行定量分析，结果（表2）显示，烟草移栽45、60和75d 的轮作田黑胫病菌孢子数量均显著低于连作田，分别较连作田低4
3.55%、86.81%和95.73%；移栽后90d 时，连作田的黑胫病菌孢子数量显著低于轮作田，较轮作田低43.86%。
2.3烟荞轮作对烟草根际细菌和真菌多样性的影响
2.3.1烟草根际微生物的Alpha 多样性、韦恩和PCoA 分析微生物Alpha 多样性指数中，Sobs 指数、Shannon 指数和Chao1指数分别表示微生物OTU 丰度、多样性和丰富度。由表3可知，烟草移栽后75d ，轮作田和连作田烟草根际土壤真菌及细菌群落的覆面字
盖率均高于98.00%，表明各处理土壤样品中的绝大多数序列均被检出，测序读长有利于后续相关分析的准确性。R_75土壤细菌和真菌群落Shannon 指数、Chao1指数均显著高于C_75处理，细菌群落Sobs 、Shannon 和Chao 1指数分别较C_75高23.70%、6.38%和24.32%；真菌群落Sobs 、Shannon 和Chao 1指数分别较C_75高24.51%、16.57%和41.17%。由韦恩分析（图3-A 和图3-B ）可知，R_75与C_75共有细菌及真菌OTU 分别为2577和693；R_75特有细菌OTU 为1176，是C_75特有细菌OTU 的2.57倍；特有真菌OTU 为587，是C_75特有真菌OTU 的1.75倍。PCoA 分析结果（图4-
A 和图4-B ）显示，R_75的细菌和真菌样本分组椭圆聚集在一、四象限，C_75的细菌和真菌样
图1引物的特异性验证
Fig.1Verification of primer specificity
A ：常规PCR 产物；
B ：实时荧光定量PCR 扩增曲线。M ：DL2000DNA Marker ；a ：烟草黑胫病菌；b ：水稻纹枯病菌；c ：玉米茎基腐病菌；d ：西瓜枯萎
病菌；e ：小麦赤霉病菌；f ：ddH 2O
A ：Conventional PCR products ；
B ：qRT-PCR amplification curves.M ：DL2000DNA Marker ；a ：Phytophora parasitica var.nicotiana ；b ：Rhizoctonia
solani ；c ：Fusarium moniliforme ；d ：F .oxysporum f.sp.niveum ；e ：F .graminearum ；f ：ddH 2O
图2引物的灵敏度检测惹人注目的意思
Fig.2Detection of primer nsitivity
A ：10倍稀释法常规PCR 产物电泳图谱；
B ：10倍稀释法实时荧光定量PCR 扩增曲线；
C ：10倍稀释法实时荧光定量PCR 熔解曲线。M ：DL2000
DNA Marker ；a~i ：拷贝数浓度3.46×100~3.46×108新生婴儿起名
copies/μL
A ：Electrophoregram of PCR products by conventional 10-fold rial dilutions ；
B ：qRT-PCR amplification curves of 10-fold rial dilutions ；
C ：qRT-PCR melting curves of 10-fold rial dilutions.M ：DL2000DNA Marker ；a-i ：Copy number concentration 3.46×100-3.46×108
会议纪要的特点
copies/μ
L
2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp
A
M
a
b
c
d
e
f
Amplification
拥抱情人节
B
R F U
10008006004002000Cyeles
10
2030
40
A
250bp 100bp
冷门行业
M
a b
c
d
e
f
g h
i
Amplification
R F U
1600
1400120010008006004002000
Cyeles
10
2030
快速充电40
B
C Temperature ，Celsius
-d （R F U ）/d T
200150100500Melt peak
65
70
758085
90
95
a b c d e f g h
i
a
bcdef
孟祥佳等：烟草—荞麦轮作对烟草黑胫病防治及土壤微生态的调控作用
