高效液相色谱法

更新时间:2023-06-25 15:10:39 阅读: 评论:0

高效液相色谱知识收藏
 
 
 
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()、开机:
    1、打开计算机,进入Windows NT (或Windows 2000)画面,并运行Bootp Server程序。
    2、打开 1100 LC 各模块电源。
    3、待各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online儿童灯谜图标,化学工作站自动与1100LC通讯,进入的工作站画面。
    4、从View”菜单中选择Method and Run control”画面, 单击View”菜单中的Show Top Toolbar”,Show status toolbar”,System diagram,Sampling diagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
  5、把流动相放入溶剂瓶中。
  6、打开Purge阀。
  7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
  8 、设Flow5ml/min,单击OK
  9、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump control选项,选中On,单击OK,则系统开始金榜题名Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。
  10、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump Control选项,选中Off,单击Ok关泵, 关闭Purge  valve
  11、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入Pump编辑画面,设Flow1.0ml/min
  12、单击泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok
 
(二)数据采集方法编辑:
    1、开始编辑完整方法:
    ●从Method”菜单中选择Edit entire method 项,如上图所示选中除Data analysis ”外的三项,单击Ok,进入下一画面。
    2、方法信息:
    ●在Method Comments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。
闯三关    ●单击Ok 进入下一画面。
    3、泵参数设定:(以二元泵为例)
      ●在Flow”处输入流量,1ml/min,在Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Inrt 一行Timetable ,编辑梯度。在Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
      单击Ok进入下一画面。
    4、自动进样器参数设定:
      选择合适的进样方式, 进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。Standard Injection----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。Injection with Needle Wash----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。U injector program---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。
    ●点击Ok进入下一画面。
    5、柱温箱参数设定:
      ●在Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击more>> 游戏作文键,如图所示,选中Same as left---使柱温箱的温度左右一致。
      ●点击ok进入下一画面。
    6VWD检测器参数设定:
      ●在语文书六年级上册Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,254nm,  Peak width (Respon time)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, >0.1min  (2s)

       Timetable 中可以Inrt”一行,输入随时间切换的波长,如1min  ,波长=300nm。点击ok进入下一画面。
     7DAD检测器参数设定:
      ●检测波长: 254nm,BW=30nm,    参比波长=350nm,BW=100nm; 
      ●检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW 一般选择最大吸收值一半处
的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用 100nm作为缺省值。Peak widthRespon time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的 灯。
      ●点击Ok进入下一画面。
     8RID检测器参数设定:
      牛希济●色谱条件
        进样体积: 20ul       光学单元温度:  Off
        极性:           峰宽(响应时间) :  4s 
       ●“Optical Unit Temperature---若环境温度控制在±2,设定为Off,  若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5,以防样品在池中沉淀。Peak width---大多数分析设为4S,只有在高速分析下设为更短。Automatic recycling after analysis---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。
       ●点击RID图标,选择RID  Control Heater 设为On,若要循环流动相,必须将Recycling Valve”设为ON。手动purge 参比池,将其设为On,并输入Purge 时间。 
      9FLD检测器参数设定:
        色谱条件: 
          样品:P/N 01018-68704  用甲醇稀释为1:10
            进样体积:5ul
            柱温箱:  30   EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10
            响应时间=4s.    停止时间: 出峰完毕。
            Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,Zero Order
            Emission:  发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,Zero Order
            PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。
          Peak width”:大多数应用设为4s,只有快速分析采用小的设定值。
            Multi Ex 多波长及光谱(激发)。
            Multi Em:多波长及光谱(发射)。
            同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。
      10、在 Run time checklist ”中选中Data acquisition”,单击Ok
      11、单击Method”菜单,选中Save method as”,输入一方法名,如test”,单击Ok
      12、从菜单 View”中选中Online signal ,选中Windows 1,然后单击Change ,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)
      13、从Run  control ”菜单中选择Sample info”选项,如上图所示,输入操作者名称,在练明乔Data file ”中选择Manual”或Prefix”。

      区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。Prefix—Prefix 框中输入前缀,在Counter 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001vwd0002……。
    14、从Instrument 菜单选择System on
    15、等仪器Ready,基线平稳,从Method菜单中选择Run method”,进样。
 
(三)、数据分析方法编辑:
    1、从View”菜单中,单击Data analysis”进入数据分析画面。
    2、从File”菜单选择纽约有哪些大学Load signal”,选中您的数据文件名,如下图所示。单击Ok
    3、做谱图优化,Graphics”菜单中选择Signal options”选项,。从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间,单击ok,或选择U Ranges 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。
    4、积分:
      (1)、从Integration”中选择 Auto integrate,如积分结果不理想,再从菜单中选择Integration  Events”选项,选择合适的Slope nsitivityPeak widthArea rejectHeight reject
      (2)、从Integration”菜单中选择Integrate”选项, 则数据被积分。
      (3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。

      (4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。
    5、打印报告:

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