第30卷第1期上海海洋大学学报Vol.30,No.l 2021年1月JOURNAL OF SHANGHAI OCEAN UNIVERSITY Jan.,2021文章编号：1674-5566（2021）01403998DOI：10.12024/jsou.20190302571
七彩神仙鱼繁殖间期与繁殖期体表黏液的部分组分分析
周建桥I"，欧阳明艳宀3，温彬I"，陈再忠I"，高建忠也3
（1.上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室，上海201306； 2.上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海201306； 3.上海海洋大学水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心，上海201306）
摘要：为了探究七彩神仙鱼体表黏液在繁殖周期中组分的变化规律，测定七彩神仙鱼体表黏液中皮质醇、免疫球蛋白M、总蛋白、乳酸和葡萄糖的含量变化。结果表明，七彩神仙鱼体表黏液中皮质醇、免疫球蛋白M、总蛋白、乳酸和葡萄糖的含量均受亲鱼性别和繁殖时期显著影响，且繁殖时期与性别之间存在显著交互作用。
如何买车险最划算在幼鱼平游期,5种组分含量在雌雄亲鱼之间存在显著差异。七彩神仙鱼开始“喂奶”后其体表黏液成分发生显著变化，尤其是雄鱼会分泌更多的营养与免疫组分来满足幼鱼需求。
关键词：七彩神仙鱼；体表黏液；繁殖期；繁殖间期
中图分类号：S917；S965.8文献标志码：A
七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）原产于南美亚马逊河流域，因其独特外形和艳丽色彩，有着热带观赏鱼之王的美称⑴。七彩神仙鱼具有独特的抚育行为，即仔鱼在孵化后会以亲鱼体表分泌的黏液为食，俗称“喂奶”。亲鱼“乳汁”分泌质量会直接影响仔鱼的生长与成活。因此，查明七彩神仙鱼繁殖期体表黏液组分变化，提升“乳汁”分泌品质，对七彩神仙鱼健康苗种繁育具有重要意义。目前，国内外有关七彩神仙鱼抚育行为的研究已有较多报道3】，但对于七彩神仙鱼体表黏液组成尤其是抚育期“乳汁”成分变化的研究较少。
本研究将调查七彩神仙鱼雌、雄亲鱼繁殖周期内体表黏液中皮质醇、免疫球蛋白M、总蛋白、乳酸和葡萄糖的变化规律，并通过变化情况来评估其“喂奶”能力。
1材料与方法
11实验亲鱼
选取规格统一且来自同一窝的10对七彩神仙鱼亲鱼，由上海海洋大学观赏水族实验室提供。将七彩神仙鱼一个完整繁殖周期分为6个阶段，包括繁殖间期、产卵期、孵化期、平游期、平游1周、平游2周。
红茶的好处其中产卵期、孵化期、平游期、平游1周、平游2周可统称为繁殖期（表1）o
表1七彩神仙鱼繁殖周期阶段划分
Tab.1The division of discus fish breeding period
阶段Period阶段划分1Period division1阶段划分2Period division2繁殖间期Interval-breeding亲鱼在仔鱼下身后至下一次亲鱼开始产卵繁殖间期产卵期Eggs-spawned亲鱼开始产卵至鱼卵孵化第1条仔鱼出膜
孵化期Eggs-hatched第1条仔鱼出膜鹏化至第1条仔鱼可以平游
平游期Free-swimming第1条仔鱼平游至所有仔鱼可以在亲鱼身边啃食黏液繁殖期平游1周Free-swimming1week指所有仔鱼平游之后的第7天的24h内
平游2周Free-swimming2weeks指所有仔鱼平游之后的第14天的24h内
收稿日期：2019-03-28修回日期：2019-10-29
基金项目：上海市青年科技英才扬帆计划（19YF1419400）；上海市农委科技兴农重点攻关项目（沪农科2015-19）
作者简介：周建桥（1992—），男，硕士研究生，研究方向为观赏鱼的繁殖与育种。E-mail：
通信作者：陈再忠，E-mail:chenzz@shou.edu
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40上海海洋大学学报30卷
12样品采集与检测
从亲鱼处于繁殖间期开始便对其进行黏液采集，直至6个繁殖阶段全部完成。采集时用灭菌的银子夹取已称重的脱脂棉在鱼体表面进行擦拭，吸附黏液后将其放入已称重的1•5mL离心管，保存于-80乜冰箱中，用于皮质醇、免疫球蛋白M、总蛋白、乳酸与葡萄糖的含量测定。检测方法按照皮质醇酶联免疫试剂盒、免疫球蛋白M酶联免疫试剂盒、BCA法蛋白定量测定试剂盒、乳酸试剂盒和葡萄糖测定试剂盒（中国，南京住成）的操作说明进行。
13数据处理与分析
采用Koimogorov-Smirnov检验和Levene检验对原始数据进行正态分布和方差齐性分析。对5种指标进行雌雄性别与繁殖时期的双因子方差分析（SPSS20.0）o数据结果均以平均值土标准差表示。
2结果
2.1体表黏液皮质醇含量变化
七彩神仙鱼繁殖周期内皮质醇含量受繁殖时期与性别的影响显著（表2）。在平游期，雌鱼体表黏液皮质醇含量显著高于雄鱼，而在其他时期，雌雄间的差异不显著。雌雄色体表黏液中皮质醇的含量均表现出先降后升再下降的趋势（图1）0
表2繁殖时期与性别对七彩神仙鱼体表黏液成分的影响双因子方差分析
Tab.2Two-way ANOVA results on effects of sampling period and
gender on the discus fish component of the epidermal mucus如何关机
因子皮质醇免疫球蛋白M总蛋白乳酸葡萄糖Factor Cortisol IgM Total protein Lactic Gluco 性别Gender0.0280.004P<0.001P<0.001P<0.001时期Period0.001P<0.001P<0.001P<0.001P<0.001性别X时期Gender X Period0.0300.002P<0.001P<0.001P<0.001
' u o r P J +J u e o u o o
sspid
o s -70r A a
E3雌性Female■雄性Male
繁殖间期产卵期孵化期平游期平游!周平游2周Interval-breeding Iiggs-spawned Eggs-hatched Free-swinnning Free-swimming Free-swimming
1week2weeks
时期Period
图中数据表示为平均值土标准差5=3)：*表示同一时期内雌、雄性存在显著差异(P<0.05)，不同大小写字母分别表示雄、雌性在不同时期存在显著差异(P<0.05)
Data were prented as Mean±SI)(n=3).The*indicates there is a significant difference between the male and female in a same period. Columns in the same gender with different letter superscripts mean significant difference(P<0.05),the upperca letter denotes male,the lowerca letter denotes fenuile.
图1七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液皮质醇质量浓度的变化
Fig.1Cortisol mass concentration in epidermal mucus of discus fish during breeding periods
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I 期周建桥，等：七彩神仙龟繁殖间期9繁殖期体表黏液的部分组分分析
41
2. 2体表黏液免疫球蛋白M 含量变化七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液免疫球蛋
白M 受繁殖时期与性别的影响显著（表2）。在
杜鹃花什么时候开平游期，雄鱼体表黏液免疫球蛋白M 质量浓度显
著高于雌鱼，而在其他时期，雌雄间的差异不显 著；雌雄鱼体表黏液中免疫球蛋白M 的质量浓 度均表现出下降、上升、再下降的趋势（图2）。
2.3体表黏液总蛋白含量变化
七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液总蛋白质
量浓度受繁殖时期与性别的显著影响（表2）。在 繁殖期间、孵化期、平游期雄鱼体表黏液总蛋白
质量浓度显著高于雌鱼，而在其他时期，雌性显
著高于雄性。雌雄鱼体表黏液中总蛋白的含量
均表现出下降、上升、再下降的趋势（图3）。
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'U O I4PJ4U O O U O 。S S P U 11I
1 200C3 雌性 Female ■雄性Male音准
1 000
8006004002000
A
繁殖间期
B
产卵期
Eggs-spawned
A*
时期Period
Interval-breeding 图中数据表示为平均值土标准差(n=3)o *表示同一时期内雌、雄件存在显著差异(P<0.05)，不同大小母分别表示雄、雌性 在不同时期存在显著差异(P <0. 05 ) o
Data were prented as Mean ± SD ( n = 3 ). The * indicates there is a significant difference between the male and female in a same period. Columns in the same gender with different
letter superscripts mean signiGcant (lifference ( P <0. 05 ) , the upperca letter denotes male, the lowerca letter donotes female.
图2七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液免疫球蛋白M 质量浓度的变化
Fig. 2 IgM concentration in epidermal mucus of discus fish during breeding periods
男孩的小名(、E 、
8T1)、UOI4RIPU30UO 。SSRU1
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1200010000800060004000
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■雄性Male
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繁殖间期 产卵期
Interval-breed i n g Eggs-spawned
1 week
2 weeks
时期Period
图中数据表示为平均值土标准差(n=3) *表示同•时期内雌、雄性存在显著差异(PV0.05)，不同大小写字母分别表示雄、雌性在不同时期存在显著差异(P<0.05)。
Data were prented as Mean ± SI) ( n = 3 ). The * indicates there is a significant difference between the male and female in a same period. Columns in the same gender with different letter superscripts mean significant difference (P <0.05 ) , the upperca letter denotes male , the lowerca letter denotes female.
图3七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液总蛋白质量浓度的变化
Fig. 3 Total protein mass concentration in epidermal mucus of discus fish during breeding periods
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上海海洋大学学报30卷
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2.4体表黏液乳酸含量变化
七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液乳酸浓度 受繁殖期与性别的影响显著（表2）。在平游期与
平游1周，雄鱼体表黏液乳酸浓度显著高于雌
鱼，而在其他时期，雌雄差异不显著。雌鱼体表 黏液中乳酸的浓度表现为逐渐下降的趋势。雄
鱼体表黏液中乳酸的浓度表现为下降、上升、再 下降的趋势（图4）。
2.5体表黏液葡萄糖含量变化
七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液葡萄糖质 量浓度受繁殖时期与性别的影响显著（表2）。在
平游期雄鱼体表黏液葡萄糖质量浓度显著高于 雌鱼，而在其他时期，雌雄差异不显著。雌雄鱼 体表黏液中葡萄糖的质量浓度均表现岀下降、上
升、再下降的趋势（图5）。
EJ 雌性 Female 5. Or
4.03.02.0
1.00
■雄性Male
繁殖间期 产卵期 孵化期 平游.期. 平游!周 平游2周Interval-breeding Eggs -s pawned Eggs-hatched
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Data were prented as Mean ± SD （ n = 3 ） . The * indicates there is a significant difference between the male and female in a same period. Columns in the same gender wit
h different letter superscripts mean significant difference （P <0.05） , the upperca letter denotes male, the lowerca letter denotes female. .
图4七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液乳酸浓度的变化
Fig. 4 Lactic acid concentration in epidermal mucus of discus fish during breeding periods
m m )
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0雌性Female
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图中数据表示为平均值土标准差5=3）。*表示同一时期内雌、雄性存在显著差异（P<0.05），不同大小写字母分别表示雄、雌性 在不同时期存在显著差异（P <0.05）。
Data were prented as Mean ± SD （ n = 3 ）. The * indicates there is a significant difference between the male and female in a same period. Columns in the same gender with different letter superscripts mean significant difference （P <0.05） , the upperca letter denotes male, the lowerca letter denotes female.
图5七彩神仙鱼繁殖周期内体表黏液葡萄糖质量浓度的变化
Fig. 5 Gluco mass concentration in epidermal mucus of discus fish during breeding periods
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1期周建桥，等：七彩神仙鱼繁殖间期与繁殖期体表黏液的部分组分分析43
3讨论
31七彩神仙鱼繁殖周期内皮质醇变化
皮质醇属于糖皮质类激素，参与调节鱼类体内多种生理生化反应，如物质代谢、渗透压、免疫功能、性腺成熟等W大多数鱼类在受到外源性刺激后，血浆中的皮质醇会在0.5至1.0h后达到峰值⑺。有研究已经阐述了部分鱼类体表黏液中皮质醇的分泌机制，如海鲂鱼(Dicentrarchus labrax)⑻、鲤(Cyprinus carpio)、虹鱒等【问。不同鱼类体表黏液中的皮质醇水平存在明显的种间差异，七彩神仙鱼体表黏液中皮质醇质量浓度为20~60ng/mL，这一结果与方尾白菇鱼(Argyrosomus reg泌)体表黏液的测量值相近力。本实验中的皮质醇除平游期外，其他繁殖阶段的含量都相近。这说明七彩神仙鱼在整个繁殖周期中，除平游期外，雌雄鱼的应激情况相接近。雄鱼在平游期出现了皮质醇明显降低的情况，但雄鱼免疫球蛋白M、总蛋白、葡萄糖和乳酸在这一时期反而出现了一个明显升高的情况。可以推测皮质醇含量的升高可能对上述4种物质的分泌有抑制作用。在平游2周时雌雄皮质醇都出现了下降。这与在养殖过程中所观察到的仔鱼在上身14d左右离开亲鱼开始独立觅食的时间相吻合。当仔鱼开始独立觅食，仔鱼对亲鱼体表的啄食频率也逐渐变少，对亲鱼的刺激减弱，这与文献［2］中所描述的情况类似。
3.2七彩神仙鱼繁殖周期内免疫球蛋白M变化
鱼类的免疫分为非特异性免疫和特异性免疫，而无颌类鱼类体内只有非特异性免疫的存在，有颌类则
两者兼具⑴切。鱼类的特异性免疫通过免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)与T淋巴细胞(T-lymphocyte)来完成〔⑶。其中免疫球蛋白是在鱼类特异性免疫中发挥作用的主要物质。虽然相关研究中已经报道过硬骨鱼类拥有4种免疫球蛋白，IgM、IgD、IgZ与IgT，但只有IgM在硬骨鱼类的特异性免疫过程中发挥作用［"-，31o 国内外对皮肤黏液中的IgM已经有了相当多的研究，如南亚野鮫(Labeo rohita)、印度鲤(Catla catla)114、嫩(Siniperca chuatsi)、鲤"等。在哺乳动物哺乳时雌性会通过乳汁为幼崽提供免疫物质，其中包括免疫球蛋白M，这样能在哺乳动物幼崽还没有建立成熟的免疫系统时为其提供保护W由此推测七彩神仙鱼亲鱼体表黏液中的免疫球蛋白M也有类似的作用。虽然我们还不了解七彩神仙仔鱼多久可以建立起自身成熟的免疫系统，但根据平游2周亲鱼体表黏液中免疫球蛋白M都有一个明显的下降来推测，平游2周时可能仔鱼已经建立起了比较完整的免疫系统。斑马鱼仔鱼要4~6周来建立自己的免疫系统(闵。七彩神仙鱼的免疫球蛋白M由亲鱼直接提供，其周期可能更短。更高的免疫球蛋白M可能是亲鱼为了应对仔鱼啄食所带来的表皮损伤⑵。由于免疫球蛋白M是蛋白质的一种，因此免疫球蛋白M的多寡与总蛋白的多寡有很大的相关性。在本实验中，免疫球蛋白M呈现下降-上升-下降的规律。其中繁殖间期到孵化期这一阶段免疫球蛋白M出现下降，经观察与七彩神仙在这一时期体色明显变深的现象相吻合，这可能是七彩神仙鱼体内相关激素含量变化所导致的。除平游期外雌雄差异不显著，平游2周后雌鱼的免疫球蛋白M含量显著下降，这与亲鱼在两周左右结束“喂奶”的现象相吻合。
33七彩神仙鱼繁殖周期内总蛋白变化
鱼类体表黏液主要成分为水，含水量90%以±［，91o而经过烘干后蛋白质占干质量的比例在50%以上，这些蛋白质主要包括免疫球蛋白、抗体、溶菌酶、凝集素、补体以及一些肽类这些蛋白质是鱼类抵御外界病原侵害的第一道防线，是鱼类免疫系统的重要组成部分。另外体表黏液中还存在一些蛋白酶，例如组织蛋白酶、超氧化物歧化酶和胰蛋白酶等⑴)。鱼类受到外界刺激后，体表黏液会大量增多，而蛋白质作为黏液中除水以外的主要成分，其含量也会随之改变，因此有研究将体表黏液中总蛋白含量作为鱼体应激状况的评价指标⑴。大多数对鱼类体表黏液的研究中，只研究其中的免疫球蛋白或进行蛋白组学的检测l<20］o有文献表明，感染会导致体表黏液中总蛋白含量的降低。本实验中总蛋白的含量都呈现下降-上升-下降的规律。平游期雄性的含量过高可能是个体间差异所造成，繁殖间期到孵化期这一阶段下降这一现象，经观察与七彩神仙鱼在这一时期内体色明显变深的现象相吻合。而在平游2周雌雄都有显著的下降，这与亲鱼在两周左右结束“喂奶”相吻合。雌雄鱼在整个繁殖周期中总蛋白含量交替升高。由此
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