网络出版时间：２０２０－１１－４９：５４ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２０１１０３．０９１３．０２４．ｈｔｍｌ插入备注
野黄芩素改善高糖诱导小胶质细胞活化
引起的血脑屏障功能障碍
王梦娜，梅茜钰，陆 宾，徐 红
（上海中医药大学中药研究所，上海市复方中药重点实验室，中药标准化教育部重点实验室，
中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室，上海 ２０１２０３）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２０．１１．０１２
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２０）１１－１５４２－０６中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８４ １；Ｒ３２２ １２；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３２９ ２４；Ｒ５８７ １；Ｒ９７７ ６
摘要：目的 研究野黄芩素（ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ）对高糖诱导的小胶质细胞活化引起的血脑屏
障功能障碍的改善。方法 将神经小胶质细胞ＢＶ ２与小鼠脑血管内皮细胞ｂＥｎｄ ３共培养，建立血脑屏障细胞模型。跨内皮电阻实验和细胞渗漏实验检测内皮细胞屏障的损伤情况；酶联免疫吸附法测定ＢＶ２细胞上清中ＴＮＦ α的含量；免疫印迹法检测ｂＥｎｄ ３细胞中紧密连接蛋白，包括ｏｃｃｌｕｄｉｎ、ｃｌａｕｄｉｎ１、ｃｌａｕｄｉｎ５和ｃｌａｕｄｉｎ１９的表达。结果 用高糖诱导活化ＢＶ ２细胞或用ＴＮＦ α直接刺激ｂＥｎｄ ３细胞都会损伤ｂＥｎｄ ３细胞构成的细胞屏障，野黄芩素可逆转这种损伤。野黄芩素可以减少高糖诱导活化的ＢＶ ２细胞中ＴＮＦ α的分泌。ＴＮＦ α可以降低ｂＥｎｄ ３细胞中紧密连接蛋白ｃｌａｕｄｉｎ１、ｃｌａｕｄｉｎ５和ｃｌａｕｄｉｎ１９的表达，野黄芩素能够逆转ＴＮＦ α降低的ｃｌａｕｄｉｎ１和ｃｌａｕｄｉｎ１９蛋白表达。结论 野黄芩素可以阻断高糖诱导的神经小胶质细胞活化，减少炎性因子ＴＮＦ α的释放，缓解高糖诱导激活神经小胶质细胞和ＴＮＦ α直接刺激脑血管内皮细胞所导致的血脑屏障破损。
关键词：野黄芩素；血脑屏障；高糖；脑血管内皮细胞ｂＥｎｄ ３；神经小胶质细胞ＢＶ ２；ＴＮＦ α
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
收稿日期：２０２０－０４－１６，修回日期：２０２０－０７－２４
基金项目：上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划［ＮｏＺＹ
速度与激情三（２０１８ ２０２０） ＣＣＣＸ ５００２］
作者简介：王梦娜（１９９４－），女，硕士生，研究方向：中药药理学，Ｅ
ｍａｉｌ故事奶奶
英语知识树：７６１４９７８３２＠ｑｑ．ｃｏｍ；徐 红（１９６６－），女，博士，研究员，硕士生导师，研究方向：中药药效物质与质量标准，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｘｕ ｈｏｎｇｔｃｍ＠１６３．ｃｏｍ
中枢神经系统（ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ，ＣＮＳ）微血管内皮细胞对维持ＣＮＳ稳态有着至关重要的作富贵竹水培
学习理念
用，也是构成血脑屏障（
ｂｌｏｏｄｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒ，ＢＢＢ）的关键成分［１］
。据报道，糖尿病进程中的高糖环境会
引起微血管内皮功能障碍，会加速许多ＣＮＳ疾病进
程，包括中风、阿尔茨海默病和创伤性脑损伤［
２－４］
。ＢＢＢ是由高度特异性的ＣＮＳ微血管内皮细胞组成，许多脑疾病常伴有ＢＢＢ破坏，进而导致疾病发展的
加剧［５］
。在ＢＢＢ中，紧密连接（ｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｓ，ＴＪｓ）
蛋白主要包括Ｃｌａｕｄｉｎ和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ两大家族，主要功能为连接内皮细胞，封闭间隙，在维持血脑屏障功能和调节血管内皮通透性方面扮演了重要的角
色［６］。
need的过去式 野黄芩素（ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ）是从灯盏细辛（ｅｒｉｇｅｒｏｎ ｔｉｓｈｅｒｂａ）、木蝴蝶（ｏｒｏｘｙｌｉｓｅｍｅｎ）等具有抗炎镇痛中药中分离鉴定的活性单体成分，具有抗癌、神经保
北花园
护和抗炎等作用［７－９］。有报道发现，野黄芩素可抑
制缺氧诱导的血管内皮细胞增殖和血管内皮生长因子表达，从而有助于减轻糖尿病微血管并发症糖尿
病视网膜病的发生［１０］。本研究主要探讨野黄芩素
对高糖诱导激活神经小胶质细胞所介导的ＢＢＢ破损的改善作用。１ 材料
１．１ 药物 野黄芩素（ｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ，纯度≥９８％），购自上海益宏生物化工有限公司。
１．２ 细胞 小鼠脑内皮细胞株ｂＥｎｄ ３购自ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）；小鼠神经小胶质细胞ＢＶ ２得自上海中医药大学中药研究所吴晓俊老师
课题组馈赠。
１．３ 主要试剂 Ｏｃｃｌｕｄｉｎ（货号ｓｃ １３３２５６）、ｃｌａｕ ｄｉｎ １（货号ｓｃ １６６３３８）和ｃｌａｕｄｉｎ １９（货号ｓｃ ３９０２７４）抗体均购自ＳａｎｔａＣｒｕｚ（ＣＡ）；ｃｌａｕｄｉｎ ５（货号ＧＴＸ８４６８１）抗体购自ＧｅｎｅＴａｘ（ＡｌｔｏｎＰａｒｋｗａｙＩｒ ｖｉｎｅ，ＣＡ）；ａｎｔｉ ＲａｂｂｉｔＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（货号３１２ ００５ ００３）和ａｎｔｉ ＭｏｕｓｅＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（货号４１５ ００５ １６６）均购自Ｊ
ａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ（ＷｅｓｔＧｒｏｖｅ，ＰＡ）；酶联免疫吸附试验盒（ＥＬＩＳＡ）购自Ｒ＆Ｄ（Ｍｉｎｎｅａｐ ｏｌｉｓ，ＭＮ）；葡萄糖和其他试剂，除非另有说明，均购
·２
４５１·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２０Ｎｏｖ；３６（１１）：１５４２～７
